유럽 장 어 성숙 및 정자 cryopreservation 프로토콜 지난 수 년에 걸쳐 개선 되었습니다. 이 문서는 성숙과 메탄올 cryoprotectant로 유도 대 한 인간의 융 생식 샘 자극 호르몬 (hCG)을 사용 하 여 사용할 수 있는 최상의 프로토콜을 설명 합니다.
지난 년 동안 여러 연구 그룹 개발 및 유럽 장 어 처리 및 성숙에 대 한 새로운 프로토콜의 개선에 노력 하고있다. 로 서 아직, 인간 융 생식 샘 자극 호르몬 (hCG)의 주간 주사 치료, 몇 주 동안 높은-품질의 높은 볼륨 생산의 단지 5-6 주 후 남성 maturate를 입증 해야 합니다. 또한, 정자 cryopreservation 프로토콜 다른 extender를 사용 하 여, cryoprotectants 및 냉각 시간을 녹고 있다 이전 설명 유럽 장 어에 대 한. 여기, 우리가 보여줍니다 수정 또는 cryopreservation, Tanaka´s 익스텐더 솔루션 직접 사용 될 수 있다 솔루션 및 희석의 다른 종류의 사용을 불필요 한 만들기. 또한, 메탄올의 사용은 cryoprotectant로 만드는이 프로토콜 사용 하기 쉬운 메탄올은 낮은 독성과 정자를 활성화 하지 않습니다. 정자는 cryoprotectant 추가 직후 cryopreserved 필요 하지 않습니다 그리고 그것은 오래 되 고 해 동 후 사용할 수 있습니다. 또한, 정자 운동 성은 비록 그것이 신선한 정자 보다 낮은 녹고 후 여전히 높다입니다. 이 작품의 목표 처리, 성숙 및 정자 cryopreservation 유럽 장 어에 대 한 가장 사용할 수 있는 프로토콜을 표시 하는 것입니다.
지난 25 년 동안 유럽 뱀장어 (앵귈라 앵귈라) 유럽 해 안에 도착의 수는 꾸준히 90 1,2,3감소. 오염, 감염, overfishing, 서식 지 파괴 등이 급격 한 하락을 설명 하는 몇 가지 요인이 있다. 이 모든 중요 한 멸종 위기 4자연 보존 (IUCN) 목록은 국제 연합에 유럽 장 어의 포함에 지도 하는이 종에 깊은 영향을 했다. 따라서, 기술 및 포로에 복제에 대 한 프로토콜의 개발은 필요 합니다.
포로에서 유럽 장 어의 성숙 호르몬 치료 5,,67 에 의해 이루어집니다 하지만 남녀 모두에서 gametes의 생산 8동기화 할 어렵습니다. 새로운 안 드로 겐 임 플 란 트의 개발 oogenesis 뱀장어 9,에 있는 가속을 보이고 있다 하더라도10, 여성에서 마지막 성숙의 타이밍은 여전히 매우 변수 하 고 11를 제어 하기 어려운. 따라서, 기술의 정자 12,,1314 및 cryopreservation 단기 저장 복제 관리, 생식 체 동기화 불필요 한 8를 만들기 위해 필요 하다.
유럽 장 어 정자의 cryopreservation 2003 15,16이후 개발 되었습니다. 몇몇 연구원은 성공적인 프로토콜 cryoprotectants 16,17,18,,1920디 메 틸 sulfoxide (DMSO) 또는 메탄올을 사용 하 여 설계 되었습니다. 두 프로토콜 성공적으로 사용 되었습니다, 하지만 해 동된 정자 DMSO와 cryopreserved의 얻은 세포 생존 능력에 메탄올 20,21보다 낮은 것입니다. 또한, 장 정자 DMSO와 접촉을 활성화 하 고 더 지루한 정자 조작 19필요 하, 그러므로 메탄올 DMSO 보다 유럽 장 어 정자에 대 한 더 적합 한 cryoprotectant 이다.
여기, 아래 최적의 처리 및 유럽 장 어의 호르몬 치료에 대 한 프로토콜을 설명 합니다. 이것 이외에,이 종에서 정자 품질 평가 대 한 프로토콜은 cryoprotectant로 메탄올을 사용 하 여 최고의 유럽 장 어 정자 cryopreservation 프로토콜도 설명 됩니다.
이 프로토콜 유럽 장 어 성숙, 처리 및 정자 cryopreservation에 대 한 완전 한 프로세스를 설명합니다. 여기에 설명 된 농업 조건 빠른 성숙 및이 종 6,,725에 높은-품질의 높은 볼륨의 생산을 위한 최적의 있습니다. 이 cryopreservation 프로토콜 및 해빙 후 수정에 대 한 그것의 잠재적인 사용의 성공 신선한 정자 26의 품…
The authors have nothing to disclose.
이 게시는 유럽 연합의 수평선 2020 연구에 의해 투자 되었다 및 혁신 프로그램 마리 Sklodowska 퀴리 부여 계약 없음 642893 (감동), 비용 사무실 (비용 액션 FA 1205, AQUAGAMETE), 그리고 우수 연구 센터- 1476-4/2016/FEKUT입니다.
AQUACEN BENZOCAÍNA +D2A2:D24 | AQUACEN | 3394ESP | Benzocaine |
NaCl | Avantor | 3624-19 | |
Syringe | BD Plastipak | 305501 | Syringe 1 mL |
FC500 | Beckman Coulter | Flow cytometer | |
Air pump 100 | EHEIM | 4011708370032 | Modified for suction |
Eppendorf 1.5 | Eppendorf | 175508 | Plastic tubes 1.5 mL |
Falcon tubes | Falcon | 175747 | Plastic tubes 15 mL |
Flexible bucket | Fiel | 1040101 | 40 L, Black color. |
Ethanol | Guinama SL | Mg96270 | |
Cyopreservation straws | IMV Technologies | 14550 | 500 µL straws |
Live/Dead Sperm Viability Kit | Invitrogen | L7011 | Cytometer Kit |
Modelling clay | JOVI | Art 30 | 4 different colors |
Precision scale PCB | KERN & Sohn GmbH | PCB35002 | Digital scale |
Saline solution Vitulia 0.9% | Laboratorios Ern, S.A. | C.N. 999790.8 | Saline solution |
Forceps | Levantina de Lab. SL | 3710025 | 30 cm metal forceps |
Scissors | Levantina de Lab. SL | 3700014 | Scissors 14cm |
Ovitrelle (r-hCG) | Merck SL | EMEA/H/C/000320 | Human chorionic gonadotropin |
Nikon Eclipse 80i | Nikon | Microscope | |
CaCl2 | Panreac Quimica SAU | 2112211210 | |
Na2SO4 | Panreac Quimica SAU | 3257091611 | |
NaHCO3 | Panreac Quimica SAU | 1416381210 | |
782M Camera | Proiser | 782M | Camera for CASA |
ISAS v1 | Proiser | ISAS v1 | CASA software |
SpermTrack-10 | Proiser | SpermTrack-10 | Countig chamber for CASA |
Beaker Pyrex 3L | PYREX | 2110668 | Glass beaker 3L |
Flask Pyrex 250 GL-45 | PYREX | 21801365 | Glass flask 250 mL |
KCl | Scharlab SL | PO02000500 | |
Methanol | Scharlab SL | ME03061000 | |
MgCl2 | Scharlab SL | MA00370500 | |
BSA | Sigma Aldrich | 05482 | Bovine serum albumina |
Styrofoam box | 34x34x30 cm and 5cm thick |