В ходе сперматогенеза большие полусинхронные волны meiotic зародышевые клетки быстро и непрерывно пополняется в яички в начале полового созревания и во взрослой жизни¹. В отличие от мужчин мейоза у самок инициируется исключительно во время внутриутробного развития. После рождения, ооциты остаются арестованных в длительной dictyate стадии профазе I с нетронутыми Жерминаль везикул (GV; ядерная оболочка) до полового созревания. В начале полового созревания подмножество яйцеклетки циклически выбираются пройти роста и созревания, маркировка начало meiotic возобновления. Meiotic возобновления в взрослой ооциты проявляется исчезновение GV в процессе, известном как Жерминаль везикул разбивка (GVBD). Яйцеклетка затем подвергается конденсация хромосом и сегрегации, следуют экструзии полярного тельца. Ооциты стать арестован по прогрессии к MII и стимулируются завершить второй и последний meiotic отделе только после оплодотворения.

Женскую плодовитость сильно зависит от успеха meiotic профаза я прогрессии. Ключом к этому является формирование физической связи между гомологичных хромосом, известны как chiasmata, которые при посредничестве ремонт индуцированных разрывы двойной нити ДНК (DSBs) через кроссовер рекомбинации². Этот процесс происходит в контексте динамических богатых белком эшафот, известный как синаптонемного комплекса (SC), который формирует между гомологичных хромосом для облегчения их Синапсис³. СК является молния как трехсторонняя структура состоит из двух параллельных боковых элементов, соединены центрального региона белки, содержащий гомолог вместе на протяжении текущей репарации ДНК. До синапса прекурсоров боковых элементов, называемых осевой элементами, образуют между сестра chromatids. Белков синаптонемного комплекса таких как SYCP2 и SYCP3 образуют осевой элементы, которые colocalize сестра хроматиды сплоченности осям во время ранних профаза. Позже в качестве привязки сайтов для поперечной нити белка, SYCP1, которая облегчает центральным элементом Ассамблеи и синапса между унифицированных гомолог⁴. В ооцитов мыши полный Синапсис обозначается присутствие 20 полностью что перекрывающиеся участки SYCP3 и SYCP1, которые могут быть визуализированы с помощью хроматина распространение препаратов. Синапсис завершена после вступления в pachytene substage, whereby Зрелые кроссоверы, которые предназначены для chiasmata формы между гомолог украшены димеры mutL гомолога (MLH1/3) для содействия их точная обработка^{5,6 , 7}. структурные поддержание хромосом (SMC) комплексов, включая Когезин, condensin и комплекс, СМТ5/6 имеют важное значение для регулирования хромосома динамики и структуры всей мейоз^{8,9, 10,,1112}. В совокупности эти события обеспечить надлежащего би направленности гомологичных хромосом против поляков шпинделя после разборки SC.

Meiotic клеточный цикл представляет собой мощный модель для изучения роли различных белков в геном обслуживания благодаря запрограммированных индукции и последующего ремонта DSBs ДНК. Кроме того у млекопитающих мейоз является также соответствующую модель для изучения импринтинг¹³и эпигеномные изменения. Однако технически трудно оценить эти события во время женского мейоз, который проходит в яичниках плода и новорожденного в млекопитающих (рис. 1). Я можно разделить на 5 подэтажи профаза: leptonema, zygonema, pachynema, diplonema и dictyate. Здесь мы опишем, как изолировать и различие между плода и новорожденного яичников и яичек (рис. 2). Адаптировано из описанных ранее методов, этот манускрипт также излагаются с видео демонстрации для подготовки женщин meiotic профаза протокол (шаг 1) я хроматина распространяется^14,,1516,17 . В сочетании с immunolabelling, как описано в шагах 6-7, этот протокол позволяет подробный анализ микроскопических профаза я события в ооцитов.

Женских ошибок – хромосомы missegregation события во время первого дивизиона meiotic представляют собой наиболее распространенным источником генетических заболеваний в потомстве^18,19. В этой рукописи (протокол шаг 2) мы описываем протокол, в котором зрелых яйцеклеток, GV-поставил извлекаются из загрунтовать яичников взрослых самок мышей. При благоприятных условиях взрослой ооциты проходят лютеинизирующего гормона независимые возобновление после изоляции и культуры²⁰мейоз. После возобновления meiotic ооциты прогресс через мейоз я, а затем арестовать на метафазы II. Ооциты остаются арестованных в метафазы II, если оплодотворенной. В шагах 2-5 мы адаптируем сообщалось ранее протоколов с видео демонстрации для описания как собирать, культуры и подготовиться хроматина распространения подготовку²¹ми и MII ооцитов. Этот хроматина, распространение техника позволяет ясно immunolabelling белков, связанные с хромосомами. Кроме того, этот протокол может также использоваться для различения двухвалентные и однолистных хромосом и далее может решить один сестра chromatids для облегчения оценки плоидности ооцитов. Таким образом Помимо выявления локализации шаблонов meiotic белков, этот протокол может также служить бесценным инструментом для выяснения возможных причин возникновения missegregation хромосомы во время ми и MII.