Au cours de la spermatogenèse, grosses vagues semi-synchrone des cellules germinales méiotiques sont rapidement et continuellement réapprovisionnés dans les testicules au début de la puberté et tout au long de l’âge adulte¹. Contrairement aux hommes, la méiose chez les femelles est initiée uniquement pendant le développement du foetus. Après la naissance, les ovocytes restent arrêtées dans un stade de dictyate prolongé de la prophase I avec une vésicule germinale intacte (GV ; enveloppe nucléaire) jusqu’à la puberté. Au début de la puberté, un sous-ensemble d’ovocytes sont cycliquement choisis pour subir la croissance et la maturation, marquant le début de reprise méiotique. Méiotique reprise dans les ovocytes adulte se manifeste par la disparition de la GV dans un processus appelé vésicule germinale ventilation (GVBD). L’ovocyte subit alors la condensation des chromosomes et ségrégation, suivi par extrusion de globule polaire. Les ovocytes deviennent arrêtés à progression au PPFI et sont stimulés pour compléter la deuxième et dernière division méiotique seulement après la fécondation.

La fertilité féminine est fortement tributaire de la réussite de la prophase méiotique j’ai progression. Clé c’est la formation d’une liaison physique entre les chromosomes homologues appelés les chiasmas, médiée par la réparation des induits ADN double brins (CDB) par l’intermédiaire de crossover recombinaison². Ce processus se produit dans le cadre d’un échafaudage de riches en protéines dynamique appelé complexe synaptonémal (CS) qui se forme entre les chromosomes homologues afin de faciliter leur synapsis³. Le SC est une fermeture à glissière-comme structure tripartite qui se compose de deux éléments latéraux parallèles reliées par des protéines de la région du centre qui détient homologues ensemble tout au long de la réparation de l’ADN en cours. Avant synapsis, précurseurs des éléments latéraux, appelés éléments axiales, forment entre sœur chromatides. Complexe synaptonémal protéines telles que SYCP2 et SYCP3 forment des éléments axiaux qui sont colocalisées pour les axes de la cohésion des chromatides au cours du début de la prophase. Plus tard service accepteurs pour la protéine de filament transversal, SYCP1, ce qui facilite l’assemblage de l’élément central et synapsis entre homologues alignés⁴. Dans les ovocytes de souris, synapsis complet est indiqué par la présence de 20 complètement chevauchement des tronçons SYCP3 et SYCP1, qui peuvent être visualisées à l’aide de la chromatine propager des préparations. Synapsis est terminé dès l’entrée dans le sous-étage pachytène, par lequel des véhicules multisegments matures qui sont destinés à des chiasmas forme entre homologues sont décorées avec mutL dimères d’homologue (MLH1/3) pour promouvoir leur traitement exact^{5,6 , 7}. l’entretien structurel des complexes de chromosomes (SMC), y compris cohesin, condensin et la SMC5/6 complexes, sont importants pour la régulation de la dynamique des chromosomes et la structure tout au long de la méiose^{8,9, 10,11,12}. Collectivement, ces événements s’assurer bi-orientation correcte des chromosomes homologues à lutter contre les pôles du fuseau après démontage de la SC.

La méiose des cellules est un modèle puissant afin d’examiner les rôles de diverses protéines dans maintenance du génome en raison de l’induction programmée et la réparation ultérieure des ADN CDB. En outre, la méiose chez les mammifères est également un modèle pertinent pour l’étude des modifications épigénétiques et l’empreinte¹³. Toutefois, il est techniquement difficile d’évaluer ces événements au cours de la méiose femelle, qui se déroule dans les ovaires foetales et néonatales chez les mammifères (Figure 1). Je peux être divisé en 5 sous-stades la prophase : leptonema, du zygotène, pachytène, diplonema et dictyate. Ici, nous décrivons comment isoler et faire la distinction entre fœtales et néonatales des ovaires et des testicules (Figure 2). Adapté de méthodes précédemment décrites, ce manuscrit présente également un protocole (étape 1) avec la vidéo de démonstration pour la préparation de la prophase méiotique femelle je la chromatine propage^14,15,16,17 . Lorsqu’il est couplé avec l’immunomarquage, tel que décrit dans les étapes 6 et 7, ce protocole permet une analyse microscopique détaillée de la prophase I événements dans les ovocytes.

L’ovogenèse est sujette aux erreurs et événements de missegregation de chromosomes au cours de la première division méiotique représentent la source la plus fréquente des maladies génétiques dans la descendance^18,19. Dans ce manuscrit (étape 2 du protocole), les auteurs décrivent un protocole dans lequel des ovocytes matures étagée de GV sont extraites apprêtées ovaires de souris femelles adultes. Dans des conditions favorables, ovocytes adulte subissent une hormone lutéinisante indépendante reprise de la méiose suite d’isolement et la culture²⁰. La reprise méiotique, ovocytes progressant grâce à la méiose I, puis arrêtent à la métaphase II. Ovocytes restent arrêtées lors de la métaphase II, sauf s’il est fécondé. Dans les étapes 2 à 5, nous adaptons protocoles rapportés antérieurement avec la vidéo de démonstration pour décrire comment collecter, culture et préparer la chromatine se propager préparations²¹ovocytes MI et MII. Cette chromatine diffusion technique permet clairement immunomarquage des protéines associées aux chromosomes. En outre, ce protocole permet également de distinguer les chromosomes bivalents et vaccin monovalents et peut encore résoudre seule sœur chromatides à faciliter l’appréciation de la ploïdie de l’ovocyte. Par conséquent, en plus de révéler des modèles de localisation des protéines méiotiques, ce protocole peut également servir un outil inestimable pour élucider les causes potentielles de missegregation de chromosomes au cours de la MI et MII.