Terapia de reemplazo de órganos que habitualmente se lleva a cabo en todo el mundo ha salvado millones de vidas. Trasplante sólido del órgano ocurre en aproximadamente 100 pacientes por millón de personas en los Estados Unidos anualmente, mientras que un mayor número todavía están en listas de espera recibir órganos de donantes debido a una grave escasez de suministro (de acuerdo con información proporcionada por el órgano Adquisición y trasplante de la red – OPTN/UNOS: optn.transplant.hrsa.gov). Trasplante de órganos es altamente regulado con el fin de reducir los residuos de órganos y salvar vidas, pero las herramientas científicas utilizadas para informar de estas regulaciones están limitadas en su eficacia. Por ejemplo, la comunidad científica reconoce plenamente los Estados altamente polimórficos de las moléculas HLA y precisas pruebas genéticas de ADN mediante la tipificación de alta resolución y basados en la secuencia escribiendo (SBT) se han desarrollado en estos últimos años^{1, 2}. sin embargo, métodos de prueba de aloanticuerpo no han todavía sido capaces de producir la gran variedad de secuencias HLA individuales como puntas de prueba de antígeno. La prueba estándar de hoy en día utiliza un panel invariable de ~ 100 antígenos alélicos que constan de variantes comunes del HLA, A, B, C, DQ, DP y DR las secuencias en las poblaciones humanas^3,4,5,6. Con frecuencia, las secuencias HLA del donante real no están incluidas en el panel de prueba, obligando a los médicos de trasplante y cirujanos inferir reactividad específica de donantes basada en similitudes compartidas entre secuencias reales y correspondientes “normas” del donante en el set de prueba de^7,8. En consecuencia, a veces es difícil hacer una estimación confiable del riesgo de rechazo basado en anticuerpos prueba resultados^9,10,11,12. Por lo tanto, personalmente pruebas personalizables para aloanticuerpos son nuevos urgente^13,14.

Los genes HLA codifican los receptores (MHC) complejo mayor de histocompatibilidad que tienen una función clave en la respuesta inmune⁶. Los genes HLA son conocidos por ser los genes más polimórficos de la genoma humano⁶. Debido a los rápidos avances en el ADN sequencing estrategias para los genes HLA, nuevas variantes alélicas (o simplemente denominados alelos) se descubren en un explosivo tipo¹⁵,¹⁶. Marzo de 2017, 16.755 alelos validados se habían depositados en la base de datos IMGT/HLA (http://www.ebi.ac.uk/ipd/index.html), de que 12.351 eran de clase y 4.404 eran de grupos de clase II. En contraste, sólo un poco más de 100 alelos diferentes están representados en el análisis de los granos solo antígeno estándar (SAB), que se utiliza rutinariamente para la detección de aloanticuerpos en trasplante de órganos. El método SAB está construido sobre una plataforma Luminex mediante citometría de flujo. Puesto que el análisis utiliza un conjunto invariable de antígenos, además de menor variabilidad de lote a lote en producción, la prueba de antisuero puede estandarizarse robusta a través de individuos y de los laboratorios⁵. Sin embargo, esta prueba es capaz de capturar todos los aloanticuerpos desarrollados específicamente contra los alelos del donante, especialmente cuando las secuencias de donantes están ausentes desde el SAB. Aunque la producción por encargo de los antígenos de los donantes basado en secuencias del verdadero son deseables, aún existen desafíos técnicos en la racionalización de la producción necesaria y procedimientos de prueba.

Recientemente hemos descrito una metodología alternativa en un estudio de viabilidad de trasplante renal sujetos¹⁷. El método utiliza antígenos del peptide en un formato de matriz para sondeo previo y poste-trasplante sueros de sujetos individuales. Cada arreglo de discos fue construido usando el SPOT síntesis método^{18,19,20,21,22,23} que produce antígenos péptidos, cada 15 aminoácidos de longitud, enteramente basado en alelos HLA del donante de órganos respectivos de A, B, C y DRB1, DQA1, DQB1. SPOT síntesis es operado en una membrana de celulosa utilizando Fmoc-química estándar²² y pueden producir cientos de péptidos personalizados en paralelo con un sistema totalmente automatizado robótico^19,21. La matriz de la membrana puede soportar múltiples rondas de desmontaje y reprobing ciclos. En nuestro estudio retrospectivo de¹⁷, se detectaron cambios en los patrones de antígenos con los antisueros de trasplante almacenado recogidos en una serie de tiempo (es decir, antes y después del trasplante). Adjunto describimos el protocolo técnico para el flujo de trabajo incluyendo el diseño de la matriz, fabricación, análisis de sondeo y resultado de antisuero. El método está pensado para la detección de aloanticuerpos contra epitopos lineales específicos en las moléculas HLA de donantes para trasplante.