Análisis de la marcha automática en ratones con lesión de la constricción crónica
Summary
La evaluación precisa de la respuesta al dolor en un modelo animal neuropático es fundamental investigar la patofisiología del dolor enfermedades y desarrollar nuevos analgésicos. Presentamos un método sensible y objetivo para determinar la función sensorial del roedor hind de la pata por un sistema de análisis automatizado de la marcha.
Abstract
La prueba de von Frey es un método clásico que ha sido ampliamente utilizado para examinar la función sensorial de los animales de dolor neuropático. Sin embargo, tiene algunas desventajas como datos subjetivos y el requisito de un experimentador calificado y con experiencia. Hasta la fecha, una gran variedad de modificaciones han mejorado el método de von Frey, pero todavía tiene algunas limitaciones. Los informes recientes han sugerido que el análisis de la marcha producen datos más precisos y objetivos de los animales neuropáticos. Este protocolo muestra cómo realizar el análisis de la marcha automática para determinar el grado de dolor neuropático en ratones. Después de varios días de aclimatación, los ratones se les permitía caminar libremente en el piso de cristal para iluminar huellas. Entonces, la cuantificación de la huella y del paso fueron realizados a través de clips de vídeo con el análisis automático de diversos parámetros a pie, como área de impresión, oscilación tiempo pata, ángulo de pata, etc.
El objetivo principal de este estudio es describir la metodología de análisis de la marcha automática y brevemente compararla con los datos de la prueba sensorial clásica con filamentos de von Frey.
Introduction
Los cambios patológicos del sistema nervioso inducidos por trauma, disfunción metabólica, inflamación, infección, isquemia, o enfermedad autoinmune ocasionalmente dar lugar a dolor neuropático, que se define como un dolor que se presenta como una consecuencia directa de una lesión o enfermedad que afectan el sistema somatosensorial1. El dolor neuropático es generalmente insoportable y por desgracia, analgésicos convencionales generalmente no producen suficiente de alivio de dolor2. Una característica importante del dolor neuropático contiene dolor espontáneo y evocado por el estímulo(, alodinia o hiperalgesia). Allodynia es una respuesta nociceptiva que se produce a estímulos normalmente no dolorosos, como toque de luz cálido estímulo. Hiperalgia indica una respuesta de mayor dolor a estímulos mecánicos o térmicos nocivos3. Aunque estos dos síntomas críticamente deterioran la calidad de vida de la paciente, alodinia mecánica evocada por la estimulación táctil suave es el síntoma más agravante porque contacto suave es difícil de evitar en la vida cotidiana.
Investigar el mecanismo subyacente y nuevos analgésicos para el tratamiento del dolor neuropático, la medida exacta de la respuesta al dolor es esencial. Se han desarrollado numerosos modelos animales de dolor neuropático las respuestas nociceptivas en el trasero de la pata área debido a su alta accesibilidad4,5,6,7. Así, se han realizado evaluaciones de respuesta de dolor más en la superficie plantar o dorsal de la pata trasera mediante la aplicación de estímulos mecánicos utilizando instrumentos especiales, como los filamentos de von Frey. Una el método más frecuentemente utilizado es el y por el método descrito por Dixon8 y más adelante modificado versiones9,10. Sin embargo, investigadores muy cualificados y con experiencia se requiere para realizar la prueba de von Frey y los resultados pueden ser subjetivos.
El sistema de análisis automatizado de la marcha puede investigar trastornos neurológicos y neuromusculares mediante la medición de diversos parámetros de caminar libremente mover roedores. En una gran variedad de modelos animales de lesión del nervio, pueden evaluarse el grado de nocicepción y el efecto antinociceptivo de varios tratamientos sin agregar un dolor estimulación11,12,13, 14. este sistema de análisis puede detectar parámetros de marcha estáticos y dinámicos, tales como: área de impresión (el área de la impresión completa de la pata que entra en contacto con el suelo) de la pata, pata de intensidad (intensidad media de la zona de pata contacto), (la longitud de la zancada postura de distancia entre colocaciones sucesivas de la misma pata), fase (la duración de contacto con el suelo de una sola pata trasera), secuencia de paso (el orden en que las cuatro patas se colocan en el piso), swing (la duración de la fase de oscilación) y velocidad (computado del oscilación de longitud de la zancada y duración de la oscilación expresada en píxeles por segundo). Este artículo muestra cómo utilizar un sistema de análisis y proporciona una breve comparación de los datos de la prueba de von Frey utilizando ratones neuropático de constricción crónica lesión (CCI).
Protocol
Representative Results
Discussion
Actualmente, medición del allodynia mecánico mediante el uso de filamentos de von Frey es el más ampliamente utilizado método en modelos animales de dolor para demostrar hipersensibilidad táctil. Como modelos animales de dolor neuropático han seguido a desarrollar, la metodología de evaluación para la función sensorial ha sido también mejorada8,9,10,15. En esos informes, se ha sugerid…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Esta investigación fue apoyada por Chungnam University, Corea Instituto Nacional de Medicina Oriental (KIOM) y una donación de Corea salud tecnología R & D proyecto a través de la Corea salud industria desarrollo Institute (KHIDI), financiado por el Ministerio de salud & Bienestar, República de Corea (número: HI15C0007).
Materials
| 0.9% Saline | JW Pharmaceutical | N/A | Vehicle for drugs |
| 1ml syringe | BD Plastipak | 300013 | Injecting device |
| 2, 2, 2-tribromoethanol (97% purity) | Sigma | T48402 | Anesthetic |
| 2-methyl-2-buthanol (99% purity) | Sigma | 152463 | Solvent for 2, 2, 2-tribromoethanol |
| Catwalk Automated gait analysis system | Noldus | N/A | Automatic analysis software of aniaml gait |
| Chromic catgut (4-0 thickness) | AILEE | C442 | Ligature to make chronic constriction injury on the sciatic nerve |
| Gabapentin | Sigma | Y0001280 | Analgeisc, Used as a positive control drug in this study |
| Graefe Forceps | F.S.T | 11051-10 | Surgical instrument |
| Heating Pad | DAESHIN ELECTRONICS | M-303AT | Regulation of body temperature |
| ICR Mouse | Samtaco | N/A | Experimental animal |
| Mersilk (3-0 thickness) | ETHICON | W598H | Suture material for surgical closure of skin |
| Micro-Mosquito | F.S.T | 13010-12 | Surgical instrument |
| Micro-scissors | F.S.T | 14090-09 | Surgical instrument |
| Needle holder | F.S.T | 12002-12 | Surgical instrument |
| Povidone Iodine | Firson | N/A | Disinfectant to prevent infection after surgery |
| Scalpel blade | F.S.T | 10010-00 (#10) | Surgical instrument to make an incision |
| Scalpel handle | F.S.T | 10003-12 (#3) | Surgical instrument to make an incision |
| Von-Frey filaments | North Coast | NC12775-99 | Measurement device to test sensory function for mechanical stimulation |
Referências
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