Summary

Spids<em> In vivo</em> Elektrofysiologiske optagelser af lokale feltpotentialer og multi-enhed aktivitet fra Hyperdirect-banen i bedøvede rotter

Published: June 22, 2017
doi:

Summary

I denne undersøgelse er metoden præsenteret for, hvordan man udfører elektrofeksiologiske optagelser med injektion på flere steder fra den hyperdirekte vej under urethananæstesi.

Abstract

Konvergerende beviser viser, at mange neuropsykiatriske sygdomme skal forstås som lidelser i storskala neuronale netværk. For bedre at forstå det patofysiologiske grundlag for disse sygdomme er det nødvendigt at præcis karakterisere på hvilken måde forarbejdning af information forstyrres mellem de forskellige neuronale dele af kredsløbet. Ved hjælp af ekstracellulære in vivo elektrofysiologiske optagelser er det muligt at præcis afgrænse neuronal aktivitet inden for et neuronalt netværk. Anvendelsen af ​​denne metode har flere fordele i forhold til alternative teknikker, fx funktionel magnetisk resonansbilleddannelse og calciumbilleddannelse, da det tillader en unik tidsmæssig og rumlig opløsning og ikke er afhængig af genetisk manipulerede organismer. Imidlertid er brugen af ​​ekstracellulære in vivo optagelser begrænset, da det er en invasiv teknik, der ikke kan anvendes universelt. I denne artikel er en enkel og nem at bruge metode præsenteret wHvor det er muligt at optage ekstracellulære potentialer samtidigt som lokale feltpotentialer og multiunit-aktivitet på flere steder i et netværk. Det er detaljeret, hvordan en præcis målretning af subkortiske kerner kan opnås ved hjælp af en kombination af stereotaktisk kirurgi og online analyse af multi-enhed optagelser. Det er således påvist, hvordan et komplet netværk, såsom den hyperdirektive cortico-basale ganglia-løkke, kan undersøges i bedøvede dyr in vivo .

Introduction

Nylige kumulative beviser for forskellige neuropsykiatriske lidelser som Parkinsons sygdom (PD) og skizofreni tyder stærkt på, at deres patofysiologi er baseret på en kritisk dysfunktion af forlængede neuronalkredsløb, der ofte involverer kortikale og subkortiske strukturer 1 , 2 , 3 . Ifølge denne teori opstår de kliniske manifestationer af sygdommene som følge af en forringet informationsbehandlingsevne af et netværk af celler i stedet for enkelte celler eller specifikke neuronale elementer 1 , 2 , 3 . For at øge forståelsen af ​​denne komplekse gruppe af neuropsykiatriske sygdomme og finde nye behandlingsmuligheder er det obligatorisk at karakterisere neuronal dynamikken hos disse uordnede netværk i menneskelige patienter og i dyremodeller i detaljer. En fremragendeEnt metode til at studere store netværk i levende fag er multi-site elektrofysiologiske optagelser af ekstracellulære potentialer 4 . Ved hjælp af denne metode er det muligt samtidig at vurdere lokale feltpotentialer (LFP'er), der primært repræsenterer den tidsmæssige summation af excitatoriske og hæmmende postsynaptiske strømme og multi-unit aktivitet (MUA), der genereres af presynaptiske potentialer 5 . Optagelsen af ​​ekstracellulære potentialer har flere fordele i forhold til alternative metoder til at studere netværk, fx funktionel magnetisk resonansbilleddannelse og calciumbilleddannelse, fordi den giver en højere tidsmæssig og rumlig opløsning, og fordi den ikke er afhængig af genetisk manipulerede organismer 5 . Imidlertid er brugen af ​​ekstracellulære in vivo optagelser begrænset, da det er en invasiv teknik, der ikke kan anvendes universelt.

