تجلط الوريد العميق الناجم عن ركود في الفئران التي يرصدها الموجات فوق الصوتية عالية التردد
Summary
ويصف هذا البروتوكول الخطوات اللازمة للحصول على تجلط وريدي باستخدام نموذج ركود. وبالإضافة إلى ذلك، نحن نستخدم أسلوب غير الغازية لقياس تكوين خثرة والقرار على مر الزمن.
Abstract
تجلط وريدي حالة شائعة تؤثر على 1-2% السكان، مع الإصابة سنوية 1 في 500. تجلط وريدي يمكن أن يؤدي إلى الوفاة عن طريق الانسداد الرئوي أو النتائج في متلازمة ما بعد الخثاريه، تتميز بالألم المزمن في الساق وتورم وتقرح، أو ارتفاع ضغط الدم الرئوي المزمن الناتج في كبيرة المزمن الرئوي الحل الوسط. هذا هو أكثر الأمراض القلبية الوعائية بعد احتشاء عضلة القلب والسكتة الدماغية، وهو تحد سريرية لجميع التخصصات الطبية، كما أنها تؤدي إلى تعقيد مسار اضطرابات أخرى مثل السرطان والأمراض الجهازية، والجراحة، والصدمة الكبرى.
نماذج تجريبية ضرورية لدراسة هذه الآليات. نموذج ركود الحث على حجم خثرة متسقة وكمية قابلة للقياس الكمي من خثرة. ومع ذلك، من الضروري سد الفروع الجانبية الأجوف فينا أدنى لتجنب التقلبات في أحجام خثرة وأي تفسير بيانات خاطئة بشكل منهجي. قمنا بتطوير تقنية غير الغازية لقياس حجم خثرة باستخدام الموجات فوق الصوتية. باستخدام هذا الأسلوب، يمكننا تقييم التنمية خثرة والقرار مع مرور الوقت في نفس الحيوان. يحد هذا النهج عدد الفئران المطلوبة للتحديد الكمي ليتمشى مع مبدأ الاستبدال، والحد، وصقل للحيوانات في البحوث تجلط وريدي. لقد أظهرنا أن الحصول على الوزن خثرة والتحليل النسيجي لربط حجم خثرة بالقياس بالموجات فوق الصوتية. ولذلك، توضح الدراسة الحالية للحث على تجلط الوريد العميق في الفئران باستخدام نموذج ركود أدنى الوريد الأجوف وكيفية رصد استخدام الموجات فوق الصوتية عالية التردد.
Introduction
الجلطات الوريدية (إعطاؤهم)، التي تتألف من تجلط وريدي عميق (DVT)، والانسداد الرئوي، هو السبب الرئيسي الثالث للوفاة القلبية الوعائية بعد احتشاء عضلة القلب والسكتة الدماغية. أنها حالة شائعة تؤثر على 1-2% السكان، مع الإصابة سنوية 1 في 5001. إعطاؤهم يمكن أن يؤدي إلى: 1) الموت عن طريق الانسداد الرئوي؛ 2) متلازمة بعد انتهاء الخثاريه، تتميز بالألم المزمن في الساق وتورم وتقرح؛ أو 3) ارتفاع ضغط الدم الرئوي المزمن أدى كبير وسط الجهاز التنفسي المزمنة. إعطاؤهم هو مرض متعدد العوامل، وقد ينتج عن ركود تدفق الدم، تلف جدران الأوعية، و/أو الدول هايبركواجولابل بسبب حدوث اضطراب في التوازن بين النظم فيبرينوليتيك، وتخثر الدم كما قد وصفت قبل ما يزيد على مائة عام من سندربربيركورس ويعرف باسم الثالوث سندربربيركورس.
لأنه في معظم الحالات من المستحيل الحصول على العينات دفت البشرية، قد طور الباحثون نماذج حيوانية تجريبية من دفت. وقد استخدمت العديد من الحيوانات بما فيها الجرذان2والماوس3، الأرانب4، خنزير5، الكلب6والرئيسيات غير البشرية7 . ويمكن أن يكون محوره وراثيا الفئران الحيوان الأكثر استخداماً لدراسة دفت. ومع ذلك، كما هو الحال في جميع الحيوانات، لا يلاحظ دفت عفوية في الفئران. وهكذا، تستخدم التغيرات الفيزيائية أو الكيميائية لجدار الوريد لخلق تجلط الدم في الفئران. وقد استخدمنا نموذج كلوريد الحديد سابقا للحث على تجلط الدم في الأجوف فينا أدنى (IVC) من الفئران8،،من910. هذا النموذج يتميز بإنتاج موثوق الجلطات الانسداد في غضون دقائق ويمكن استخدامها للتحقيق في دور الأدوية المضادة الصفيحات والمضادة تخثر خلال دفت الحاد. ومع ذلك، وإجراء المحطة طرفية. وهكذا، لدراسة دفت الحادة والمزمنة، يعتبر هذا النموذج ركود أكثر ملاءمة. في هذا النموذج، يتم تكوين خثرة الناجمة عن انقطاع تدفق الدم في IVC، أحد العوامل في ثالوث سندربربيركورس للتنمية دفت كاملة. يمكن استخدام هذا النموذج لدراسة تشكيل دفت والقرار، الذي ميزة مقارنة ب النموذج3 فيكل11.
