Om het onderzoek naar de cellulaire samenstelling en morfologische kenmerken van zoogdieren eierstokken, afhankelijk wetenschappers vaak van in vivo experimenten gevolgd door immunohistological kleuring van paraffine ingesloten eierstokken. Meer recent echter hele eierstok orgel cultuur heeft bewezen een effectief alternatief voor het bestuderen van ovariële functie^1,,^2,,^3,4 , omdat de techniek kan gepaard gaan met betere visualisatie en kwantificering tools. Traditioneel, analyse van ovariële morfologie is afhankelijk van reconstructie driedimensionale ovariële het platform van paraffine ingesloten seriële secties, maar naast het feit dat moeizaam en tijdrovend, serieel afdelen paraffine ingesloten weefsel garantie niet juiste reconstructie van het orgel en secties zijn vaak verloren of verkeerd besteld in het proces.

Naast de technische uitdagingen in verband met seriële afdelen, zijn er ook variaties in de gehanteerde routinematig kwantificeren follikel nummers per eierstok^5,6. De methodologische variabiliteit momenteel gebruikt schaadt meta-analyse van ovariële reserve over studies^5,7. Follikel nummers uit verschillende onderzoeksartikelen kan bijvoorbeeld variëren door 10-fold of meer tussen soortgelijke developmental leeftijden binnen een specifieke stam⁶. Deze grote verschillen in de gerapporteerde follikel kwantificering kunnen leiden tot verwarring en cross-studie vergelijkingen hebben gestaan. Experimenteel, traditionele benaderingen follikel kwantificering van seriële secties worden uitgevoerd door het tellen van de follikels van een vooraf gedefinieerde aantal secties (b.v., elke vijfde, tiende, of een andere sectie). Variabiliteit in de follikel graven met behulp van deze aanpak ontstaat niet alleen uit de periodiciteit in welke secties worden geteld maar ook uit de variaties in de dikte van de sectie, en technische ervaring bij het genereren van seriële secties^5,6. Naast haar variabiliteit is een ander nadeel van traditionele weefsel segmenteren dat het segmenteren van kleine eierstokken van jonge dieren vooral een uitdaging en sterk afhankelijk is van een weefsel geaardheid^{8 is}.

Het onderstaande protocol beschrijft een routinematig gebruikte eierstok cultuur techniek¹ maar sterk verbetert bij traditionele follikel kwantificering te vervangen door fysieke segmenteren met weefsel clearing en optische afdelen met behulp van de confocal microscopie^{8 ,9}. Wissen met behulp van weefsel onderdompeling (zonder de noodzaak voor transcraniale perfusie of voor elektroforese) in een ureum en sorbitol-gebaseerde oplossing (b.v., ScaleS(0)¹⁰) bewezen compatibel met de immunokleuring en toegestaan voor de vermindering van clearing tijd zonder diepte voor imaging. Andere gemelde methoden (b.v., ScaleA2^8,10, SeeDB¹¹, ClearT¹², en ClearT2¹²) bevinden zich meer tijd consumeren of niet toestaan grondig optische resolutie van het monster. Optische segmenteren is voordelig, omdat het is minder arbeidsintensief en het orgel van driedimensionale het platform^{7,8 onderhoudt}. Een ander voordeel van deze aanpak is dat de voorbereiding van de monsters geen dure reagentia vereist te wissen van het weefsel en kan worden uitgevoerd met relatief gemak.

Met name het protocol beschreven is geoptimaliseerd voor gekweekte muis eierstokken op postnatale dag vijf maar werd uitgevoerd op de eierstokken variërend van postnatale dag 0 – 10. De methode maakt gebruik van een eierstok cultuur systeem waarin het weefsel natuurlijk aan het membraan waarop het is gekweekt hecht, orgel behandeling en manipulatie te vergemakkelijken. Het systeem van de cultuur zoals beschreven kan worden gebruikt om transplanteren eierstokken voor maximaal 10 dagen en te beoordelen hoe verschillende experimentele omstandigheden kunnen interfereren met de oöcyt overleving¹³. De kwantificering beschreven procedure wordt uitgevoerd met behulp van de niet-commerciële pakket FIJI-ImageJ¹⁴ voor beeldverwerking en kan worden uitgevoerd op de meeste personal computers. Bovendien kunnen beelden gebruikt voor kwantificering wijd-beschikbaar gemaakt te worden voor de wetenschappelijke gemeenschap, waardoor voor toekomstige meta-analyse.