在精子发生过程中, 在青春期开始和整个成年期的¹中, 减数分裂生殖细胞的大的半同步波在睾丸中迅速和持续补充。与男性不同的是, 雌性的减数分裂只在胎儿发育期间开始。出生后, 卵母细胞在前期 I 期的长期 dictyate 阶段仍被逮捕, 并有完整的生发泡 (如: 核信封) 直到青春期。在青春期开始时, 卵母细胞的一个子集被周期性地选择来经历生长和成熟, 标志着减数分裂恢复的开始。完全生长的卵母细胞减数分裂的恢复表现为在一个称为生发泡破裂 (GVBD) 的过程中, 该方法的消失。卵母细胞随后进行染色体凝结和分离, 其次是极性体挤压。卵母细胞在进化到产业部后被逮捕, 并被刺激以完成受精后的第二和最后减数分裂。

女性生育力是高度依赖于减数分裂前期 I. 进展的成功。关键是形成一个物理联系之间的同源染色体称为交叉, 这是调解通过修复诱导 DNA 双链断裂 (DSBs) 通过交叉重组²。这个过程发生在一个动态富含蛋白质的脚手架的背景下, 称为联会复合体 (SC), 在同源染色体之间形成, 以促进它们的联会³。SC 是一种拉链状的三方结构, 由由中央区域蛋白质连接的两个平行的侧向元素组成, 在整个 DNA 修复过程中同系物在一起。在联会之前, 侧向元素的前体称为轴向元素, 在姐妹条染色单体之间形成。联会复杂的蛋白质, 如 SYCP2 和 SYCP3 形成轴向元素, colocalize 的姐妹-染色单体凝聚轴在早期前期。这些以后担当捆绑的站点为横向长丝蛋白质 SYCP1, 促进中央元素汇编和联会在被排列的同系物⁴之间。在小鼠卵母细胞中, 完整的联会是由20完全重叠的 SYCP3 和 SYCP1 伸展的存在所表明的, 它可以用染色质传播制剂进行可视化。联会是在进入粗线期 substage 后完成的, 由此, 注定要在同系物之间形成交叉的成熟分频者用 mutL 同源 (MLH1/3) 脂肪酸进行装饰, 以促进其精确^处理5, 6^{, 7}. 染色体 (SMC) 复合物的结构维护, 包括内聚力联合体、condensin 和 SMC5/6 复合体, 对于整个减数分裂过程中染色体动力学和结构的调控非常重要 8, 9, ^10,11,12。总的来说, 这些事件确保了同源染色体在 SC 拆卸后与主轴两极的正确双向定位。

减数分裂细胞周期是一个强大的模型, 以检查不同的蛋白质在基因组维护的作用, 由于程序性诱导和后续修复 DNA DSBs。此外, 哺乳动物减数分裂也是研究表观遗传修饰和印迹¹³的相关模型。然而, 在技术上很难评估这些事件在女性减数分裂期间发生在胎儿和新生儿卵巢在哺乳动物 (图 1)。前期我可以分为 5 substages: leptonema, zygonema, pachynema, diplonema 和 dictyate。在这里, 我们描述如何隔离和区分胎儿和新生儿的卵巢和睾丸 (图 2)。根据以前描述的方法, 本手稿还概述了一个协议 (步骤 1) 与视频演示准备女性减数分裂前期 I 染色质传播^14,15,16,17.当与 immunolabelling 结合, 如步骤6-7 所述, 本协议对卵母细胞前期 I 事件进行详细的显微分析。

卵子发生过程是易出错的, 染色体 missegregation 事件在第一次减数分裂分裂期间代表最常见的来源的遗传疾病的^后裔18, 19.在这篇手稿 (协议步骤 2) 中, 我们描述了一个协议, 其中从成年雌性小鼠的引物卵巢提取成熟的自已的牙分期卵母细胞。在支持条件下, 完全生长的卵母细胞在分离和培养后接受促黄体激素-独立恢复减数分裂²⁰。在减数分裂恢复后, 卵母细胞在第二中期被拘捕。卵母细胞在中期 II 中仍被逮捕, 除非受精的.在步骤2–5中, 我们将以前报告的协议与视频演示相适应, 以描述如何收集、培养和准备用于染色质传播准备的 MI 和产业部卵母细胞²¹。这种染色质传播技术允许明确 immunolabelling 与染色体相关的蛋白质。此外, 该协议还可以用来区分二价和单叶染色体, 并可以进一步解决单亲姐妹条染色单体, 以促进评估卵母细胞的倍性。因此, 除了揭示减数分裂蛋白的定位模式外, 该协议还可以作为一个宝贵的工具, 以阐明在 MI 和产业部的染色体 missegregation 的潜在原因。