闪速纳米沉淀法包聚物纳米粒子中疏水亲水化合物的作用

1. 用 cij 混合器包聚聚合物 np 中疏水化合物的封装 准备和清洁设备。 采购并验证 cij 混频器。注: 有关施工指南, 请参阅补充信息第1节。cad 文件也可作为补充信息使用。 每次使用前, 请确保 cij 搅拌机上的所有配件都是舒适的, 出口管材不会弯曲或挤压。 在通风罩中, 将含有 2-3 ml 溶剂的5毫升 luer 锁注射器连接到每个入口适配器上。选择一种溶剂 (例如丙酮) 来清洁混合器中最近使用的任何化合物。注: 典型的选择是丙酮或四氢呋喃 (thf)。只使用聚丙烯注射器, 以避免溶剂兼容性问题, 如浸出。请勿使用带有橡胶 o 形圈密封柱塞的注射器。 将 cij 组装设置在废容器上。注意: 一个烧瓶与一个小的开放比 cij 身体工作得很好, 因为这支持混频器, 并允许轻松操作注射器。 在几秒钟内, 将注射器柱塞稳步按下, 通过混合室清空内装物。取出注射器。注意: 注射器可以保留并重复使用, 以便在 fnp 运行之间进行多轮清洗。 使用 n2 流擦干 cij 混合器内部。n 2线末端的男性 luer 适配器是有效的。注意: 如果清洁溶剂不挥发 (例如dmso), 请重复步骤 1.1.3-1.1.5 与丙酮或 thf, 然后再继续步骤1.1.6。去除残留溶剂是运行到运行的一致性的关键。 在目标成分处制备溶剂和抗溶剂流。 将疏水化合物 (即维生素 e) 溶解在不稳定的 thf 中, 以 10 mgml 的速度完成所需的 fnp 运行次数。每次运行准备的时间略高于所需的数量。注意: 其他溶剂可在这些步骤中使用, 但须遵守 “讨论” 部分中的限制。如果使用 thf, 则建议使用无稳定剂溶剂, 因为丁基羟基甲苯具有较低的水溶解度。请注意避免过氧化物积聚 (包括过氧化物测试), 并注意低水平的过氧化物可能会干扰某些 np 应用 (例如染料漂白)。 将维生素 e 溶液混合在涡流搅拌机上, 直到溶解。注意: 对于某些化合物, 1-2分钟的浴超声可能有助于产生溶解的溶液。重要的是所有 np 成分都是分子溶解的。 在与步骤1.2.1 约相同的 10 mgmml 体积下, 将 thf 中的嵌段共聚物稳定剂 (即聚 (苯乙烯)-b-聚 (乙二醇)、ps1.6k-b-peg 5k)溶解在 10 mgml 中形成聚合物溶液.注: 可使用其他溶剂, 但须遵守 “讨论” 部分中详述的约束。 将聚合物溶液与涡旋混合器混合, 直到溶解。如有必要, 将溶液放置在超声浴中 1-2分钟, 以帮助固体溶解。注意: 聚合物不能为胶束形式。动态光散射 (dls) 可以是确定新的流组合是否符合此标准的有用工具。 通过先将维生素 e 溶液的0.25 毫升输送到 1.5 ml 离心管中, 创建含有 5 mg\ ml 维生素 e 和稳定剂 (50% 维生素 e 负载) 的溶剂输入流。然后将0.25 毫升的聚合物溶液放入同一管中。注意: 对于不同的注射器尺寸, 每次运行大于 0.5 ml 的卷是可行的。在10毫升以上的输入体积, 使用注射器泵是可行的。 在涡流混合器上混合良好, (可选择), 离心管在 1000 x g 为 5-10 s, 以恢复任何液体粘在瓶盖, 这提高了 cij 运行之间的重现性。 将0.525 毫升的去离子水输送到第二 1.5 ml 离心管中, 作为抗溶剂流。