I denne undersøgelse er metoden præsenteret for, hvordan man udfører elektrofeksiologiske optagelser med injektion på flere steder fra den hyperdirekte vej under urethananæstesi.
Konvergerende beviser viser, at mange neuropsykiatriske sygdomme skal forstås som lidelser i storskala neuronale netværk. For bedre at forstå det patofysiologiske grundlag for disse sygdomme er det nødvendigt at præcis karakterisere på hvilken måde forarbejdning af information forstyrres mellem de forskellige neuronale dele af kredsløbet. Ved hjælp af ekstracellulære in vivo elektrofysiologiske optagelser er det muligt at præcis afgrænse neuronal aktivitet inden for et neuronalt netværk. Anvendelsen af denne metode har flere fordele i forhold til alternative teknikker, fx funktionel magnetisk resonansbilleddannelse og calciumbilleddannelse, da det tillader en unik tidsmæssig og rumlig opløsning og ikke er afhængig af genetisk manipulerede organismer. Imidlertid er brugen af ekstracellulære in vivo optagelser begrænset, da det er en invasiv teknik, der ikke kan anvendes universelt. I denne artikel er en enkel og nem at bruge metode præsenteret wHvor det er muligt at optage ekstracellulære potentialer samtidigt som lokale feltpotentialer og multiunit-aktivitet på flere steder i et netværk. Det er detaljeret, hvordan en præcis målretning af subkortiske kerner kan opnås ved hjælp af en kombination af stereotaktisk kirurgi og online analyse af multi-enhed optagelser. Det er således påvist, hvordan et komplet netværk, såsom den hyperdirektive cortico-basale ganglia-løkke, kan undersøges i bedøvede dyr in vivo .
Nylige kumulative beviser for forskellige neuropsykiatriske lidelser som Parkinsons sygdom (PD) og skizofreni tyder stærkt på, at deres patofysiologi er baseret på en kritisk dysfunktion af forlængede neuronalkredsløb, der ofte involverer kortikale og subkortiske strukturer 1 , 2 , 3 . Ifølge denne teori opstår de kliniske manifestationer af sygdommene som følge af en forringet informationsbehandlingsevne af et netværk af celler i stedet for enkelte celler eller specifikke neuronale elementer 1 , 2 , 3 . For at øge forståelsen af denne komplekse gruppe af neuropsykiatriske sygdomme og finde nye behandlingsmuligheder er det obligatorisk at karakterisere neuronal dynamikken hos disse uordnede netværk i menneskelige patienter og i dyremodeller i detaljer. En fremragendeEnt metode til at studere store netværk i levende fag er multi-site elektrofysiologiske optagelser af ekstracellulære potentialer 4 . Ved hjælp af denne metode er det muligt samtidig at vurdere lokale feltpotentialer (LFP'er), der primært repræsenterer den tidsmæssige summation af excitatoriske og hæmmende postsynaptiske strømme og multi-unit aktivitet (MUA), der genereres af presynaptiske potentialer 5 . Optagelsen af ekstracellulære potentialer har flere fordele i forhold til alternative metoder til at studere netværk, fx funktionel magnetisk resonansbilleddannelse og calciumbilleddannelse, fordi den giver en højere tidsmæssig og rumlig opløsning, og fordi den ikke er afhængig af genetisk manipulerede organismer 5 . Imidlertid er brugen af ekstracellulære in vivo optagelser begrænset, da det er en invasiv teknik, der ikke kan anvendes universelt.
In vivo elektrofysiologisk recOrdninger kan udføres i vågen såvel som i bedøvede dyr 6 . Begge metoder ledsages af specifikke fordele og ulemper. Undersøgelser i vågen dyr tillader optagelse af hjerne signaler under udførelsen af definerede adfærdsmæssige opgaver, men er tilbøjelige til bevægelsesrelaterede og andre artefakter 7 , 8 . Optagelser i bedøvede dyr på den anden side giver mulighed for at vurdere LFP'er og MUA med et minimum af artefakter ved højt definerede kortikale synkroniseringsstilstande, men resultaterne adskiller sig i nogen grad fra det, der findes i vågen emner 9 , 10 , 11 .
