Summary

꿀 꿀벌 (Apis mellifera) 노동자의 Hypopharyngeal 동맥 Acinus 크기 측정

Published: September 14, 2018
doi:

Summary

Hypopharyngeal 선 acinus 크기 간호사 꿀 꿀벌 영양의 강력한 척도 이다. 여기, 우리는 해 부, 얼룩, 이미징, 및 간호사 꿀벌 hypopharyngeal 선 acini 측정에 대 한 상세한 프로토콜을 제공 합니다.

Abstract

간호사 hypopharyngeal 땀 샘 작업자 및 애벌레와 퀸 즈 개발을 먹이 로얄 젤리의 단백질 분수를 생성 합니다. 꿀벌의 머리에 있는이 쌍된 샘 수량 매우 민감합니다 그리고 꽃가루와 꽃가루의 품질 대체 간호사 꿀벌 소비. 샘의 얻을 때 간호사 결핍 다이어트를 먹이 큰 때 그들은 완벽 한 다이어트를 먹이 작은. 간호사 hypopharyngeal 동맥 크기 간호사 영양의 강력한 지표 이기 때문에 그 꿀 꿀벌 영양 공부이 동맥을 측정 하는 방법을 알고 필수적 이다. 여기, 우리는 해 부, 얼룩, 이미징, 및 간호사 비 hypopharyngeal 분 비 측정에 대 한 자세한 방법을 제공 합니다. 우리는 흠 없는 스테인드 조직과 선 크기에 꽃가루의 영향을 공부 하는 데 사용 된 데이터의 비교를 제시. 이 방법은 어떻게 다이어트 hypopharyngeal 선 크기에 미치는 영향 하지만 하이브 건강에서이 동맥의 역할을 이해 하기 위한 추가 사용은 테스트에 사용 되었습니다.

Introduction

그들은 인간과 동물에 의해 소비 작물의 다양 한 꽃가루 때문에 꿀벌은 농업 필수품입니다. 많은 관심 지급 되었습니다 꿀 꿀벌 인구 쇠퇴에 식민지 손실 가져가 약 30-40%로 미국1 년 및 유럽2,3에서 10-15%. 다 수 요인, 높은 품질에 감소 등 마 초, 꿀 꿀벌 건강에 부정적인 영향을 줄 가능성이 함께 행동. 단, 가뭄, 지속 양 봉 관행, 및 다른 요인 감소 자연 꽃가루 식민지4,5수의 양과 다양성. 꿀벌 꽃가루에서 거의 모든 그들의 규정식 단백질과 지질을 파생, 때문에 꽃가루를 감소 액세스 심각 하 게 개인 및 식민지 상태를 제한할 수 있습니다.

Hypopharyngeal 땀 샘 분 비 구조 꿀벌의 머리는 눈과 뇌6사이 위치 하 고 있습니다. 정상적인 상황에서 동맥의 발달 및 기능 궤적에 있는 꿀벌의 거울. 나이의 대략 5-10 일에 꿀벌 통에 간호 동작을 수행합니다. 이 동시에 hypopharyngeal 땀 샘의 피크 크기와 가만히 음식이 나 애벌레 및 여왕 같은 다른 성인 개발 먹이 젤리의 주요 단백질 분수 생산 분 비 용량에 도달. 이 최대 크기에는 땀 샘 닮은 각 포도 개별 엽 구조는 acinus로 알려진 포도의 무리 (복수: acini). 작업자 꿀벌 세 고 하이브에 다른 작업에, hypopharyngeal 분 비 축소와 설탕 꿀7,8에 뜨 같은 다른 기능에 걸릴. Hypopharyngeal 땀 샘은 따라서 꿀벌과 그들의 나이 관련 된 작업의 시대와 상관 된다.

간호사 hypopharyngeal 선 크기는 그들의 다이어트9,,1011에 단백질의 품질과 수량에 민감합니다. 간호사 꿀벌 잘 영양은 때 그들의 분 비는 큽니다. 반면, 동맥은 작은 때 꿀벌은 박탈 꽃가루의 성인 개발의 첫 번째 주에 특히. 간호사 꿀벌의 영양 상태를 파악 하기 위해 연구자는 일반적으로 hypopharyngeal 동맥, 동맥 acinus 크기11,12,,1314 를 직접 측정 하 여 측정 또는 단백질은 단백질을 측정 하 여11 콘텐츠 또는 신선한17 그들이 있는 전체 머리의 무게15,16 콘텐츠. 각 메서드는 그것의 자신의 찬 부 양론. 이 메서드는 두 가지 주요 방법으로 도전 될 수 있지만 선 acini 측정에서 얻은 해상도 선호 하 고. 첫 번째 과제는 제대로 파악 하 고 선 해 부입니다. 두 번째는 각 acinus의 정확한 측정을 얻는 이다. 해 빛 현미경 동맥 명확 하 고 또는 밀키 화이트 나타나고는 acini의 국경을 정의 하기 어려울 수 있습니다. 도구가 더 나은 acini의 가장자리를 정의 하 고 정확한 선 측정을 얻기의 가능성을 증가 꿀 꿀벌 영양 공부 하는 사람에 게 도움이 됩니다.

