I denne studien presenteres metodikken for hvordan man utfører elektrofysiologiske innspillingssystemer i multi-site fra hyperdirektveien under uretanbedøvelse.
Konvergerende bevis viser at mange nevropsykiatriske sykdommer skal forstås som forstyrrelser i storskala nevrale nettverk. For bedre å forstå det patofysiologiske grunnlaget for disse sykdommene, er det nødvendig å nøyaktig karakterisere på hvilken måte foredlingen av informasjon er forstyrret mellom de forskjellige nevroniske deler av kretsen. Ved bruk av ekstracellulære in vivo elektrofysiologiske opptak, er det mulig å nøyaktig avgrense nevronaktivitet i et nevronalt nettverk. Anvendelsen av denne metoden har flere fordeler i forhold til alternative teknikker, for eksempel funksjonell magnetisk resonansbilder og kalsiumbilder, da det tillater en unik tidsmessig og romlig oppløsning og ikke stole på genmodifiserte organismer. Imidlertid er bruken av ekstracellulære in vivo- opptak begrenset, da det er en invasiv teknikk som ikke kan brukes universelt. I denne artikkelen presenteres en enkel og lett å bruke metode wDer det er mulig å samtidig registrere ekstracellulære potensialer som lokale feltpotensialer og multiunitaktivitet på flere steder i et nettverk. Det er detaljert hvordan en nøyaktig målretting av subkortiske kjerne kan oppnås ved hjelp av en kombinasjon av stereotaktisk kirurgi og online analyse av multi-unit-opptak. Det er således demonstrert hvordan et komplett nettverk, som den hyperdirektiske cortico-basale ganglia-sløyfen, kan studeres i bedøvede dyr in vivo .
Nylige kumulative bevis på ulike neuropsykiatriske forstyrrelser som Parkinsons sykdom (PD) og skizofreni tyder sterkt på at deres patofysiologi er basert på en kritisk dysfunksjon av utvidede nevronkretser som ofte involverer kortikale og subkortiske strukturer 1 , 2 , 3 . I følge denne teorien oppstår de kliniske manifestasjonene av sykdommene som en konsekvens av en svekket informasjonskapasitet for et nettverk av celler i stedet for enkeltceller eller spesifikke nevronelementer 1 , 2 , 3 . For å forbedre forståelsen av denne komplekse gruppen av nevropsykiatriske sykdommer og for å finne nye behandlingsalternativer, er det obligatorisk å karakterisere nevroniske dynamikken til de uordente nettverkene hos mennesker og i dyremodeller i detalj. Et utmerketEnt metode for å studere store nettverk i levende fag er multi-site elektrofysiologiske opptak av ekstracellulære potensialer 4 . Ved hjelp av denne metoden er det mulig å samtidig vurdere lokale feltpotensialer (LFPs), som primært representerer den tidsmessige summeringen av excitatoriske og inhibitoriske postsynaptiske strømmer og multi-unit aktivitet (MUA), som genereres av presynaptiske potensialer 5 . Opptaket av ekstracellulære potensialer har flere fordeler i forhold til alternative metoder for å studere nettverk, for eksempel funksjonell magnetisk resonansavbildning og kalsiumbilding, fordi det gir en høyere temporal og romlig oppløsning og fordi den ikke er avhengig av genetisk konstruerte organismer 5 . Imidlertid er bruken av ekstracellulære in vivo- opptak begrenset, da det er en invasiv teknikk som ikke kan brukes universelt.
In vivo elektrofysiologisk rekOrdninger kan utføres i våken så vel som i bedøvede dyr 6 . Begge metodene er ledsaget av bestemte fordeler og ulemper. Studier i våte dyr tillater opptak av hjernesignaler under utførelsen av definerte atferdsoppgaver, men er utsatt for bevegelsesrelaterte og andre gjenstander 7 , 8 . Opptak i bedøvede dyr gir derimot muligheten til å vurdere LFP og MUA med et minimum av artefakter ved høydefinerte kortikale synkroniseringsstilstander, men resultatene avviger også til en viss grad til det som finnes i våken fag 9 , 10 , 11 .
