Under spermatogenesen, er store semisynkron bølger af meiotiske kønsceller hurtigt og kontinuerligt genopfyldes i testiklerne i starten af puberteten og hele voksenlivet¹. I modsætning til mænd initieres meiose hos kvinder alene i løbet af fostrets udvikling. Efter fødslen, oocyter fortsat arresteret i en langvarig dictyate fase af prophase jeg med en intakt germinale vesikel (GV; nukleare kuvert) indtil puberteten. Ved begyndelsen af puberteten vælges en delmængde af oocytter cyklisk underkastes vækst og modning, markerer indledningen af meiotiske genoptagelse. Meiotiske genoptagelse i fuldt udvokset oocyter er manifesteret ved forsvinden af GV i en proces kendt som germinale vesikel opdeling (GVBD). Oocyt derefter gennemgår kromosom kondens og segregation, efterfulgt af polar body ekstrudering. Oocytter blive pågrebet progression til MII og er stimuleret til at fuldføre den anden og sidste meiotiske deling kun efter befrugtningen.

Kvindelige frugtbarhed er stærkt afhængige af succesen af meiotiske prophase jeg progression. Nøglen til dette er dannelsen af en fysisk sammenhæng mellem homologe kromosomer kendt som chiasmata, hvilket er medieret af reparation af inducerede DNA dobbeltstrenget pauser (DSBs) via crossover rekombination². Denne proces sker i forbindelse med en dynamisk protein-rige stillads kendt som synaptonemal complex (SC), der danner mellem homologe kromosomer at lette deres synapsis³. SC er en lynlås-lignende tredelte struktur, der består af to parallelle laterale elementer forbundet af centrale region proteiner der holder homologs sammen i hele igangværende DNA reparation. Før synapsis danner prækursorer af de laterale elementer, kaldet aksial elementer, mellem Søster kromatider. Synaptonemal komplekse proteiner som SYCP2 og SYCP3 udgør aksial elementer, der colocalize til søster-chromatid samhørighed akser under tidlige prophase. Disse senere fungere som bindende websteder for tværgående filament protein, SYCP1, der letter centrale element forsamling og synapsis mellem justeret homologs⁴. I mus oocytter, er komplet synapsis indiceret ved tilstedeværelsen af 20 helt overlappende SYCP3 og SYCP1 strækninger, som kan visualiseres ved hjælp af kromatin sprede præparater. Synapsis er afsluttet træder i pachytene underniveau, hvorved modne delefiltre, der er bestemt til form chiasmata mellem homologs er dekoreret med mutL homolog (MLH1/3) dimerer at fremme deres korrekte behandling^{5,6 , 7}. den strukturelle vedligeholdelse af kromosomer (SMC) komplekser, herunder cohesin, condensin og SMC5/6 komplekse, er vigtig for reguleringen af kromosom dynamik og struktur i hele meiose^{8,9, 10,11,12}. Kollektivt, sikre disse begivenheder ordentlig bi-orientering af homologe kromosomer til modsatrettede spindel polakker efter afmontering af Overvågningsudvalgets

Meiotiske cellecyklus er en kraftfuld model til at undersøge forskellige proteiner i genom vedligeholdelse på grund af den programmerede induktion og efterfølgende reparation af DNA DSBs roller. Derudover er pattedyr meiose også en relevant model for studiet af epigenetiske ændringer og prægning¹³. Men, det er teknisk vanskeligt at vurdere disse begivenheder under kvindelige meiose, der foregår i føtal og neonatal æggestokkene hos pattedyr (figur 1). Prophase jeg kan opdeles i 5 substages: leptonema, zygonema, pachynema, diplonema og dictyate. Heri, beskriver vi hvordan man isolere og skelne mellem fostrets og neonatal æggestokke og testikler (figur 2). Tilpasset fra tidligere beskrevne metoder, dette manuskript også skitserer en protokol (trin 1) med video demonstration for forberedelse af kvindelige meiotiske prophase jeg kromatin spreder^14,15,16,17 . Når kombineret med immunolabelling, som beskrevet i trin 6-7, denne protokol giver mulighed for detaljeret mikroskopisk analyse af prophase jeg begivenheder i oocytter.

Oogenesen er fejlbehæftet, og kromosom missegregation begivenheder i løbet af den første meiotiske deling repræsenterer den mest almindelige kilde til genetisk sygdom i afkom^18,19. I dette manuskript (protokol trin 2) beskriver vi en protokol, hvor modne GV-iscenesatte oocyter er udvundet fra PRIMES æggestokkene af voksne hunmus. Betingelser, støttende gennemgå fuldt udvokset oocyter luteiniserende hormon-uafhængige genoptagelse af meiose efter isolation og kultur²⁰. Efter meiotiske genoptagelse, oocyter fremskridt gennem meiose, derefter anholde på metafase II. Oocytter fortsat arresteret på metafase II, medmindre befrugtet. I trin 2 – 5, tilpasser vi tidligere rapporteret protokoller med video demonstration at beskrive, hvordan at indsamle, kultur og forberede kromatin sprede præparater²¹MI og MII oocyter. Denne kromatin spredning teknik giver mulighed for klare immunolabelling af proteiner tilknyttet kromosomer. Desuden, denne protokol kan også bruges til at skelne mellem bivalent og univalent kromosomer, og kan yderligere løse enkelt Søster kromatider at lette vurderingen af oocyt Ploidi. Derfor, ud over afslørende lokalisering mønstre af meiotiske proteiner, denne protokol kan også tjene som et uvurderligt værktøj for belyse mulige årsager til kromosom missegregation under MI og MII.