夏威夷咖啡莓科学监测协议: 全球咖啡农田模型

注意: 该协议的西班牙文翻译作为补充文件 1提供。 1. 在咖啡场内定义取样区 通过全球定位系统 (GPS) 仪器对咖啡场的周长进行监测。将字段坐标导入到全球信息系统 (GIS) 中, 并生成咖啡场的地图。 将字段划分为 “区域” (即、多边形), 每335米2。这些将用于确保整个领域的系统随机抽样设计。 2. 在电子系统中创建数据收集应用程序 使用电子数据收集平台, 构建由以下相互关联的数据库组成的数据收集应用程序:陷阱、区域、站点服务、气象站、和管理。注意: 这些数据库将在协议的所有后续步骤中用于数据的收集和组织。 对于补漏白数据库, 创建 “站点名称”、”陷阱编号”、”部署日期”、”字段技术人员名称”、”部署照片” 等字段, 以及指向每个陷阱的 GPS 坐标的链接。 对于区域数据库, 创建 “站点名称” 和 “区域编号” 字段, 并链接到显示每个区域的地理站点地图。 对于站点服务数据库, 创建 “站点名称”、”日期”、”字段技术人员名称” 和 “站点备注” 字段。在站点服务数据库中, 创建包含以下内容的嵌套数据库。 包括补漏白服务以记录陷印号码 (在父陷阱数据库中有指向相关陷阱部署记录的链接)、捕获陷阱捕获的照片和陷阱计数。 包括区域服务记录物候照片、浆果出没评估 (绿色浆果的总数量、被感染的绿色浆果、带有B. 白僵菌的绿色浆果和葡萄干), 以及指向父级相关区域记录的链接。区域数据库。该记录还包括每个取样树的 GPS 坐标。 包括气象站服务以记录站点名称、日期、数据下载和电池检查。 包括浆果解剖记录实验室技术员姓名、日期和 CBB 位置 (AB 或 CD) 和死亡率类别 (活着, 死于其他原因, 或死于白僵菌) 为每个解剖浆果。 对于气象站数据库, 创建 “站点名称”、”站号”、”部署日期”、”字段技术员名称”、”部署照片” 等字段, 以及指向每个气象站的 GPS 坐标的链接。 对于管理数据库, 创建 “站点名称”、”日期” 和 “管理实践类型” 的字段。 3. 准备和部署用于监测 CBB 运动的陷阱 确定监视每个字段中 CBB 移动所需的陷阱数。注: 每个字段的陷印密度应近似为大字段 (~ 1 公顷)15的小字段 (~ 0.5 公顷) 和10个陷阱的5个陷阱。 使用图钉, 在每个陷阱收集杯的填充线上方做一系列排水孔, 以避免雨水稀释杀死溶液。根据制造商的指示装配漏斗圈。 制备 1 L 的杀伤溶液, 由200毫升丙烯乙二醇和800毫升水组成。接下来, 准备一个由3:1 甲醇溶液组成的引诱剂混合物: 乙醇。将40毫升的引诱剂倒入塑料半透水袋 (2 毫米, 3 英寸 x 4 英寸), 并放置在集装箱中运输。注: 在吸引 CBB 时, 半透水袋的表现比开瓶效果好, 而且由于洗脱率降低16, 还需要较少频繁地对补强诱饵进行访问。注意: 甲醇和乙醇是高度易燃的液体, 如果吸入或摄取, 是有毒的, 并且是皮肤和眼睛刺激物。这些化学品应在通风良好的房间里处理, 同时戴上手套、护眼和防护服。 通过在字段中随机分布它们来部署陷阱。放置陷阱 0.5-1.5 米以上的地面, 并清除过道。木桩可以用来有效地保护树木之间的陷阱。将站点名称和陷阱编号与每个陷阱上的永久性标记一起写入将来的标识。 填充陷阱收集杯与100毫升的乙二醇杀死解决方案, 并拧紧的杯子到位。将回形针贴在每个引诱袋上, 并用回形针将袋子钩到陷阱的中心。 使用配备了电子数据收集平台的移动设备, 导航到陷阱数据库, 并创建由站点、日期、陷阱号和陷阱照片组成的新部署记录。注意: 每个字段中陷阱的位置是通过移动设备上的 GPS 自动记录的。 4. 服务陷阱 到达该字段后, 导航到电子系统中的站点服务数据库, 并创建一个由站点名称、日期和字段技术人员名称组成的新的站点服务记录。注: 初始陷阱服务在陷阱部署后两周进行, 此后每两周进行一次。如果需要更高分辨率的陷阱捕获数据, 则可以进行每周的陷阱服务, 尽管我们注意到双周取样足以捕获整个季节的一般运动趋势 (图 1)。 