注: 最好有多余的抗溶剂, 这可以确保溶剂流永远不会进入混合室没有抗溶剂存在。在溶剂-溶剂-溶剂混合物中的盐溶解度不受限制的情况下, 可以使用缓冲水系。 将4毫升的去离子水放入20毫升闪烁小瓶或其他合适的容器中作为淬火浴。在小瓶中放置一个小的磁搅拌杆。注: 淬火浴通过将最终溶剂含量降低到 10%的 15,17, 从而降低了奥斯特瓦尔德的成熟。此卷可以进行调整以解决过程约束, 并且可以使用输入流卷直接缩放。 利用 cij 混频器生产 np。 将打开的淬火浴瓶放置在清洗后的 cij 搅拌机下方的搅拌板上的烟罩中。一个实用的配置使用一个50毫升的试管架块, 以支持 cij 搅拌机与小瓶下面和出口管定向到小瓶。有关方向, 请参见图 1 a。 开始搅拌淬火浴通过磁搅拌棒在75% 左右的最大速度。 使用装有钝尖针的1毫升聚丙烯注射器, 从抗溶剂管中提取全部体积。注意: 请勿使用含有橡胶 o 形圈密封件的注射器, 以避免兼容性问题。对于较大的入口容量, 请使用适当大小的 luer 锁管注射器。注射器出口必须以注射器轴为中心, 否则在抑郁期间会不稳定。 小心地取出注射器上的所有气泡, 取出钝尖针, 放入锐器容器中。 将柱塞的柱塞, 使流只是到注射器的开口。将注射器连接到 cij 入口的一个配件上。 重复溶剂溶液 1.3.3-1.3.5 步骤。 根据个人喜好, 将手的球、手掌或每个拇指放在柱塞的顶部, 从而快速、平稳、均匀地按压注射器。在淬火浴瓶中收集废水。注意: 0.5 ml 输入应在不到0.5秒的时间内抑制。 把 cij 搅拌机放在一边,注射器还贴着.取下搅拌棒并盖上小瓶, 小瓶现在包含具有核壳颗粒结构的 np 分散体 (图 1c)。 将搅拌机放在废物溶液容器上, 然后取出注射器。然后, 保持的体积 (约0.25 毫升) 将排出。在下一次 fnp 试验之前, 处理使用过的注射器并重复清洗步骤1.1。注意: 不要让滞留量清空到包含 nps 的小瓶中, 因为这会对样品的均匀性产生负面影响。 对 np 分散进行分析和后处理。 为了使用 dls 表征 np 尺寸, 将 np 分散器的移液器100μl 插入塑料立方体, 并添加900μl 的淬火槽槽溶剂 (例如,水)。注意: 较小的卷可用于小批量集杯。10倍稀释通常就足够了。 通过上下移液或轻微晃动, 很好地混合。按照特定于仪器的说明分析示例。注: 可根据需要进行 zeta 电位分析或电子显微镜等替代表征技术。np 色散可以根据应用程序的要求进行进一步处理, 并在讨论部分进行审查。 2. 用 cij 混合器封装倒置 nps 中的亲水化合物 在烟罩中制备溶剂、抗溶剂和淬火溶液。 完成步骤1.1 中描述的清洁和准备过程, 使用 dmso 作为清洁溶剂, 并在步骤中坚持说明1.1.6 完成使用 thf 的第二次冲洗。 在 dmso 中以 10 mg/的体积将亲水性化合物 (即麦芽糊精 (md) 与葡萄糖当量 (de) 4-7、平均分子量 = 3 275 g/mol、”3k md”) 溶解在10mgml 中, 以完成所需数量的 fp 运行。注: 可使用其他溶剂, 但须遵守 “讨论” 部分中概述的限制。 将麦芽糊精溶液与涡旋混合器混合, 直到溶解。如有必要, 将溶液放置在超声浴中 1-2分钟, 以帮助固体溶解。 