Disfunção do sistema de dopamina striatal está envolvida na progressão dos sintomas clínicos observados em várias doenças neurocognitivos. Receptores de dopamina D1 estão presentes no córtex pré-frontal (PFC) e regiões striatal do cérebro e fortemente influenciam processos cognitivos¹, incluindo o trabalho de memória, processamento temporal e comportamento locomotiva^{2,3 , 4 , 5 , 6 , 7}. estudos anterior elucidado que alterações de receptores de dopamina D1 foram associadas com a progressão da atenção défice-Hiperatividade Transtorno (TDAH)⁸, os sintomas neurocognitivos em esquizofrenia^{9, 10} e stress susceptibilidade¹¹. Especificamente, na esquizofrenia, estudos de tomografia por emissão de pósitrons (PET) indicaram que a capacidade de ligação dos receptores de dopamina D1 nos córtices pré-frontal foi altamente relacionada com déficits cognitivos e a presença de sintomas negativos¹¹. O crescimento dendrítica de neurônios excitatórios no córtex pré-frontal, regulado pelo receptor de dopamina D1 alivia o stress susceptibilidade. Além disso, o nocaute do receptor D1 em neurônios corticais pré-frontal medial (mPFC) poderá reforçar a derrota social induzida por estresse evitação social¹².

Aqui, apresentamos uma nova técnica de hibridação in situ RNA Visualizar moléculas de RNA única numa cela com amostras de tecido fresco congelado. A presente técnica tem várias vantagens sobre os métodos que existem dentro da literatura atual. Primeiro, o procedimento atual preserva o contexto espacial e morfológico do tecido e foi realizado em amostras de tecido fresco congelado, para que outros procedimentos que exigem fresco, tecidos não-incorporado podem ser combinados com os métodos atuais. Procedimentos semelhantes em tecidos fixados em formalina e parafina ilustraram que resolução única transcrição pode ser conseguida usando um RNA em situ da hibridação técnica¹³. Detecção de RNA no nível de simples transcrição fornece sensibilidade superior à expressão de número de cópia baixa, bem como a oportunidade de comparar a expressão do gene no nível de células individuais que não podem ser alcançados por outros métodos de detecção do ácido nucleico, tais como técnicas de reação em cadeia (PCR) de polimerase. Além disso, o método atual mantém imagens com uma alta relação sinal-ruído através de sondas de RNA altamente específicas que são hibridizadas de transcritos de RNA único alvo e sequencialmente limite com uma cascata de moléculas de amplificação de sinal na identificação sistema. Finalmente, a tecnologia atual oferece a oportunidade de avaliar vários sistemas biológicos com suas sondas proprietárias de destino específico, ao invés de limitar a nossa investigação a apenas uma classe de marcadores relacionados ao sistema, como a detecção de proteínas por métodos de imuno-histoquímica.

Em nosso estudo, usamos esta novela RNA em situ da hibridação para avaliar a expressão de receptores Drd1α no núcleo accumbens (NAc) e Tirosina Hidroxilase (TH) na substância negra (SNR) de ratos de F344/N tanto masculinos como femininos. A inovador RNA em situ hibridação permitiu-nos investigar mecanismos influenciando DA fixação e DA liberação, simultaneamente, melhorar a nossa compreensão das complexidades do sistema striatal DA. Aqui, descrevemos o procedimento para o cérebro fresco congelado fatias e fornecer métodos de análise de dados para diferentes padrões de coloração: “ponto discreto” ou “clusters”.