Внутрипросветная накаливания окклюзией средней мозговой артерии является наиболее часто используемым в vivo модель экспериментальной инсульта в грызунов. Альтернативный хирургический подход к позволить общей сонной артерии ремонт производится здесь, что позволяет реперфузии общей сонной артерии и полной реперфузии на территорию средней мозговой артерии.
Ишемический инсульт является одной из основных причин взрослых долгосрочной инвалидности и смерти во всем мире. Современные методы лечения доступны ограничены, с только ткани плазминогена активатор (ДТС) как утвержденные наркологической целевой ишемических инсультов. Текущие исследования в области ишемического инсульта фокусируется на лучшего понимания патофизиологии инсульта, развивать и расследовать Роман фармацевтических целей. Надежный ход экспериментальной модели имеют решающее значение для прогрессирования потенциальных методов лечения. В средней мозговой артерии окклюзии (СМАо) модель клинически значимых и наиболее часто используемые хирургические модель ишемического инсульта в грызунов. Однако итоги этой модели, такие как объем поражения, связанные с высоким уровнем изменчивости, особенно у мышей. Альтернативная модель СМАо, описанные здесь позволяет реперфузии общей сонной артерии (ОСО) и повышенной перфузии на территории средней мозговой артерии (MCA), используя блокнот ткани с фибриноген основанные герметик для ремонта судна и улучшенной благосостояние мышей, избегая перевязки наружной сонной артерии (ЭКА). Это уменьшает зависимость от круга Уиллиса, который считается весьма анатомически переменной у мышей. Репрезентативные данные показывают, что используя этот альтернативный хирургический подход уменьшается изменчивости объема поражения между традиционным подходом СМАо и альтернативный подход, описанный здесь.
Одной из основных причин церебрального инсульта является фокуса ишемии на территории средней мозговой артерии. Ткани активатор плазминогена (ДТС) является только медикаментозное лечение, доступных с доказанной эффективностью, несмотря на многочисленные испытания лекарств, предназначенных для ишемического инсульта1,2. Однако из-за соображений безопасности и узкого терапевтического окна (< 4,5 ч), только ~ 15% всех пациентов, перенесших инсульт, имеют право получать ДТС, и ставки реканализация может быть < 50%3,4.
Воспроизводимость и клинически значимых Животные модели инсульта являются важными для информирования о разработке новых и потенциальных инсульта терапевтического лечения. Однако из-за опасений относительно последовательности и изменчивости в решениях с животных моделей, по-прежнему важно уточнить существующие в естественных условиях модели улучшить перевод от доклинические исследования в клинику. Постоянной озабоченности для инсульта исследований5является отсутствие перевода от доклинические экспериментальные эффективности потенциальных методов лечения для клинического использования. Причины неудачи перевода могут быть несколько и может быть связано с, например, суда дизайн, лечения задержки, неоднородность клинических инсульта, и ограничения животных моделей используется6. Ключевой задачей для исследований инсульт остается развитие безопасного и эффективного лечения.
Окклюзии средней мозговой артерии (СМАо) путем вставки внутрипросветная накаливания является наиболее часто используемых в vivo грызунов модель экспериментальной инсульта. Эта модель позволяет восстановление кровотока после ишемии индукции, подражая события, которые происходят в человека инсульта7. Однако в частности в мышей, гетерогенных поражения томов с разнообразных стандартных отклонений происходят даже несмотря на то, что определено хирургические протоколы являются прикладной8,9,10. Это типичный чтобы увидеть Бимодальная распределение малых полосатой и большой striato корковых поражения тома11. Чтобы побудить ишемии, накаливания обычно вставляется через разрез ОАС или ЭКА, которая затем оставаться постоянно перевязаны12. Постоянный лигирование ОСО предотвращает восстановление кровотока в внутренней сонной артерии (МКА) и, впоследствии, на территории MCA. Это вызывает реперфузии быть зависит от обеспечения поставок в круг Уиллис (Корова). Корова имеет анатомическая вариабельность между отдельных животных, особенно в C57BL/6 мышей а сорт обычно используется в в естественных условиях ход исследований13. Альтернативный метод, накаливания вставки через ЭКА, разрешить продолжение перфузии через ОСО, но этот метод компромиссов артериальной поставки на территории ЭКА, который был проявлен в крыс, чтобы иметь пагубное воздействие на животных благополучие14.