In vivo elektrofysiologisk recOrdninger kan udføres i vågen såvel som i bedøvede dyr 6 . Begge metoder ledsages af specifikke fordele og ulemper. Undersøgelser i vågen dyr tillader optagelse af hjerne signaler under udførelsen af ​​definerede adfærdsmæssige opgaver, men er tilbøjelige til bevægelsesrelaterede og andre artefakter 7 , 8 . Optagelser i bedøvede dyr på den anden side giver mulighed for at vurdere LFP'er og MUA med et minimum af artefakter ved højt definerede kortikale synkroniseringsstilstande, men resultaterne adskiller sig i nogen grad fra det, der findes i vågen emner 9 , 10 , 11 .

I de senere år er det blevet påvist, at prøveudtagningen af ​​LFP'er er særlig nyttig til at afgrænse patologiske ændringer af netværksaktivitet. Et fremtrædende eksempel på dette er forskning om patofysiologi af PD hos menneskerS og dyremodeller af sygdommen, hvor det kunne påvises, at forøget beta-oscillationer i den cortico-basale ganglia-sløjfe er forbundet med parkinsoniske motoriske symptomer 12 , 13 . Som en konsekvens af denne forskningslinie undersøges det for øjeblikket, om beta-oscillationer kan bruges som en online feedback biomarkør til lukket-hjuls dyb hjerne stimulering 14 , 15 .

I den foreliggende undersøgelse tilvejebringes der en detaljeret beskrivelse af akutte in-vivo elektrofysiologiske optagelser af LFP'er og MUA i rotter, der er bedøvet med urethan. Det påvises, hvordan et komplet netværk, såsom den hyperdirektive cortico-basale ganglia-bane, kan karakteriseres elektrofysiologisk ved hjælp af standard og tilpassede elektroder og hvordan disse elektroder kan bygges. Det understreges især, hvordan en præcis målretning af basale ganglia-kerner kan opnås ved coMbining stereotaktisk kirurgi sammen med online registrering af MUA'er.

Protocol

Eksperimentelle procedurer blev udført i overensstemmelse med den tyske dyrevelfærdslov (senest revideret i 2014) og europæiske bestemmelser (2010/63 / EU). Eksperimenter blev godkendt af den lokale dyrevelfærdsmyndighed (LaGeSo, Berlin) og overholdt lokale afdelinger og internationale retningslinjer. BEMÆRK: I den præsenterede metode bruges to elektrodemodeller til at optage fra den hyperdirektiske cortico-basale ganglia-vej, der forbinder primærmotorcortexen (M1) med subthalaminkern…

Representative Results

Med de heri anvendte optageelektroder er det muligt at prøve LFP'er fra primærmotorisk cortex, subthalamukernen og substantia nigra pars reticulata og MUA fra STN og SNr. Indledningsvis optages LFP'er og multi-enhed-aktivitet sammen i et bredbåndssignal. Derefter adskilles LFP'er og MUA'er med båndpasfiltre (0,05-250 Hz for LFP'er og 300-4000 Hz for MUA). For den korrekte målretning af subkortiske kern…

Discussion

I den foreliggende undersøgelse er metoden demonstreret, hvordan man optager ekstracellulære elektrofysiologiske signaler samtidigt fra flere steder i et givet netværk ved hjælp af eksemplet på den hyperdirecte cortico-basale ganglia-vej, der forbinder M1 med STN og SNr i gnavere.

Et kritisk trin i optagelsen af ​​små subkortiske strukturer, såsom STN, er den præcist styrede indsættelse af optageelektroderne i målet. I den præsenterede metode sikrer man at to vigtige trin sikr…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Vi takker Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG), KFO 247, til finansiering af vores studie.

