Denne protokollen beskriver bruken av et modifisert T-maze å vurdere funksjonelle læring/minne i kvelning hjertestans-indusert cerebral iskemi.
Bakgrunn: Evaluering av mild til moderat kognitiv svekkelse i en global cerebral iskemi (i.e. hjertestans) modell kan være vanskelig på grunn av dårlig bevegelse etter operasjonen. For eksempel kunne rotter som gjennomgå kirurgiske prosedyrer og er utsatt for Morris vann labyrinten ikke svømme, således renons eksperimentet.
Ny metode: Vi etablert en endret atferd spontane veksling T-maze test. Hovedfordelen med endrede T-maze protokollen er dens relativt enkel design som er kraftig nok til å vurdere funksjonelle læring/minne etter ischemia. Dessuten er dataanalyse enkel og grei. Vi brukte T-maze for å bestemme rottene læring/minne underskudd både i tilstedeværelse eller fravær av mild til moderat (6 min) asphyxial hjertestans (ACA). Rotter ha en naturlig tendens til leting og utforske alternative armene i T-maze, mens hippocampus-lesioned rotter har tendens til å vedta en side-preferanse resulterer i redusert spontan gjeld prosenter, avslører den hippocampus-relaterte funksjonell læring/minne i tilstedeværelse eller fravær av ACA.
Resultatene: ACA grupper har høyere siden-preferanse forholdstall og lavere alternations i forhold til kontrollen.
Sammenligning med eksisterende metode(r): The Morris vann og Barnes labyrinten er mer fremtredende for å vurdere læring/minne-funksjonen. Men er Morris vann labyrinten mer stressende enn andre labyrinter. Barnes labyrinten er mye brukt til å måle referanse (langsiktige) minne, mens ACA-indusert nevrokognitive underskudd er tettere knyttet til å jobbe (korttidshukommelse).
Konklusjon: Vi har utviklet en enkel, men effektiv strategi for å avgrense arbeider (kortsiktige) minne via T-maze i vår globale cerebral iskemi modell (ACA).
Ifølge American Heart Association (2017), hjertestans (CA)-indusert dødelighet oppstår hver fire minutter, og påvirker over 400 000 personer per år i USA1. Det er godt dokumentert at CA kan forårsake neuronal hjernen skader som følge av utilstrekkelig blod perfusjon2,3,4. CA-indusert hjerneskade oppstår i regionen ischemia-sensitive CA1 av hippocampus5,6,7, påvirker nevroner som er kritiske til læring og hukommelse8,9, 10,11,12. Videre spiller tap av dendrittiske ryggraden tetthet, under iskemiske forhold prefiks (i.e. CA1 nevroner), en avgjørende rolle i romlig minne verdifall13,14,15. På grunn av disse patologiske forandringer etter CA, atferdsmessige lidelser som: angst, depresjon, posttraumatisk stresslidelse og hukommelsestap er mer utbredt. Selv om det har vært fremskritt innen medisinsk teknologi (dvs. effektiv ambulerende service) som samsvarer med forbedret CA overlevelse, mislykkes de fleste av de neuroprotective behandlingene (unntatt nedkjøling) å forbedre funksjonelle resultater etter CA16 ,17. CA overlevende vanligvis har en dårlig kvalitet av livet, og er belastet med trinnvis medisinske utgifter16.
Kognitiv status vurderinger for cerebral iskemi via atferdsmessige tester er viktige for å finne både narkotika effekt og til slutt utvikle en vellykket klinisk studie. I 1940 utformet Edward Tolman den første opptreden rettssaken å studere hippocampus-baserte romlig minne18. Deretter ble ulike labyrinter (dvs. Morris vann labyrinten, radial labyrinten, T – eller Y-labyrint, og Barnes labyrint) utviklet for å evaluere hippocampus-baserte romlige læring og hukommelse i rotter19,20,21,22 ,23. En av flere brukte atferdsmessige testen er Morris vann labyrinten, som undersøker romlige læring og minne i rotte modeller24. Men krever Morris vann labyrinten rotta å svømme og utøve full funksjon og kontroll. For iskemi eksperimenter som asphyxial hjertestans (ACA, en rotte modell av CA) modell, cannulation i femoral arterien/venen må få viktig blodtrykk, blod gasser og innføring av ulike stoffer. Siden femoral arterien/blodåre cannulation kan hemme etappe mobilitet gjengivelse rottas evne til å svømme riktig, kanskje Morris vann labyrinten ikke den mest hensiktsmessige å teste andre under ACA.
Barnes labyrinten er andre brukte atferdsmessige testen undersøke romlige læring og hukommelse på gnager modeller. Barnes labyrinten krever ikke anstrengelse full funksjon og kontroll, og dermed mindre stressende enn Morris vann labyrinten. Tidligere vi utført eksperimenter ved hjelp av Barnes labyrinten for å avgjøre hvis funksjonelle læring/minne forskjeller oppstår mellom kontrollen eller humbug versus ACA-indusert rotter. Data innhentet for Barnes labyrinten ikke oppløsningen å teste andre etter milde til moderate ACA skyldes at Barnes labyrinten er mye brukt til å måle referanse (lang sikt) minne25,26, mens ACA-indusert nevrokognitive underskudd mer nært knyttet til arbeider (kortsiktige) minne27,28,29,30 antyder at Barnes labyrinten er mindre levedyktig for å vurdere minnefunksjon i våre ACA modell.