Опора на корову для обеспечения снабжения и реперфузии в установленной модели СМАо может частично, приходится изменчивости объема поражения, после окклюзии. Мы описываем альтернативным мышиных хирургическая процедура, где избегается ЭКА перевязки и отремонтированы разрез ОАС, таким образом позволяя реперфузии через ОСО, независимо от коровы. Ремонт ОСО разрез ранее показано в крыс приведет к успешной реперфузии через ОСО15. Мы применили этот подход успешно в мышей11 и сообщить здесь протокол, который приводит к сокращению изменчивости объема поражения, главным результатом измерения, используемых в экспериментальной ход исследований.
В этом протоколе мы продемонстрируем провести СМАо через ОСО судна накаливания вставки следуют ОСО судно ремонт, который включает в себя ткани pad и герметик приложение разрешить реперфузии.
Накаливания индукции переходных СМАо грызунов является наиболее часто используемые модели экспериментальной инсульта, поскольку она позволяет реперфузии в пострадавшие районы, подражая возникновение событий после клинических ишемического инсульта7. Здесь это альтернативный хирургический подход к традиционным методом накаливания индуцированной переходных СМАо мышей. Альтернативный подход, использующий анальгезии лечения, избежания лигирование ЭКА и ОСО разрез ремонт, результаты в снижение изменчивости LV при оценке с использованием МРТ и гистологической пятная методы11.
Традиционные подходы к побудить СМАо во многом полагаются на перерезка, или по крайней мере перевязки, ЭКА, который был проявлен, крыс, чтобы повлиять на питьевой поведение и увеличение веса тела после СМАо14. Протокол, определенный здесь, в мышей, с уклонением ЭКА перевязки и дополнением анальгезию предложил сократить потери веса тела после СМАо с не влияет на объем поражения. Использование обезболивания избежать или по крайней мере не сообщается, в большинстве исследований экспериментальных инсульта, из-за возможных накладывающееся воздействие на итоги экспериментальных. Однако избегая анальгезии полностью не всегда оправдано, и есть необходимость сбалансировать потребности Благосостояние животных с достижения научных целей.
Различия в животных размер, сорт и цереброваскулярные анатомии, помимо размера и типа вариации накаливания, предлагается оказывать влияние на ход результаты23,24. Альтернативный подход, описанный здесь избежать зависимость корова при реперфузии, тем самым уменьшая, по крайней мере, частично, изменчивость, видели между животными объема поражения. Анатомии коровы очень переменной в мышей, в частности в C57BL /6 штамм, который часто используется в экспериментальной ход исследований. 90% мышей C57BL/6 имеют неполные коровы из-за разнообразных задняя общения артерии (PcomA) проходимости, которые могут иметь влияние на объем ишемического повреждения из-за недостаточной перфузии структур за пределами территории MCA13, 25. ремонт ОАС в мышей, как показано здесь, результаты в восстановлении крови течь через ОСО в области ишемической, как описано ранее в крыс15. Репрезентативных данных здесь показывают, что ремонт ОСО увеличивает реперфузии, хотя поток крови в ОАС не измерялось напрямую. Однако это возможно для хирурга для визуализации reperfuse ОСО с кровью после ремонта судна, как он возвращается в пульсируя и полное состояние вдоль ствола, проксимальных и дистальных к месту ремонта. Это визуальное подтверждение, наряду с Лазерная доплеровская флоуметрия чтений области ишемической, может использоваться для подтверждения успешного ремонта судна. Время между приложение pad ткани и удаления клипа судно из ОАС может иметь влияние на результате проходимость ОАС, как сокращение времени между приложение pad ткани и клип удаление будет препятствовать придерживаясь o панель ткани pposite сторона ОАС. Хотя технически сложной, альтернативная процедура СМАо объяснил здесь не требует никаких дополнительных навыков, чем те, которые требуются для выполнения хирургической индукции СМАо мышей.
Традиционно ассоциируются с высокой изменчивости результатов мер, экспериментальная ход исследования могут иметь тенденцию быть недостаточна. Этические и обеспечения требований в сочетании с экономической и практической проблемы может способствовать исследования, будучи пригодным. Путем уменьшения вариативности в итоговом документе и, таким образом, производство более последовательной поражения результаты экспериментальной группы, более эффективной мощности вычисления могут производиться с конечной целью исследований является надлежащим питанием.
В заключение это альтернативная процедура ремонта ОАС, мышей, приводит к менее изменчивости объема поражения, после экспериментальной инсульта и небольших экспериментальных групп позволяет необходимо для тестирования эффект лечения, когда соответствующие власти вычисления используются.
The authors have nothing to disclose.