여기, 우리가 관심이 연구원은 해 부, 얼룩, 이미지, acinus 크기의 정확한 측정을 얻을 수 있도록 hypopharyngeal 동맥을 측정 하는 방법을 보여줍니다. 우리가 설명 하는 방법에서 일단 고 실험은 충분히 연습 시간의 상대적으로 짧은 기간에 여러 선 측정을 달성 하기 위한 쉽게, 정확 하 고 복제할 방법을 연구를 제공 합니다. 하나 자신 있게 한 시간에 거의 10 개인의 분 비를 측정할 수 있습니다. 우리는 방법 및 재료이 측정을 얻는 데 필요한 정보를 제공 합니다. 아래에 설명 된 방법 중 가장 중요 한 측면은 적절 한 해 부와 땀 샘의 얼룩 있습니다. 비록 우리가 확대 이미지 캡처하고 acini 상용 소프트웨어와 측정, 우리가 제시 하는 방법을 쉽게 다른 플랫폼18에 적용할 수 있습니다.

Protocol

1. 해 부하 고 간호사 노동자에서 Hypopharyngeal 땀 얼룩 작은 (60 m m x 15 m m) 또는 대형 (100 m m x 15 m m) 유리 페 트리 접시에 멋진 설정 왁 스를 용 해 하 여 왁 스 해 부 접시를 확인 합니다. 해에 대 한 접시를 사용 하기 전에 왁 스를 완전히 냉각 하십시오. 처리에 각 벌 준비 Giemsa 솔루션 작업 1시 20분의 20 µ L (1: 20의 v/v 준비 인산 염 버퍼 식 염 수에 Giemsa 얼룩 (PBS: 137 m NaCl, 2.7 m m KCl, 10mm ?…

Representative Results

Hypopharyngeal 땀 샘 간호사 노동자에서 해 부 되었고 60-80 X 확대 (그림 1)에서 얼룩 없이 시각. 흠 없는 조직에 완전히 집중 하 고는 acini의 가장자리를 정의 적절 한 대비를 찾을 하기가 어렵습니다. 얼룩진된 조직에는 acini의 가장자리는 스테인드 조직과 흰색 배경 사이의 향상 된 명암으로 인해 날카로운. <i…

Discussion

Hypopharyngeal 선 크기 단백질과 다이어트에 꽃가루의 금액에 민감한 이며 젊은 성인 꿀벌 영양의 중요 한 표식입니다. 여기, 우리는 부하이 조직을 측정 하는 저렴 하 고 재현할 수 방법을 보여 줍니다. 이 조직, 해 부 하기 어려울 수 있습니다 하지만 연습, 하나 상대적으로 그대로 조직으로 점점 청소기 해를 얻을 수 있습니다. 여기에 제시 된 방법의 주요 장점은 그 조직 이다 스테인드, 각 선 acinus?…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 미국 농 무부-ARS에서 내부 자금에 의해 지원 되었다 (프로젝트 번호: 2022-21000-017-00-D). ARS/미국 농 무부는 평등한 기회 고용주 및 공급자.

Materials

Cool setting wax Grobet USA 21.450
Glass petri dish, small VWR 89000-310
Glass petri dish, large VWR 89000-314
Super Max Wax Pen Eurotool PEN-520.00
Breakable razor blades Electron Microscopy Sciences 72004
pin vise BioQuip 4845
2A-SA flat/rounded tip forceps Rubis/BioQuip 4522
Fine point forceps Rubis/BioQuip 4523
5A-SA super fine point forceps Rubis/BioQuip 4525
10 mm micro spring scissors BioQuip 4715
3 mm micro spring Vannas scissors Roboz RS-5610
Glass Depression Slides, Single Cavity GSC International 4-13057-DZ-12
PBS tablets VWR 97062-730
Giemsa stain, modified solution Sigma Aldrich 32884
Insect pins ENTO SPHINX S.R.O. 02.02
Leica Applications Suite measurement software Leica Microsystems any measurement software, including free software, can be used

Referências

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Citar este artigo
Corby-Harris, V., Snyder, L. A. Measuring Hypopharyngeal Gland Acinus Size in Honey Bee (Apis mellifera) Workers. J. Vis. Exp. (139), e58261, doi:10.3791/58261 (2018).

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