Dysfunktion af striatal dopamin system er involveret i udviklingen af kliniske symptomer observeret i flere neurokognitive sygdomme. Dopamin D1 receptorer findes i det præfrontale cortex (PFC) og striatal regioner af hjernen og påvirke stærkt kognitive processer¹, herunder arbejder hukommelse, tidsmæssige forarbejdning og lokomotiv adfærd^{2,3 , 4 , 5 , 6 , 7}. tidligere undersøgelser belyst, at ændringer af dopamin D1 receptorer var forbundet med progression af opmærksomhed underskud hyperaktivitet lidelse (ADHD)⁸, neurokognitive symptomer på skizofreni^{9, 10} og stress modtagelighed¹¹. Specifikt, i skizofreni vist positron emissions tomografi (PET) undersøgelser, at bindende evne til dopamin D1 receptorer i de præfrontale cortex var stærkt relateret til kognitiv underskud og tilstedeværelsen af negative symptomer¹¹. Dendritiske væksten af excitatoriske neuroner i præfrontal cortex reguleret af dopamin D1 receptor lindrer stress modtagelighed. Derudover kunne knockdown af D1 receptor i mediale præfrontale kortikale (mPFC) neuroner forbedre sociale nederlag stress-induceret sociale unddragelse¹².

Her introducerer vi en ny teknik af RNA i situ hybridisering til at visualisere enkelt RNA molekyler i en celle med frisk frosset vævsprøver. Den nuværende teknik har flere fordele i forhold til metoder, der findes i den aktuelle litteratur. Først, den nuværende procedure bevarer den rumlige og morfologiske sammenhæng af væv og blev udført på frisk frosset vævsprøver, således at andre procedurer, der kræver friske, ikke-indlejrede væv kan kombineres med de nuværende metoder. Lignende procedurer i formalin-fast og paraffin-embedded væv har illustreret, at enkelt transskription opløsning kan opnås ved hjælp af en RNA i situ hybridisering teknik¹³. Påvisning af RNA på enkelt transskription plan giver overlegen følsomhed til lav kopi nummer udtryk samt mulighed for at sammenligne genekspression i forbindelse med individuelle celler, der ikke kan opnås ved andre metoder til påvisning af nukleinsyre såsom polymerase kædereaktion (PCR) teknikker. Desuden, fastholder den nuværende metode billeder med en høj signal-støj-forholdet gennem meget specifikke RNA-sonder, der er hybridiseret at enkelt mål RNA udskrifter, og sekventielt bundet med en kaskade af signal forstærkning molekyler i afsløring system. Endelig, den nuværende teknologi giver mulighed for at evaluere flere biologiske systemer med sine mål-specifikke proprietære sonder, snarere end at begrænse vores undersøgelse til kun én klasse af system-relaterede mærker såsom protein påvisning af Immunhistokemi metoder.

I vores undersøgelse brugte vi denne roman RNA i situ hybridisering til at evaluere Drd1α receptor udtryk i nucleus accumbens (NAc) og tyrosin hydroxylase (TH) udtryk i substantia nigra (SNR) af både mandlige og kvindelige F344/N rotter. Den innovative RNA i situ hybridisering aktiveret os til at undersøge mekanismerne påvirker både DA optagelsen og DA release samtidigt, forbedre vores forståelse af striatal DA systemets kompleksitet. Her, vi beskrive proceduren for frisk frosset hjernen skiver og give metoder til analyse af data for forskellige farvning mønstre: “diskret dot” eller “klynger”.