Эта работа финансировалась Национальный центр для замены, изысканности и сокращение животных в научных исследованиях (NC3Rs; NC/M000117/1 для CG). Авторы благодарят сотрудников отдела биомедицинских услуг, Университет Лестера, за их уход подопытных животных и Мария Viskaduraki за ее статистические консультации. Представитель результаты приспособлены с разрешения от11заболеваний модели и механизмы.
0.7mm flexible single fibre optic probe | Moor Instruments, UK | P10d | Use with master probe code: VP10M200ST |
7-0 silicone coated monofilament | Doccol, USA | 701956PKRe | Item dependent on animal size and weight – use manufacteurer guidelines. Product code here was used for representative results shown in article. |
9.4T Preclinical MRI system | Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA | MY11520101 | Equipped with gradient and RF coils suitable for mouse brain imaging |
Animal monitoring and gating equipment | SA Instruments, Stony Brook, New York, USA | 22124005 | MRI compatible temperature and respiration monitoring |
Bupivacaine | National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK | 512345 | Marcaine |
C57BL/6 Mice | Charles River, Oxford, UK | B6JSIMA49D | |
Carprofen | Norbrook Laboratories | 143658 | Carprieve 5% w/v Small animal solution for injection |
Chlorhexidine 4% hand cleanser solution | VWR International Ltd, Lutterworth, UK | MOLN10008780 | HibiScrub Antimicrobial hand cleanser, Molnlycke Health Care |
Cotton buds | National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK | 213512 | Any plastic body, cotton bud tip are suitable once made sterile by autoclaving. |
Dissecting stereoscope | Carl Zeiss | OPMI99 | Resident piece of equipment. Any binocular dissecting stereoscope capable of x1-x5 magnification will be suitable. |
dissolvable 6-0 sutures | National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK | 9544 | Absorbable Sutures Ethicon Coated Vicryl 6/0 (Ethicon code: W9981) |
Donut probe holder | Moor Instruments, UK | PHDO | Probe holder for mouse, required to be used with single fibre optic probe when used with laser doppler flowmtry machine. |
dumont #5 forceps | World Precision Instruments, Hertfordshire, UK | 500342 | |
Fibrinogen and thrombin sealant | Baxter, Berkshire, UK | 1502243 | TISSEEL Ready to use solutions for Sealant 2ml |
Gel food | Datesand group, Manchester, UK | 72065022 | Diet Gel Recovery |
Image display and measuring software package | 3D Slicer | https://www.slicer.org/ | Version 4.0 |
Image display and measuring software package | NIH, Maryland, USA | https://imagej.nih.gov/ij/index.html | NIH/ImageJ |
LDF monitor | Moor Instruments, UK | moorVMS-LDF | |
micro vannas scissors | InterFocus Ltd, Linton, UK | 15000-08 | Other microvannas spring scissors can be used as an alternative, although fine tips are required. |
Microvascular clip | World Precision Instruments, Hertfordshire, UK | 15911 | 10 G Vessel Clip |
microvascular clip holders | World Precision Instruments, Hertfordshire, UK | 14189 | |
MRI acquisition and analysis software | Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA | VnmrJ Version 4.2 | Revision A |
no. 15 scalpel | Scientific Laboratory Supplies, Nottingham, UK | INS4678 | Sterile No15 Scalpel – manufactuer number P305. Other suppliers are available. |
Non-disolvable 6-0 suture | National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK | W529 | Ethicon Mersilk Sutures |
Ocular lubricant | National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK | 847288 | Lacrilube (5100G13) |
Optical matching gel | Moor Instruments, UK | PMG | |
Pulse Oximetry Reader | Starr Life Sciences Corp., Oakmont, PA, USA | MouseOx | MouseOx – rat & mouse pulse oximeter & physiological monitor Use with mouse thigh sensor. |
Rehydration gel | Datesand group, Manchester, UK | 70015022 | HydroGel |
Small hair clippers | vetproductsuk.com | HS61 | Contura Cordless trimmer/clippers |
Sterile 0.9 % NaCl Solution | VWR International Ltd, Lutterworth, UK |
LOCA3528286 | SODIUM CHLORIDE 0.9% W/V INTRAVENOUS INFUSION BP 500 ML IN ECOFLAC½ PLUS |
sterile petri dish | VWR International Ltd, Lutterworth, UK | 5168021 | 50mm sterile petri dish. Any brand is suitable. Minimum 50mm diameter is required. |
Topical tissue adhesive | World Precision Instruments, Hertfordshire, UK | 503763 | GLUture topical Tissue Adhesive |
Waterproof superglue | Loctite | Loctite Superglue Precision Max | Available at most hardware shops. |
White paper chip | Datesand group, Manchester, UK | CS1BPB | Pure-O'Cel |