Implantación de sondas de silicio crónica y grabación de las células Hippocampal del lugar en un aparato de cinta enriquecido
Summary
Describimos los pasos diversas sondas de silicio crónica del implante y registrar lugar células en ratones que son cabeza de funcionamiento fijo en un aparato de cinta enriquecida con cue.
Abstract
Un requisito importante para la comprensión de la función cerebral es la identificación del comportamiento y correlaciona la actividad de la célula. Sondas de silicona son avanzadas electrodos para grabación electrofisiológica a gran escala de la actividad neuronal, pero los procedimientos para su implantación crónica son todavía subdesarrollados. La actividad de las células hippocampal del lugar se sabe que correlacionan con la posición de un animal en el medio ambiente, pero los mecanismos subyacentes no están claros todavía. Para investigar las células de lugar, aquí se describe un conjunto de técnicas que van desde la fabricación de dispositivos para la sonda de silicona crónica implantes para el monitoreo de la actividad de campo lugar en un aparato de cinta enriquecida con cue. Una unidad de micro y un sombrero son construidos por el montaje y sujeción a impreso en 3D las piezas de plástico. Una sonda de silicona es montada en la unidad de micro, limpiada y cubierta con el tinte. Una primera cirugía se realiza para fijar el sombrero sobre el cráneo de un ratón. Pequeños hitos son fabricados y a la banda de una caminadora. El ratón está capacitado para funcionar cabeza fijada en la caminadora. Se realiza una segunda cirugía para implantar la sonda de silicona en el hipocampo, después de que las señales electrofisiológicas banda ancha se registran. Finalmente, la sonda de silicona es recuperada y limpiada para su reutilización. El análisis de la actividad de la célula de lugar en la cinta revela una diversidad de mecanismos de campo, que el beneficio del enfoque.
Introduction
Sondas de silicio presentan varias ventajas para las grabaciones electrofisiológicas, incluido el hecho de que están diseñados con perfiles agudos reduciendo al mínimo daño tisular y que presentan un diseño preciso de densamente grabación sitios1, 2,3,4. Se utilizan para el estudio de diferentes sistemas en diferentes especies, incluyendo seres humanos3,5,6, con diversos enfoques1,7. Sin embargo, su uso recurrente es todavía relativamente limitado debido a su costo, fragilidad y el hecho de que carecen de métodos convenientes para los experimentos crónica8. Los avances recientes en tecnología de impresión 3D han hecho posible el diseño personalizado de dispositivos tales como unidades de micro y las placas de la cabeza para permitir un más fácil manejo de estos delicados electrodos. En un primer paso, se describe cómo crear y utilizar un conjunto de herramientas que hemos desarrollado para la implantación de sondas de silicio crónica14.
Mientras que las células de lugar típicamente se estudian libremente mover animales en laberintos, recientemente ellos también investigaron en entornos virtuales15 y en cinta de correr apparatii9 (figura 1A). Estos métodos experimentales ofrecen la ventaja de que los animales pueden cabeza-restringida, el uso de 2 fotones microscopio15, abrazadera del remiendo16y optrode9,10,11 técnicas más fáciles, además de proporcionar mejor control sobre el comportamiento animal y señales ambientales12. En un segundo paso, vamos a presentar los procedimientos de formación de ratones y grabar la actividad de células de lugar en un aparato de cinta de correr.
Protocol
Representative Results
Discussion
Crónica registro de la actividad neuronal es fundamental para entender procesos de los nervios tales como campos de hippocampal del lugar. Nuestro enfoque para realizar implantantation de sonda de silicona crónica se distingue de otros métodos7,18,19,20 por el hecho de que es relativamente simple recuperar el paquete de electrodos en al final del experimento. Mientras que células de lugar t…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por el Instituto Coreano de ciencia y tecnología programa institucional (proyectos Nº 2E26190 y 2E26170) y el programa de ciencia de frontera humana (RGY0089/2012).
Materials
| Silicon Probe | Neuronexus | Buzsabi32 | Recording electrode |
| Recording system | Intantech | RHD2132/RHD2000 | |
| 3D printer | Asiga | Pico Plus 27 | High resolution printer for micro-drive |
| 3D printer | Stratasys | Mojo | Lower resolution printer for hat components |
| Stereotaxic apparatus | Kopf | Model 963 | |
| Binocular microscope | Leica | M60 | |
| Treadmill apparatus | We build them |
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