I de senere år har det vist seg at prøvetaking av LFP er spesielt nyttig for å avgrense patologiske endringer av nettverksaktivitet. Et fremtredende eksempel på dette er forskning på patofysiologi av PD i menneskelig pasientS og dyremodeller av sykdommen, hvor det kunne bli vist at forbedrede beta-oscillasjoner i cortico-basal ganglia-sløyfen er knyttet til parkinsoniske motoriske symptomer 12 , 13 . Som en følge av denne forskningen, er det for tiden undersøkt om beta-svingninger kan brukes som en online tilbakemelding biomarkør for lukket hjuls dyp hjerne stimulering 14 , 15 .
I den foreliggende studien er det gitt en detaljert beskrivelse av akutte multi-site in vivo elektrofysiologiske opptak av LFP og MUA hos rotter bedøvet med uretan. Det er demonstrert hvordan et komplett nettverk, som den hyperdirektiske cortico-basale ganglia-banen, kan karakteriseres elektrofysiologisk ved hjelp av standard og tilpassede elektroder og hvordan disse elektrodene kan bygges. Det legges særlig vekt på hvordan en presis målretting av basale ganglia kjerner kan oppnås ved coMbining stereotaktisk kirurgi sammen med online registrering av MUAs.
I den foreliggende studien er metoden demonstrert hvordan man registrerer ekstracellulære elektrofysiologiske signaler samtidig fra flere steder i et gitt nettverk ved hjelp av eksemplet på hyperdirect cortico-basal ganglia-banen som forbinder M1 med STN og SNr i gnagere.
Et kritisk trinn i opptak av små subkortiske strukturer som STN er den nøyaktig styrte innsetting av opptakselektroder inn i målet. I den presenterte metoden sørger det for å ta vare på to viktige skritt en høy nø…
The authors have nothing to disclose.
Vi takker Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG), KFO 247, for å finansiere vår studie.
Ag/AgCl custom epidural electrodes | Goodfellow GmbH D-61213 Bad Nauheim, Germany info@goodfellow.com |
Product-ID AG005127 for 99.99% silver wire | Ag/AgCl electrodes will allow for better signal quality, but may only be used in acute experiments. Possible replacement: Stainless steel electrodes |
Stereotaxic holder with acrylic block | David Kopf Instruments, 7324 Elmo Street, Tujunga, CA 91042, USA |
Product ID Model 1770 Standard Electrode Holder | Make sure the acrylic block has recesses which suit the electrode setup for the desired target. Acrylic blocks can easily be modified with a file to obtain the desired configuration. Possible replacement: Self-constructed electrode holders |
Tungsten microwire electrodes 1.5 MΩ impedance | Microprobes.com 18247-D Flower Hill Way Gaithersburg, Maryland, 20879 USA |
Product-ID WE3ST31.5A5-250um | The 1.5 MΩ is necessary to record MUA and LFP at the same time. Possible replacement: Microelectrodes of different materials can be used. The electrodes have to be straight, robust and as thin as possible. |
Rat alignment tool | David Kopf Instruments, 7324 Elmo Street, Tujunga, CA 91042, USA |
Product ID Model 944 Rat Alignment Tool | Allows the exact orientation of the brain to match stereotaxic atlases. Possible replacement: Stereotaxic holder with a cannula |
Two-component dental acrylic | Associated Dental Products Ltd. Kemdent Works, Purton, Swindon Wiltshire, SN5 4HT, United Kingdom |
Simplex Rapid Powder Clear 225g, Product code: ACR803; Simplex Rapid Liquid 150ml, Product code: ACR920 | Depending in the electrodes used, superglue might be an easy alternative, if the electrodes are small and lightweight. Possible replacement: Superglue (Cyanacrylate-based) |
Faraday cage | Self-construction | A proper Faraday cage will be the best protection from electromagnetic artifacts, but everything which can be formed into a box shape or applied to a frame and is made of conductive material may help. Possible replacement: Aluminum foil or copper mesh | |
Electrophysiological setup with recording software and online spike-sorting capabilities | OmniPlex® Neural Data Acquisition System Plexon Inc 6500 Greenville Avenue, Suite 700 Dallas, Texas 75206 USA |
Offline sorting software is a potential alternative, multiple scripts and softwares can be found for free in the open source community. |