I den här studien presenteras metodiken för hur man utför elektrofysiologiska inspelningar i vivo från hyperdirektvägen under uretananestesi.
Konvergerande bevis visar att många neuropsykiatriska sjukdomar bör förstås som störningar i storskaliga neuronala nätverk. För att bättre förstå den patofysiologiska grunden för dessa sjukdomar är det nödvändigt att exakt karakterisera på vilket sätt förhanteringen av information störs mellan kretsens olika neurondelar. Med hjälp av extracellulära in vivo elektrofysiologiska inspelningar är det möjligt att noggrant avgränsa neuronal aktivitet inom ett neuronalt nätverk. Tillämpningen av denna metod har flera fördelar gentemot alternativa tekniker, t.ex. funktionell magnetisk resonansbildning och kalciumavbildning, eftersom det möjliggör en unik tidsmässig och rumslig upplösning och inte litar på genetiskt manipulerade organismer. Användningen av extracellulära in vivo- inspelningar är dock begränsad eftersom det är en invasiv teknik som inte kan tillämpas universellt. I denna artikel presenteras en enkel och enkel att använda metod wMed vilken det är möjligt att samtidigt registrera extracellulära potentialer, såsom lokala fältpotentialer och flerfunktionsaktivitet vid flera nät i ett nätverk. Det är detaljerat hur en exakt inriktning av subkortiska kärnor kan uppnås med hjälp av en kombination av stereotaktisk kirurgi och onlineanalys av multi-unit-inspelningar. Det visas sålunda hur ett komplett nätverk, såsom den hyperdirektiga kortikobasala ganglia-slingan, kan studeras i narkoserade djur in vivo .
Nya kumulativa bevis på olika neuropsykiatriska störningar som Parkinsons sjukdom (PD) och schizofreni föreslår starkt att deras patofysiologi är baserad på en kritisk dysfunktion av utvidgade neuronala kretsar som ofta involverar kortikala och subkortiska strukturer 1 , 2 , 3 . Enligt denna teori uppstår de kliniska manifestationerna av sjukdomarna som en följd av en försämrad informationsbehandlingsförmåga hos ett nätverk av celler i stället för enskilda celler eller specifika neuronelement 1 , 2 , 3 . För att förstärka förståelsen för denna komplexa grupp av neuropsykiatriska sjukdomar och hitta nya behandlingsalternativ är det obligatoriskt att i detalj beskriva neuronal dynamik hos dessa oordnade nätverk i mänskliga patienter och djurmodeller. En utmärktEnt metod för att studera storskaliga nätverk i levande ämnen är multi-site elektrofysiologiska inspelningar av extracellulära potentialer 4 . Med hjälp av denna metod är det möjligt att samtidigt utvärdera lokala fältpotentialer (LFP), som huvudsakligen representerar den tidsmässiga summeringen av excitatoriska och hämmande postsynaptiska strömmar och multi-unit activity (MUA), som genereras av presynaptiska potentialer 5 . Inspelningen av extracellulära potentialer har flera fördelar jämfört med alternativa metoder för att studera nätverk, t.ex. funktionell magnetisk resonansbildning och kalciumavbildning, eftersom det ger en högre tidsmässig och rumslig upplösning och eftersom den inte är beroende av genetiskt manipulerade organismer 5 . Användningen av extracellulära in vivo- inspelningar är dock begränsad eftersom det är en invasiv teknik som inte kan tillämpas universellt.
In vivo elektrofysiologisk recOrdningar kan utföras i vakna såväl som i bedövade djur 6 . Båda metoderna åtföljs av specifika fördelar och nackdelar. Studier i vakna djur möjliggör inspelning av hjärnsignaler under utförandet av definierade beteendeuppgifter, men är benägna för rörelserelaterade och andra artefakter 7 , 8 . Inspelningar i bedövade djur å andra sidan ger möjlighet att bedöma LFP och MUA med ett minimum av artefakter vid mycket definierade kortikala synkroniseringslägen, men resultaten skiljer sig i viss utsträckning från vad som finns i vakna ämnen 9 , 10 , 11 .
