La retina es una parte integral del sistema nervioso central (SNC) y tiene una capacidad limitada para regenerar espontáneamente después de una lesión traumática o de enfermedades. Por lo tanto, patologías degenerativas que causan pérdida definitiva de la célula retiniana, como degeneración macular senil (DMS), retinitis pigmentosa (RP), glaucoma y retinopatía diabética, suele llevan a la ceguera irreversible. Rescatar la retina degenerada es un gran desafío para que las terapias basadas en células madre con el objetivo de reemplazar las células dañadas o perdidas son uno de los más prometedores enfoques^1,2,3. Células pluripotentes como las células células de vástago embrionarias humanas (ESCs) o las células de vástago pluripotent humanas (iPSCs) tienen la capacidad de ampliarse indefinidamente en la cultura, y tienen el potencial para producir cualquier tipo de célula. Avances en nuestra comprensión del desarrollo retiniano y la mejora de in vitro los protocolos de diferenciación de iPSC humanas han dado como resultado la generación de retina organitas^{7,8,9, 10,11,12}. Todas las células retinianas principales, incluyendo las células ganglionares de la retina (RGCs), fotorreceptores y retiniano epitelial (RPE) las células pigmentadas, han diferenciado con éxito humano CES y iPSCs^{4,5, 6}. basado en el método SFEB (cultivo libre de suero de embryoid cuerpo-como los agregados) desarrollado por Eiraku et al. ¹³, formación autodidacta de organoides retiniana puede obtenerse derivado de ESC o iPSC embryoid cuerpo-como los agregados definidos matriz extracelular componentes^7,10,14. Pero estos protocolos son intrincados, requiriendo una gran cantidad de pasos no es siempre compatibles con la gran producción de células para enfoques terapéuticos o detección de drogas. Así, la elección del método para producir células de la retina humanas es fundamental y el método debe ser robusto, escalable y eficiente.

Aquí, en base a nuestra anterior publicación¹⁵, describir cada paso para una simple y eficiente generación de células de la retina a través de la formación autodidacta de retina organoide de adherente iPSCs humana cultivada en una condición libre de alimentador y xeno. A partir de rutina culturas de iPSCs humano adherentes, este protocolo requiere solamente un simple medio sucesivo cambiando para permitir la generación de las células RPE (hiRPE) derivadas de iPS y estructuras del neuroretinal en 4 semanas. Después de un aislamiento manual, hiRPE pueden ampliarse y las estructuras retinianas pueden cultivarse como flotando organoides donde las células progenitoras de retina son capaces de diferenciarse en todos los tipos de células retinianas en un orden secuencial y coherente con el ser humano en vivo retinogénesis. Finalmente, para el avance de la investigación o traducción clínica, se describe un método de criopreservación que permite el almacenamiento a largo plazo de toda retina organoides y hiRPE células sin afectar su funcionalidad y características fenotípicas.