在 thf 中创建一个嵌段共聚物稳定剂 (即聚 (苯乙烯)-b-聚 (丙烯酸), ps5k-b-paa 4.8k)库存溶液, 其体积与步骤2.1.2 约相同, 以形成聚合物溶液.注: 可使用其他溶剂和稳定剂浓度。dmso 可以很容易地用作溶剂, 代替 thf。 将聚合物溶液与涡旋混合器混合, 直到溶解。如有必要, 将溶液放置在超声浴中 1-2分钟, 以帮助固体溶解。注意: 聚合物输入不能为胶束形式。dls 可用于确定新的流组合是否符合此条件。 在 1.5 ml 离心管中依次结合以下各项, 制备溶剂流输入 (0.5 ml): 3k mL 溶液 0.250 ml, 聚合物溶液 0.250 ml, 去离子水 0.250 ml。注: 该河流的含水量对 np 尺寸和多分散性有很大影响。一般情况下, 最好在 2.5-10 vol%范围 20下运行。该范围高端的值可能有助于大分子量化合物的封装。 在涡流混合器上混合5-10。 或者, 将管以 1000 x g 的速度离心 5-10, 以回收粘附在瓶盖上的任何液体, 从而提高 cij 运行之间的重现性。 在 25.0 mg/ml 的情况下, 在甲醇中制备氯化钙 (ccl2) 的交联剂溶液。注意: 交联剂将以1:1 电荷比添加到 paa 块中的酸基团。如果使用不同的交联剂, 或者使用不同的 paa 块大小或聚合物浓度, 则相应地调整浓度20、21。 通过将 0.5 ml 的氯仿和0.05 毫升的交联剂溶液 (共0.55 毫升) 输送到微离心管中, 制备抗溶剂流。注: 其他可接受的抗溶剂由块状共聚物的选择决定, 通常包括二氯甲烷或丙酮。用额外的 np 分散体来增加交联剂, 使其加入淬火浴, 从而形成交联 20. 在涡流混合器上混合5-10。 或者, 将管以 1000 x g 的速度离心 5-10, 以回收粘附在瓶盖上的任何液体, 从而提高 cij 运行之间的重现性。 在20毫升闪烁小瓶中加入4毫升的抗溶剂 (即氯仿), 形成淬火浴。在小瓶中放置一个小的磁搅拌杆。注意: 此卷可以进行调整, 以解决过程约束。 完成步骤1.3 中所述的 np 形成协议。 对 np 分散进行分析和后处理。 为了用 dls 表征 np 尺寸, 将 np 分散器的移液器100μl 放入玻璃杯中, 加入900μl 的溶剂用于淬火浴。 通过上下移液或通过立方的光搅拌很好地混合。按照软件说明分析示例。注: dls 可以使用 dmso 或二甲基甲酰胺 (dmf) 等良好溶剂作为 dls 稀释剂20对 nps 的交联进行定性评估.稳定交联的粒子在溶剂中表现出自相关函数, 粒径变化最小。弱交联粒子膨胀, 表现出弱的自相关函数和散射强度21。 (可选) 添加一个基座, 如氨, 以驱动离子络合, 并加强颗粒核中的交联。 (可选) 使用氢氧化铵溶液 (通常为 30 wt% 的氨), 在甲醇中使用重胺法制备一个 3.48 mg/ml 氨溶液。在搅拌时滴注 50μl (即与聚合物上的酸基团有关的0.6 当量)。注: 如果需要, 可以通过改变浓度或增加的体积 25来调整等价物。 (可选) 年龄不少于 30分钟, 轻度搅拌, 进行交联。 处理 np 分散体, 产生微粒子或涂层 np, 如文献19、20、21 所述。 3. 使用μmivm 封装倒置 np 中的卵华蛋白 准备溶剂和溶剂溶液。 在去离子水 (“ova”) 中制备 50 mg/ml 的卵白蛋白溶液。 