قمنا بتطوير أسلوب غير الغازية لمتابعة تكوين خثرة والقرار على مر الزمن باستخدام نظام مايكرو-التصوير بالموجات فوق الصوتية عالية التردد12. قد أثبتنا سابقا أن قياس تجلط وريدي بالموجات فوق الصوتية يرتبط ارتباطاً إيجابيا بالجلطات حصل مرضية. وقد أكدنا في اثنين من الدراسات اللاحقة أن القياسات التي تم الحصول عليها مع ربط الموجات فوق الصوتية مع الوزن خثرة ومنطقة خثرة كمياً قبل9،هيستوتشيميستري10. الأهم من ذلك، لقد أظهرنا أن الموجات فوق الصوتية عالية التردد يمكن استخدامها لرصد تشكيل تجلط وريدي عميق في12من الفئران. قد تستعمل أيضا لتحديد القرار خثرة بطريقة غير الغازية.
هنا، ونحن سوف تصف البروتوكول الذي يسمح تكوين خثرة باستخدام نموذج الماوس تجلط الدم الناجم عن ركود، وكيف يمكن رصد تكوين خثرة غير إينفاسيفيلي مع مرور الوقت باستخدام الموجات فوق الصوتية عالية التردد.
Protocol
Representative Results
Discussion
وهناك العديد من الخطوات الحاسمة لتكوين خثرة وريدية ناجحة باستخدام نموذج ركود. التعريفي تجلط الوريد أكثر صعوبة في الفئران القديمة بسبب تراكم الدهون المحيطة أدنى الوريد الأجوف والشريان الاورطي. ومن الناحية المثالية، ينبغي أن تكون الفئران تمر بهذا الإجراء 8-10 أسابيع من العمر. وينبغي إيلاء ع…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل بمنحه من القلب ومؤسسة كندا السكتة الدماغية، و “موريس” و “مؤسسة عائلة فاينمان بيلا”. المؤلف يود أن يشكر “ميشو فيرونيك” لها المساعدة التقنية مع نظام التصوير بالموجات فوق الصوتية VEVO770.
Materials
| 6-0 perma-hand silk suture | Ethicon | 706G | |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Suture tying forceps | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| blunt forceps (straight and curved) | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Needle Driver | Fine Science Tools | 13002-10 | |
| Moria Spring Scissors | Fine Science Tools | 15396-00 | |
| 1ml syringes | BD Biosciences | ||
| 26G needles | Becton Dickinson & Co. | ||
| VEVO 770 High Resolution Imaging System | Visualsonics | No longer sold | |
| SR Buprenorphine | ZooPharm | Given to LDI by Vet | |
| Surgery Microscope | Leica | Leica M651 | |
| Systan eye oinment | Alcon | 288/28062-0 | |
| 2×2 sterile Gauze | CDMV | #104148 | |
| Cotton Tip Applicators | from JGH | ||
| Transpore hypoallergenic surgical tape | CDMV | #7411 | |
| Ultrasound gel (Aquasonic-100) | Dufort & Lavigne | #AKEN4061 | |
| Incubator | From JGH | ||
| Isoflurane | Dispomed | ||
| Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment | Dispomed | ||
| Hair remover | Nair | ||
| Water heated hard pad | Braintree Scientific, Inc. | #HHP-2 | |
| Gaymar heater water pump TP500 | MATVET Inc. | #R-500305 | |
| Infra-red heating lamp | electrimat inc. | #1R175R-PAR | |
| Mouse rectal temperature prope | emkaTECHNOLOGIES | ||
| Sterile water | From JGH |
Referências
- Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review. Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).
- McGuinness, C. L., et al. Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi. Thromb Haemost. 85 (6), 1018-1024 (2001).
- Singh, I., et al. Failure of thrombus to resolve in urokinase-type plasminogen activator gene-knockout mice: rescue by normal bone marrow-derived cells. Circulation. 107 (6), 869-875 (2003).
- Itoh, K., Ieko, M., Hiraguchi, E., Kitayama, H., Tsukamoto, E. In vivo kinetics of 99mTc labeled recombinant tissue plasminogen activator in rabbits. Ann Nucl Med. 8 (3), 193-199 (1994).
- Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease. Thromb Haemost. 89 (2), 256-263 (2003).
- Knight, L. C., Baidoo, K. E., Romano, J. E., Gabriel, J. L., Maurer, A. H. Imaging pulmonary emboli and deep venous thrombi with 99mTc-bitistatin, a platelet-binding polypeptide from viper venom. J Nucl Med. 41 (6), 1056-1064 (2000).
- Wakefield, T. W., et al. Venous thrombosis prophylaxis by inflammatory inhibition without anticoagulation therapy. J Vasc Surg. 31 (2), 309-324 (2000).
- Robins, R. S., et al. Vascular Gas6 contributes to thrombogenesis and promotes tissue factor up-regulation after vessel injury in mice. Blood. 121 (4), 692-699 (2013).
- Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Bertin, F. R., Blostein, M. D. Prostaglandin E synthase is upregulated by Gas6 during cancer-induced venous thrombosis. Blood. 127 (6), 769-777 (2016).
- Laurance, S., et al. Gas6 (Growth Arrest-Specific 6) Promotes Inflammatory (CCR2hiCX3CR1lo) Monocyte Recruitment in Venous Thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. , (2017).
- Diaz, J. A., et al. Critical review of mouse models of venous thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).
- Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Blostein, M. D. In vivo monitoring of venous thrombosis in mice. J Thromb Haemost. 10 (3), 447-452 (2012).
- Brandt, M., et al. Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches. Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).
- Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model. J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).
- Luther, N., et al. Innate Effector-Memory T Cell Activation Regulates Post-Thrombotic Vein Wall Inflammation and Thrombus Resolution. Circ Res. , (2016).
- Subramaniam, S., et al. Distinct contributions of complement factors to platelet activation and fibrin formation in venous thrombus development. Blood. 129 (16), 2291-2302 (2017).
- Diaz, J. A., et al. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104 (2), 366-375 (2010).