Under senare år har det visat sig att provtagningen av LFP är särskilt användbar för att avgränsa patologiska förändringar av nätverksaktivitet. Ett framträdande exempel på detta är forskning om patofysiologin hos PD hos den mänskliga patientenS och djurmodeller av sjukdomen, där det kunde visas att förbättrade beta-oscillationer i den kortikobasala ganglia-slingan är kopplade till parkinsonsmotoriska symptom 12 , 13 . Som en följd av denna forskningslinje undersöks det för närvarande om beta-oscillationer kan användas som en biomarker för online-återkoppling för djup hjärnstimulering 14 , 15 med sluten slinga.
I den föreliggande studien tillhandahålls en detaljerad beskrivning av akuta in vitro-elektrofysiologiska inspelningar av LFP och MUA i råttor som bedövats med uretan. Det demonstreras hur ett komplett nätverk, såsom den hyperdirektiga kortikobasala gangliavägen, kan karakteriseras elektrofysiologiskt med hjälp av standard och anpassade elektroder och hur dessa elektroder kan byggas. Det framhålls särskilt hur en exakt målinriktning av basala ganglierkärnor kan uppnås genom coMbining stereotaktisk operation tillsammans med online registrering av MUAs.
I den aktuella studien demonstreras metoden hur man registrerar extracellulära elektrofysiologiska signaler samtidigt från flera ställen i ett visst nätverk med hjälp av exemplet på hyperdirect cortico-basal ganglia-vägen som förbinder M1 med STN och SNr hos gnagare.
Ett kritiskt steg i inspelningen av små subkortiska strukturer såsom STN är den exakt styrda införandet av inspelningselektroderna in i målet. I den presenterade metoden säkerställs att två viktiga steg säkerst?…
The authors have nothing to disclose.
Vi tackar Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG), KFO 247, för att finansiera vår studie.
Ag/AgCl custom epidural electrodes | Goodfellow GmbH D-61213 Bad Nauheim, Germany info@goodfellow.com |
Product-ID AG005127 for 99.99% silver wire | Ag/AgCl electrodes will allow for better signal quality, but may only be used in acute experiments. Possible replacement: Stainless steel electrodes |
Stereotaxic holder with acrylic block | David Kopf Instruments, 7324 Elmo Street, Tujunga, CA 91042, USA |
Product ID Model 1770 Standard Electrode Holder | Make sure the acrylic block has recesses which suit the electrode setup for the desired target. Acrylic blocks can easily be modified with a file to obtain the desired configuration. Possible replacement: Self-constructed electrode holders |
Tungsten microwire electrodes 1.5 MΩ impedance | Microprobes.com 18247-D Flower Hill Way Gaithersburg, Maryland, 20879 USA |
Product-ID WE3ST31.5A5-250um | The 1.5 MΩ is necessary to record MUA and LFP at the same time. Possible replacement: Microelectrodes of different materials can be used. The electrodes have to be straight, robust and as thin as possible. |
Rat alignment tool | David Kopf Instruments, 7324 Elmo Street, Tujunga, CA 91042, USA |
Product ID Model 944 Rat Alignment Tool | Allows the exact orientation of the brain to match stereotaxic atlases. Possible replacement: Stereotaxic holder with a cannula |
Two-component dental acrylic | Associated Dental Products Ltd. Kemdent Works, Purton, Swindon Wiltshire, SN5 4HT, United Kingdom |
Simplex Rapid Powder Clear 225g, Product code: ACR803; Simplex Rapid Liquid 150ml, Product code: ACR920 | Depending in the electrodes used, superglue might be an easy alternative, if the electrodes are small and lightweight. Possible replacement: Superglue (Cyanacrylate-based) |
Faraday cage | Self-construction | A proper Faraday cage will be the best protection from electromagnetic artifacts, but everything which can be formed into a box shape or applied to a frame and is made of conductive material may help. Possible replacement: Aluminum foil or copper mesh | |
Electrophysiological setup with recording software and online spike-sorting capabilities | OmniPlex® Neural Data Acquisition System Plexon Inc 6500 Greenville Avenue, Suite 700 Dallas, Texas 75206 USA |
Offline sorting software is a potential alternative, multiple scripts and softwares can be found for free in the open source community. |