小鼠骨髓基质细胞与骨破骨祖的分离、培养及分化

小鼠骨髓间充质干细胞在二十世纪八十年代早期的¹中被发现, 通常被作为一个体外细胞模型。事实上, 从长骨的骨髓腔中冲出的塑料黏附细胞的培养, 在许多研究中保持着分化成成骨、破骨、软骨或脂肪的能力^2,3,4,5. 然而, 骨髓是一种独特的组织, 由许多不同的细胞组成, 包括但不限于骨髓基质干细胞、干细胞、内皮细胞和免疫干细胞。因此, 分离和培养技术可以产生不同均匀性的细胞群。使用这种技术来测试细胞的分化潜能可能是有挑战性的。例如, 当比较不同基因型的小鼠的细胞时, 从混合细胞的数量开始限制对数据的解释。相反地, 获得骨髓基质干细胞和干细胞的同源种群在技术上是困难的, 可能不代表前体模型。

在我们的实验室里, 我们主要关注骨髓基质干细胞的利用, 因为它们有可能被分化成成骨细胞、破骨和脂肪。在这里, 我们提出了骨髓基质干细胞和干细胞分离和培养技术, 用于评估 osteoblastogenesis 或成的体外, 以及干细胞的培养, 以分化为破骨细胞。一种方法是利用混合的骨髓细胞 (bmc), 其中含有骨髓基质干细胞和干细胞直接适合成, osteoblastogenesis 和破 (称为总 bmc)。这种方法更接近于在骨髓微环境的细胞中发现的异质性的活体。另一种方法是将黏附在换药细胞中, 试图培养 “更纯净” 的骨髓基质干细胞和干细胞 (称为黏附骨髓基质干细胞) 的种群。后来的方法允许细胞培养实验开始与更准确的数量的骨髓基质干细胞或干细胞, 并降低潜在的复杂的间接影响的其他细胞的人口留在文化中。这两种方法以前都已发布, 用于解决不同的研究问题^6,7,8,9。