ミトコンドリアの分離と培養細胞におけるミトコンドリアのカルシウム流入の解析

ミトコンドリアは、細胞内 Ca^{2 +}貯蔵とシグナル伝達の重要なサイトです。数十年の研究は、ミトコンドリアがインポートし、Ca^{2 + 1,2}を隔離する能力を持っていることを示しています。しかし、ミトコンドリアは Ca^{2 +}貯蔵の単なる受動的なサイトではありません。Ca^{2 +}ミトコンドリアのコンパートメントで代謝の出力の調節などの基本的なシグナリング機能を実行し、ミトコンドリアを介した細胞死経路の活性化されている見直し以前³。代謝調節の Ca^{2 +}活性を高めるトリカルボン酸だけでなく、呼吸鎖複合体、ミトコンドリアのエネルギー生産^{4,5 を増加する 3 マトリックス ローカライズ脱水素酵素の}.ミトコンドリアの Ca^{2 +}過負荷と調節不全ミトコンドリアの Ca^{2 +}ハンドリング、Ca^{2 +}トリガー ミトコンドリア膜透過性遷移孔 (MPTP) 入り口、ミトコンドリア内膜の透過膜の潜在的な損失、ミトコンドリア機能障害、腫脹、破裂し、最終的には、細胞死^6,7,8,9。細胞生命と死の経路を通じて代謝制御と MPTP 死の軸がこのように、ミトコンドリアの Ca^{2 +}シグナリング直接影響します。

近年が急速に普及したためミトコンドリア Ca^{2 +}動態の研究に関心のミトコンドリアの Ca^{2 +}細胞複雑な分子成分の同定に大きい部分、ミトコンドリア内Ca^{2 +}の主なモードは、膜輸送体は、ミトコンドリアのマトリックス^10、11,12にインポートします。細胞の構造および調節サブユニットの同定はミトコンドリアの機能と機能障害を調節するためのミトコンドリアの Ca^{2 +}流入をターゲット遺伝子の可能性をもたらしたし、の研究を促進、細胞複合体とミトコンドリア Ca^{2 +}流入病^13,14,15への貢献。確かに、様々 な神経変性疾患、および癌^{16,17,18、心臓病に至る疾患の病態に関与しているミトコンドリアの Ca2 +シグナル伝達 19,20}。

ミトコンドリア Ca^{2 +}代謝と細胞死のシグナル伝達の基本的な重要性を与えられ、生物学的システムの広い範囲と組み合わせるそのミトコンドリア Ca^{2 +}シグナル伝達への影響、ミトコンドリアの Ca 2 +^{を評価する手法}流入が大きな関心を集めています。当然ながら、さまざまな技術やミトコンドリア Ca^{2 +}を測定するためのツールが開発されています。蛍光 Ca^{2 +}などのツールを利用する方法が含まれます-敏感な染料^21,22と^{遺伝子にコードされた Ca 2 +}センサー cameleon、イクオリン^{23など、ミトコンドリアを対象と 24}。この記事の目的は、さまざまな方法やミトコンドリアの Ca^{2 +}吸収を測定できるモデル システムを強調することです。ミトコンドリアの Ca^{2 +}流入能力を評価する 2 つの実験的手法を提示します。例として心臓のミトコンドリアを使用、プレート リーダー ベースのプラットフォームの詳細に説明してミトコンドリア Ca^{2 +}の測定を使用して、Ca^{2 +}敏感な吸収色素分離組織のミトコンドリア^{14 に最適ですカルシウム グリーン 5N}.共焦点顕微鏡イメージングを用いたのミトコンドリア Ca^{2 +} Ca^{2 +}敏感な染料ロード-2/午前²⁵を用いたグリセリンの細胞の測定の測定について述べるも NIH 3T3 細胞を使用して、.