Derfor utviklet vi en modifisert T-maze bruk av spontane veksling test for å vurdere arbeider (kortsiktige) minne etter ACA. Modifisert T-maze spontan veksling testens stor fordel er dens enkelhet og minimal belastning på rotter i forhold til andre opptreden tester på grunn av at den endrede T-maze ikke krever tidligere dyr lærer, som vel som tung beregningsorientert analyse eller sub rutiner (dvs. video imaging av rotte) som kreves av Morris vann labyrinten og Barnes labyrint. Her viser vi at endrede T-maze spontan veksling testen er en enkel og ennå svært effektiv opptreden prøve paradigme som kan tilby høy nok oppløsning til nøyaktig oppdage og evaluere hippocampus funksjon i sykdommer som forårsake kortsiktige minne tap (dvs. ACA).
Endringer ble gjort i studien sammenlignet med Deacon og Rawlins’ protokollen31. 3D-skriver ble brukt til å bygge T-maze. 3D-utskrift gir rimelige og kostnadseffektive alternativer til kommersialiserte T-maze. For å redusere rotter angst under testen, ble T-maze utført i mørke rom med minimum belysning. Når rotta angitt en av målet armene, blokkert vi forsiktig motstridende armen. Dette unngår mulig stress fra test, samt mulig skade til rottene hale mens senking giljotinen døren. Noen unø…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbeidet ble støttet av den nasjonale institutter for helse/National Institute av nevrologiske lidelser og hjerneslag støtte 1R01NS096225-01A1, American Heart Association gir AHA-13SDG1395001413, AHA-17GRNT33660336, AHA-17POST33660174, den Louisiana State University Grant i bistand research council, Malcolm Feist hjerte forskning brorskap, og Evelyn F. McKnight hjernen Institute.
3D Printer | MakerBot | Replicator | Fifth generation |
3D Printer Filament | Hatchbox | PLA, 1.75 mm filament diameter | |
200 Proof Pure Ethanol | Koptec | V1005SG | |
Sani-Chips | PJ Murphy-Forest Products | Size: 8 to 20 mesh; 2.2 cubic foot/package; autoclavable bags | |
Rat | Charles River Laboratories | Sprague-Dawley | |
Vecuronium bromide | Sun Pharmaceutical | 47335-931-40 | 10 mg |
Epinephrine | Par Pharmaceutical | 42023-103-01 | Adrenalin Chloride Solution 1 mg/mL, 1:1000 |
Buprenorphine Hydrochloride Injection | Pfizer | 00409-2012-32 | 0.3mg/mL |
SketchUp | Trimble Inc. | 3D modeling software | |
VentElite Small Animal Ventilator | Harvard Apparatus | 55-7040 | Animals raging in size from mouse to guinea pig (10g to 1kg) |
PowerLab 8/35 | Adinstruments | PL3508 | 8 analog input channels – 4 of which can be used in differential mode. |
Bio Amps | Adinstruments | FE132 | The Bio Amp is a galvanically isolated, high-performance differential bio amplifier optimized for the measurement of a wide variety of biological signals such as ECG, EMG and EEG recordings. |
Quad Bridge Amp | Adinstruments | FE224 | A four-channel, non-isolated bridge amplifier designed to allow the PowerLab to connect to most DC bridge transducers. |
LabChart 8 | Adinstruments | ||
ABL80 FLEX CO-OX blood gas analyzer | Radiometer | pH / p CO2 / p O2 | |
SURFLO Teflon I.V. Catheter | Terumo | sc-361556 | Only use the flexible thin wall catheter (49-mm long) |
Pipet/Infusion Needle | Hamilton | 7748-03 | 17-gauge; 93-mm long; 10-degree angle |
Classic T3 Vaporizer | SurgiVet | VCT302 | Classic T3 Isoflurane Funnel Fill |
ENVIRO-PURE Charcoal Canister | SurgiVet | 32373B10 | Designed to absorb waste anesthetic gas |
O2 single flowmeter | SurgiVet | 32375B1 | 0-1000 mL |
N2O Flowmeter | VetEquip | 401721 | 0-4LPM |
Clay Adams Intramedic Luer-Stub Adapter (Sterile) | Becton Dickinson | 427565 | 23 gauge |
Micro Forceps | Black and Black surgical | B3FRC-18 RM-8 | 7 1/4" (18 cm), 8mm RH, counterweight w/ guide pin 2mm, platform 6 x .3 mm, curved. |
Halstead Mosquito Forceps | Roboz | RS-7111 | Curved; 5" Length, 1.3 mm tip diameter, 2.1 mm jaw width |
Mixter Forceps | Roboz | RS-7291 | 5.25" Curved Extra Delicate, 1.1 mm tips |
Castroviejo Micro Dissecting Spring Scissors | Roboz | RS-5650 | Straight, Sharp Points; 9 mm Cutting Edge; 0.15 mm Tip Width; 3 1/2" Overall Length |
Mayo-Stille Scissors | Roboz | RS-6891 | 5.5" Round Curved |
Dumont #5 Forceps | Roboz | RS-5058 | 45 Deg Dumoxel Tip Size .10 x .06 mm |
Olsen-Hegar Combination Scissor And Needle Holder | Roboz | RS-7884 | Cross Serration Tip; 5.5" Length |
Moloney Forceps | Roboz | RS-8254 | Serrated; Slight Curve; 4.5" Length |