在字段中找到陷阱。将细网手筛 (网格尺寸 0.8-1.0 毫米) 放在塑料容器上, 然后从收集杯中将杀死溶液倒入筛中。把杀死的解决方案转移回收集杯和周围的液体, 以确保所有的 CBB 从收集杯中删除。 在新的站点服务记录中, 导航到补漏白服务数据库并创建新的陷阱服务记录。输入相关的陷阱编号, 并在背景中用站点名称和陷阱编号拍摄筛网。将照片保存到陷阱服务记录。 用勺子或金属铲, 把所有的昆虫舀进装满70% 乙醇的瓶子里。用站点、日期和陷阱编号标记瓶子。 用新鲜的杀死溶液重新填充收集杯, 然后拧回陷阱上。每月一次用肥皂水清洗收集杯, 冲洗, 并用新鲜的杀液代替。每月或根据需要更换引诱剂和包袋。 5. 植物物候服务区 在站点服务记录中, 导航到区域服务数据库并创建一个新的区域服务记录。从链接的区域数据库的站点地图中选择取样区域。 为了避免取样偏差, 从区域内随机选取一棵树, 将眼睛向下投射, 这样只有树的底座可见。站在选定的树的前面, 随机选择一个侧面分支围绕胸部高度。将标尺夹在所选分支上, 确保标尺不会从照相机的视野中阻挡任何生殖部分 (节点、芽、花、果)。 拍摄一张照片, 确保目标分支的标尺和整体可见。拍下整棵树的第二张照片;尽量在照片中获得尽可能多的中层树冠。将这两种物候照片保存到区域服务记录中。 6. 绿色浆果损害评估服务区 如果用于物候的分支似乎有 > 30 绿色浆果, 请计算树枝上至少豌豆大小 (~ 0.6 厘米) 和较大的浆果的数量, 并以绿色的颜色 (BBCH 鳞片 77-8517) 来表示。在区域服务记录中输入此数字。注: 如果用于物候的分支似乎有 30 绿色浆果可见。从远处做这一点, 以避免选择中的偏差。 此外, 在区域服务记录中, 输入分支上 CBB 所感染的绿色浆果的数量。被感染的浆果会有一个小孔, 通常位于中央圆盘;CBB 在洞中可能或可能不可见。 输入具有可见白色白僵菌真菌的绿色被感染浆果的数量。真菌可以看到在 CBB 和/或周围的入口孔。注意: 如果有特殊的兴趣, 可能需要进一步的化验来鉴定真菌种类。 输入树枝上的葡萄干 (干果) 的数量。此信息可用于了解管理实践 (例如、剥离拾取) 和 CBB 侵扰之间的关系。 从树枝上收集三受感染的绿色浆果;这些将被带回实验室和解剖, 以评估 CBB 在浆果内的位置。注: 如果用于损害评估的分支有 < 3 个受感染的绿色浆果, 则可以从区域内的其他分支获取绿色的浆果。 放置在塑料容器中的绿色浆果和标签与网站和日期。把容器放在冰上的冷却器里, 直到它们可以运回实验室。注: 理想情况下, 浆果应在收集 1-3 天内进行解剖, 以确保 CBB 的最大存活率。 储存浆果 (根据需要) 在实验室14°c 三天, 几乎没有死亡 (s Fortna & r 霍宁沃思, 个人沟通)。 对每个取样区的物候和浆果损伤评估重复步骤。注: 应为大型养殖场 (~ 1 公顷) 取样约25个分支机构, 并向小农场取样15个分支机构 (~ 0.5 公顷)。对于解剖, 应从大型养殖场收集75种绿色的浆果, 并在每个取样日期从小农场中抽取45个。在今年的某些地方, 可能无法收集到这些浆果的数量。在这种情况下, 尽量收集50绿色浆果为大农场 (~ 1 公顷) 和30绿色浆果为小农场 (~ 0.5 公顷)。 7. 计算每个陷阱中的 CBB 数 将粗网手筛 (网格尺寸 ~ 1.5 毫米) 放在塑料容器上, 将甲虫从收集瓶中清空到筛子中。用一个装满水的洗瓶把瓶子里的所有东西都拿出来。 使用洗瓶喷雾的内容在筛, 迫使尽可能多的小昆虫通过筛尽可能。这允许更大的昆虫和碎片从样本中的小甲虫中分离出来, 并限制 CBB 的体积估计不准确。扔掉大的昆虫和碎屑, 冲洗筛子。 在第二个塑料容器上放置细网手筛 (网格尺寸 ~ 1.0 毫米), 然后将第一个容器的内容倒入细网手筛。 如果有超过几个百 CBB, 跳到步骤7.6。如果有少于几个百 CBB, 把细网筛放在纸巾上, 以除去多余的水。