Microben hebben zich in de loop van de tijd ontwikkeld om te bezetten en gedijen in verschillende ecologische niches zoals de open fysieke grenzen van de bodem en het water, onder andere¹. In deze niches zijn microben vaak betrokken bij de directe concurrentie voor beperkte middelen; belangrijk, voor voedingsstoffen die ze gebruiken voor de ondersteuning van hun groei of ruimte, die ze nodig hebben om de groeiende bevolking^2,3tegemoet te komen. In bepaalde gevallen kunnen sommige holozoïneorganismen zoals amoeba zelfs op crypto Kokken-cellen worden voorgedate als een manier om voedingsstoffen uit hun biomassa te halen^4,5. Op hun beurt, dit maakt het mogelijk dergelijke organismen om territoriale dominantie te vestigen via het beheersen van de populatie aantallen van zijn prooi. Vanwege deze roof druk kunnen sommige prooien worden geselecteerd om microbiële factoren te produceren, zoals de crypto Kokken capsule⁶, om de negatieve effecten van de druk te verzoenen. Echter, als een onbedoelde gevolg van deze druk, sommige microben verwerven factoren die hen in staat stellen om de soort barrière passeren en zoeken naar nieuwe niches te koloniseren⁷, zoals de besloten ruimten van het menselijk lichaam die rijk zijn aan voedingsstoffen en hebben ideaal Voorwaarden. De laatste kan uitleggen hoe een terrestrische microbe als Cryptococcus (C.) coccus kan transformeren om pathogeen te worden.

Te dit doel, het is belangrijk om te bestuderen van het eerste contact dat crypto Kokken cellen kunnen hebben met amoeba en hoe dit hen kan selecteren om pathogeen te worden. Specifieker, dit kan aanwijzingen geven over hoe crypto Kokken cellen zich gedragen wanneer ze worden opgevolgd door macrofagen tijdens infectie. Het is om deze reden dat amoeba hier werd gekozen als model voor macrofagen, omdat het relatief goedkoop en gemakkelijk is om een cultuur van amoeba in een laboratorium⁸te handhaven. Van belang was ook onderzoeken hoe crypto Kokken secundaire metabolieten viz. 3-hydroxy vetzuren^9,10 invloed op de interactie tussen eencellige en crypto Kokken cellen.

Een eenvoudige manier om de interactie tussen amoeba en zijn prooi met het blote oog te waarnemen, is het creëren van een gazon met behulp van de prooi op het oppervlak van een agar plaat en spot amoeba. De visualisatie van plaques of heldere zones op de agar plaat toont gebieden waar amoeba op zijn prooi kan hebben gevoed. Echter, op dit macroniveau, alleen de uitkomst van het proces wordt opgemerkt, en het proces van fagocytose is gemechaniseerd kan niet worden waargenomen. Daarom, om het proces op een cel-naar-cel-basis te waarderen, zijn er verschillende microscopische methoden die^11,12kunnen worden gebruikt. Een omgekeerde Microscoop met een incubatie kamer kan bijvoorbeeld worden gebruikt om een timelapse van gebeurtenissen tussen een phagocytische cel en zijn doel¹³op te nemen. Helaas, vanwege de kosten van een microscoop met een time-lapse-functionaliteit, is het niet altijd mogelijk voor laboratoria om een dergelijke Microscoop te kopen, vooral in bron arme instellingen.

Om de bovenstaande beperking te omzeilen, presenteert deze studie een sequentieel verkennend ontwerp dat de interactie van C. coccus viz c. coccus uofs Y-1378 en C. coccus lmpe 046 met Acanthamoeba castellani evalueert. . Ten eerste wordt een kwalitatieve methode gebruikt die voorafgaat aan een kwantitatieve methode. Stilstaande beelden worden vastgelegd met behulp van een omgekeerde fluorescentiemicroscoop, evenals een transmissie-elektronen microscoop om amoeba-Cryptococcus interacties weer te geven. Dit werd gevolgd door het kwantificeren van fluorescentie met behulp van een plaat lezer om de efficiëntie van amoeba te schatten om crypto Kokken cellen te internaliseren. Bij het afstemmen van de bevindingen van deze methoden tijdens de Data-interpretatie fase, kan dit net zo veel kritieke informatie onthullen als het gebruik van een fagocytose timelapse-video.