用 dmso 的0.675 毫升稀释 ova 溶液的 75μl, 在 dmso 中制备含有10% 水的 5 mg/ml ova 溶液, 从而在 1.5 ml 离心管中制备溶液 a。如前面所述, 将离心机简单地混合好。注意: 有关水的影响, 请参见步骤2.1.6。与前面几节一样, 解决方案卷可以放大或缩小, 以满足材料需求。 通过溶解 dmso 中的块状共聚物稳定剂 (即聚 (苯乙烯)-聚 (丙烯酸),ps5k-b-paa4.8k), 以6 mg/ml 的速度制备溶液 b。如果需要, 可以很好地混合和溶解。将 0.75 ml 移液器放入 1.5 ml 离心管中。 将0.75 毫升的 thf (溶液 c) 移液器放入 1.5 ml 离心管中。 移液器1.85 毫升氯仿 (溶液 d) 变成玻璃闪烁小瓶。 在甲醇中制备 60.0 mg/ml 氯化钙交联剂溶液。使用涡流混合器进行混合。 按照步骤2.3.4 中的说明, 在甲醇中制备 4.17 mg/ml 氨溶液。 在15毫升离心管中加入5.25 毫升氯仿作为淬火槽。 准备搅拌机总成和支架。 收集底部接收器、混合几何盘、顶部盘、扳手扳手和 o 形圈。有关组件和混频器支架术语的示意图, 请参见图 2 。注: 有关 mivm 结构的详细信息可在补充信息(第1节) 和文献22中找到。cad 文件也可作为补充信息使用。 将 o 形圈放入凹槽中, 确保其配合良好, 且没有磨损或损坏的迹象。注意: 正常操作会导致磨损或溶剂膨胀的 o 形圈。如果 o 形圈出现拉伸或变形, 请让其在使用前连夜干燥。如果形状不能在一夜之间恢复, 请处理 o 形圈。保持大量的库存, 因为这是一个消费品部分。 小心地将混合盘孔与顶部圆盘上的挂钩对齐, 然后将其推上一起。通过检查两个部分齐平, 确保 o 形圈不会被移位。 反转这两个部分, 并手动组装它们与底部的接收器。确保出口管件已松开, 以免干扰磁盘的完全拧紧。注: 如果螺纹在装配过程中被卡住, 请小心拆卸并将食品或医药级的防卡住剂涂在螺纹上, 以防止磨损。 手动拧紧后, 将扳手扳手安装在顶部的圆盘挂钩上, 并紧紧地拧紧组件。然后拧紧出口管接头, 使其牢固地固定在混合几何的底面上。确保顶部磁盘上的注射器配件是舒适的。 将组装好的搅拌机放在搅拌机支架上, 使出口管材延伸到支撑板下方。支持移动板, 使其悬挂在工作空间之外。 或者, 若要检查机械停止对齐, 请首先将空玻璃注射器连接到混频器入口。注: 使用不同筒直径的注射器可以改变体积流量, 因为注射器以相同的线性速度同时抑制。初始和最终垂直高度对于所有注射器必须相同, 并且可以使用进入柱塞轴22的固定螺钉进行调整。机械停止可确保玻璃注射器不会受到过度损坏。 或者, 降低移动板, 使其在机械停止上休息。确保这些都是对齐的, 以便在接触空注射器之前, 板也会立即停止工作 (如图 2所示)。 (可选) 根据需要放松机械停止和重新定位。取出玻璃注射器, 并将移动板复位。注意: 使用塑料注射器时, 不需要机械停止。 将打开的淬火槽放在出口管的下方, 以收集废水。 使用钝尖针将溶液 a 放入1毫升气密注射器中。取出所有气泡并处理针头。将溶液提供给注射器 luer 管接头的末端。对解决方案 b 和 c 重复此过程。 使用钝尖针将溶液 d 放入 2.5 ml 气密注射器中。