把筛子倒过来, 把所有的东西都放到一个透明的塑料盖子上。如果它们聚集在一起, 用画笔把甲虫围起来, 让它们坐到干。 如果有少于几个百 CBB, 使用一个细尖的画笔或类似的实施, 以线甲虫成行, 是几个甲虫宽, 并开始计数在光显微镜下。计算甲虫的总数, 并分成 “CBB” 和 “其他” 类别。 如果有超过几个百 CBB, 将 CBB 从细筛筛到一个10毫升的注射器使用金属铲。将喷射器柱放进注射器, 轻轻向下按压, 直到感觉到轻微的阻力, 同时小心不要粉碎甲虫。记录注射器上的容积值。 使用上面描述的协议从容积样本中计数200甲虫。使用下面的等式确定 CBB 与样品中其他甲虫的数量。 使用以下方法估计 CBB 计数:样本的总 CBB 估计数 = (# CBB ÷ 200) x ∂ x (用注射器测量的 mL)。注: 这里∂ = 昆虫/毫升的数量。建议对每个区域进行∂估计;在夏威夷海岛价值1033年被测量了。 使用以下方法估计其他计数:总 “其他” 甲虫估计为样品 = (# 其他÷ 200) x ∂ x (毫升测量在注射器)。 当陷阱计数完成后, 导航到相关的补漏白服务记录并输入 CBB 和其他甲虫的数量。 8. 物候照片的评分 从数据收集应用程序中导出咖啡物候照片。打开照片, 用附加的尺子定位树枝。为这个分支得分以下。 将节点数 (叶子的附着点) 分到分支。 不成熟的芽, 成熟的芽, 蜡烛, 开花, 和别针头的存在或缺席。 分数的豌豆大小的绿色浆果, 未成熟的绿色浆果, 成熟的绿色浆果, 浆果显示的颜色打破, 完全成熟的浆果, 和葡萄干。 9. 解剖浆果以确定 CBB 位置 将被感染的绿色浆果从冷藏库中取出, 让它们在进行浆果解剖之前, 在室温下加热10-15 分钟。这个恢复时间是重要的, 以便 CBB 可以准确地评估为活着或死亡。注: 对被感染的浆果进行解剖, 可以确定成人 CBB 的位置。位置 AB 表明, 雌性已开始渗透到浆果, 但尚未达到胚乳;位置 CD 指示女性已进入胚乳13。 使用手术刀或类似的实施, 使切片通过浆果平行的中央圆盘作为一个初步评估甲虫的位置。接下来, 制作一系列垂直于中央圆盘和入口孔周围的浅片, 以确定 CBB 是否在 AB 或 CD 位置。 将 AB 和 CD 类别细分为 “活的”, “死于白僵菌”, “死于其他原因”, 和 “甲虫失踪”。如果不清楚成年人是活着还是死了, 那就放大显微镜, 观察腿部的运动。 地方计数的人入菜与水或酒精。这有助于跟踪已计算的内容, 并防止成年甲虫逃到实验室。 完成站点的解剖后, 导航到相关站点服务记录中的浆果解剖数据库, 并输入每个类别中的 CBB 总数。 将解剖样品放置在容器中, 在处理前冻结72小时。 10. 服务手册气象站 注: 需要手动数据下载的气象站可以每周或每月提供服务, 以下载数据并确保所有传感器工作正常。天气变量, 重要的是要考虑了解 CBB 生物学可能包括降雨, 湿度, 空气和土壤温度, 太阳辐射, 光合主动辐射 (PAR), 土壤湿度, 风速/方向。 在现场找到手动气象站。在电子系统中, 打开相关的站点服务记录, 然后导航到气象站服务数据库。创建连接到相关气象站部署记录的新气象站服务记录。 使用防水穿梭机直接连接数据记录器和笔记本电脑进行数据下载。在气象站服务记录中记下数据的下载情况。 一旦数据被关闭, 手动重新启动太阳和温度/湿度记录器, 以确保他们有正确的设置 (降雨记录器不需要重新启动)。检查电池电量并根据需要更换。在电子系统中记下这一点。 返回实验室后, 将最新的数据添加到完整的天气缝中, 并更新元数据记录。 11. 记录管理做法 注: 有关管理做法的信息可用于了解 CBB 活动和人口规模的模式。相关的管理做法可能包括 (但不限于): 喷洒白僵菌真菌, 喷洒 pyrethins 或其他杀虫剂, 修剪, 杂草管理, 带采摘, 樱桃采摘, 从地面去除葡萄干,等。 在管理数据库中, 创建一个新的管理记录, 其中提供了网站名称、日期和管理实践的类型。