I de senere år er det blevet påvist, at prøveudtagningen af LFP'er er særlig nyttig til at afgrænse patologiske ændringer af netværksaktivitet. Et fremtrædende eksempel på dette er forskning om patofysiologi af PD hos menneskerS og dyremodeller af sygdommen, hvor det kunne påvises, at forøget beta-oscillationer i den cortico-basale ganglia-sløjfe er forbundet med parkinsoniske motoriske symptomer 12 , 13 . Som en konsekvens af denne forskningslinie undersøges det for øjeblikket, om beta-oscillationer kan bruges som en online feedback biomarkør til lukket-hjuls dyb hjerne stimulering 14 , 15 .
I den foreliggende undersøgelse tilvejebringes der en detaljeret beskrivelse af akutte in-vivo elektrofysiologiske optagelser af LFP'er og MUA i rotter, der er bedøvet med urethan. Det påvises, hvordan et komplet netværk, såsom den hyperdirektive cortico-basale ganglia-bane, kan karakteriseres elektrofysiologisk ved hjælp af standard og tilpassede elektroder og hvordan disse elektroder kan bygges. Det understreges især, hvordan en præcis målretning af basale ganglia-kerner kan opnås ved coMbining stereotaktisk kirurgi sammen med online registrering af MUA'er.
I den foreliggende undersøgelse er metoden demonstreret, hvordan man optager ekstracellulære elektrofysiologiske signaler samtidigt fra flere steder i et givet netværk ved hjælp af eksemplet på den hyperdirecte cortico-basale ganglia-vej, der forbinder M1 med STN og SNr i gnavere.
Et kritisk trin i optagelsen af små subkortiske strukturer, såsom STN, er den præcist styrede indsættelse af optageelektroderne i målet. I den præsenterede metode sikrer man at to vigtige trin sikr…
The authors have nothing to disclose.
Vi takker Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG), KFO 247, til finansiering af vores studie.
Ag/AgCl custom epidural electrodes | Goodfellow GmbH D-61213 Bad Nauheim, Germany info@goodfellow.com |
Product-ID AG005127 for 99.99% silver wire | Ag/AgCl electrodes will allow for better signal quality, but may only be used in acute experiments. Possible replacement: Stainless steel electrodes |
Stereotaxic holder with acrylic block | David Kopf Instruments, 7324 Elmo Street, Tujunga, CA 91042, USA |
Product ID Model 1770 Standard Electrode Holder | Make sure the acrylic block has recesses which suit the electrode setup for the desired target. Acrylic blocks can easily be modified with a file to obtain the desired configuration. Possible replacement: Self-constructed electrode holders |
Tungsten microwire electrodes 1.5 MΩ impedance | Microprobes.com 18247-D Flower Hill Way Gaithersburg, Maryland, 20879 USA |
Product-ID WE3ST31.5A5-250um | The 1.5 MΩ is necessary to record MUA and LFP at the same time. Possible replacement: Microelectrodes of different materials can be used. The electrodes have to be straight, robust and as thin as possible. |
Rat alignment tool | David Kopf Instruments, 7324 Elmo Street, Tujunga, CA 91042, USA |
Product ID Model 944 Rat Alignment Tool | Allows the exact orientation of the brain to match stereotaxic atlases. Possible replacement: Stereotaxic holder with a cannula |
Two-component dental acrylic | Associated Dental Products Ltd. Kemdent Works, Purton, Swindon Wiltshire, SN5 4HT, United Kingdom |
Simplex Rapid Powder Clear 225g, Product code: ACR803; Simplex Rapid Liquid 150ml, Product code: ACR920 | Depending in the electrodes used, superglue might be an easy alternative, if the electrodes are small and lightweight. Possible replacement: Superglue (Cyanacrylate-based) |
Faraday cage | Self-construction | A proper Faraday cage will be the best protection from electromagnetic artifacts, but everything which can be formed into a box shape or applied to a frame and is made of conductive material may help. Possible replacement: Aluminum foil or copper mesh | |
Electrophysiological setup with recording software and online spike-sorting capabilities | OmniPlex® Neural Data Acquisition System Plexon Inc 6500 Greenville Avenue, Suite 700 Dallas, Texas 75206 USA |
Offline sorting software is a potential alternative, multiple scripts and softwares can be found for free in the open source community. |