取出所有气泡并处理针头。将溶液提供给注射器 luer 管接头的末端。注意: 选择这些卷是为了使最初的注射器柱塞高度相同。如果卷发生更改, 它们仍然必须满足此高度要求。 按字母顺序按顺时针顺序将四个注射器组装到搅拌机上。有关最终外观和注射器方向示意图, 请参见图 1 b 。注意: 检查注射器高度是否与其他注射器有显著差异, 并根据需要进行故障排除。 执行搅拌机操作和清洗。 抓住移动板两侧的轴承外壳。不要将手指放在外壳的底面上, 因为这是对机械停止的夹紧危险。慢慢降低移动板, 使其处于均匀的休息状态, 但几乎没有接触注射器。 稳定而平稳地压压板材, 目标是在这些流卷22的 0.5-1 s 左右完成操作。 拆卸并封盖淬火浴管, 该管现在包含 np 分散体。 拿上注射器, 注射器还贴在一起, 并把它固定在一个废弃的容器上。取出注射器, 使堵塞的体积流入容器。将搅拌机组件正面固定, 然后使用扳手拆卸搅拌机。 使用喷雾瓶, 用几毫升溶剂 (如丙酮) 冲洗出口油管, 并用空气或氮气干燥。 用良好的溶剂 (如去离子水或 dmso) 冲洗混合几何形状, 然后用从喷雾瓶中使用几毫升的丙酮冲洗。用空气或氮气流干燥。 用去离子水冲洗 o 形圈, 并使其干燥。 用溶剂瓶用几毫升的丙酮彻底冲洗顶部的圆盘, 直到视觉上干净为止。用空气或氮气流干燥的表面和注射器配件。 用几毫升的好溶剂 (如去离子水或丙酮) 从溶剂瓶中冲洗每个注射器。在下次使用前, 用几毫升的丙酮和空气干燥的最后冲洗剂。 执行后处理和分析。 在以最大速度约75% 的速度搅拌时, 滴注50μl 的二水交联剂溶液。 在以75% 的最大速度搅拌时, 滴注50μl 氨溶液。年龄至少30分钟。 描述 np 大小, 如步骤2.3.1 和2.3.2 中所述。 处理 np 分散体, 产生微粒子或涂层 np, 如文献19、20、21 所述。 4. 配方放大的修改 按照步骤1、2或3中所述, 按所需的成分并以足够的体积准备溶剂和溶剂溶液, 以达到所需的配方尺寸。 (可选) 在 np 形成之前, 使用合适的协议对混合器进行清洁和消毒。注: 过去曾使用过 cip 100、水 (至中性 ph 值)、cip 200、水 (至中性 ph 值) 和合适溶剂的顺序冲洗。此外, 在最终粒径排除过滤灭菌的情况下, 无菌过滤器可以连接到搅拌机的入口。 将溶液装入合适体积的气密注射器中, 并在末端安装一个 luer 适配器, 以连接聚四氟乙烯 (ptfe) 管材。手动将解决方案提供给管道末端。 根据需要将注射器装入注射器泵, 并根据需要将注射器连接到 cij 或 mivm 上的混频器入口。注意: 或者, 流量控制器可以在实验室或试点规模使用, 以提供比注射器泵更大的体积能力。成功的操作需要稳定的流量和足够的压降, 这意味着出口上有流量计量的加压容器是大规模生产最合适的选择。 如果需要, 将装有足够体积的淬火槽的收集容器放置在出口管下面。 设置体积流量以匹配手动实现的流量 (例如,每个流大约 30-60 mL/min)。注意: 如果使用 cij, 泵的流量必须相同。如果使用 mivm, 不同的入口可能具有不同的流量。 同时开始泵。在一个小瓶中收集大约5-10 毫升的废水作为废物 (这是一个 “启动量”), 然后开始在淬火浴中收集。 如上面相应的配方一节所述的特性和过程。