Materials

Ag/AgCl custom epidural electrodes Goodfellow GmbH
D-61213 Bad Nauheim, Germany
info@goodfellow.com
Product-ID AG005127 for 99.99% silver wire Ag/AgCl electrodes will allow for better signal quality, but may only be used in acute experiments. Possible replacement: Stainless steel electrodes
Stereotaxic holder with acrylic block David Kopf Instruments,
7324 Elmo Street, Tujunga, CA 91042, USA
Product ID Model 1770 Standard Electrode Holder Make sure the acrylic block has recesses which suit the electrode setup for the desired target. Acrylic blocks can easily be modified with a file to obtain the desired configuration. Possible replacement: Self-constructed electrode holders
Tungsten microwire electrodes 1.5 MΩ impedance Microprobes.com
18247-D Flower Hill Way  Gaithersburg, Maryland, 20879 USA
Product-ID WE3ST31.5A5-250um The 1.5 MΩ is necessary to record MUA and LFP at the same time. Possible replacement: Microelectrodes of different materials can be used. The electrodes have to be straight, robust and as thin as possible.
Rat alignment tool David Kopf Instruments,
7324 Elmo Street, Tujunga, CA 91042, USA
Product ID Model 944 Rat Alignment Tool Allows the exact orientation of the brain to match stereotaxic atlases. Possible replacement: Stereotaxic holder with a cannula
Two-component dental acrylic Associated Dental Products Ltd.
Kemdent Works, Purton, Swindon
Wiltshire, SN5 4HT, United Kingdom
Simplex Rapid Powder Clear 225g, Product code: ACR803; Simplex Rapid Liquid 150ml, Product code: ACR920 Depending in the electrodes used, superglue might be an easy alternative, if the electrodes are small and lightweight. Possible replacement: Superglue (Cyanacrylate-based)
Faraday cage Self-construction A proper Faraday cage will be the best protection from electromagnetic artifacts, but everything which can be formed into a box shape or applied to a frame and is made of conductive material may help. Possible replacement: Aluminum foil or copper mesh
Electrophysiological setup with recording software and online spike-sorting capabilities OmniPlex® Neural Data Acquisition System
Plexon Inc
6500 Greenville Avenue, Suite 700
Dallas, Texas 75206
USA
Offline sorting software is a potential alternative, multiple scripts and softwares can be found for free in the open source community.

Referências

  1. Lozano, A. M., Lipsman, N. Probing and regulating dysfunctional circuits using deep brain stimulation. Neuron. 77 (3), 406-424 (2013).
  2. Mathalon, D. H., Sohal, V. S. Neural Oscillations and Synchrony in Brain Dysfunction and Neuropsychiatric Disorders: It’s About Time. JAMA Psychiatry. 72 (8), 840-844 (2015).
  3. Uhlhaas, P. J., Singer, W. Neuronal dynamics and neuropsychiatric disorders: toward a translational paradigm for dysfunctional large-scale networks. Neuron. 75 (6), 963-980 (2012).
  4. Buzsaki, G. Large-scale recording of neuronal ensembles. Nat Neurosci. 7 (5), 446-451 (2004).
  5. Buzsaki, G., Anastassiou, C. A., Koch, C. The origin of extracellular fields and currents–EEG, ECoG, LFP and spikes. Nat Rev Neurosci. 13 (6), 407-420 (2012).
  6. Brazhnik, E., Novikov, N., McCoy, A. J., Cruz, A. V., Walters, J. R. Functional correlates of exaggerated oscillatory activity in basal ganglia output in hemiparkinsonian rats. Exp Neurol. 261, 563-577 (2014).
  7. Avila, I., et al. Beta frequency synchronization in basal ganglia output during rest and walk in a hemiparkinsonian rat. Exp Neurol. 221 (2), 307-319 (2010).
  8. Javor-Duray, B. N., et al. Early-onset cortico-cortical synchronization in the hemiparkinsonian rat model. J Neurophysiol. 113 (3), 925-936 (2015).
  9. Beck, M. H., et al. Short- and long-term dopamine depletion causes enhanced beta oscillations in the cortico-basal ganglia loop of parkinsonian rats. Exp Neurol. 286, 124-136 (2016).
  10. Magill, P. J., Bolam, J. P., Bevan, M. D. Relationship of activity in the subthalamic nucleus-globus pallidus network to cortical electroencephalogram. J Neurosci. 20 (2), 820-833 (2000).
  11. Magill, P. J., et al. Changes in functional connectivity within the rat striatopallidal axis during global brain activation in vivo. J Neurosci. 26 (23), 6318-6329 (2006).
  12. Brown, P. Abnormal oscillatory synchronisation in the motor system leads to impaired movement. Curr Opin Neurobiol. 17 (6), 656-664 (2007).
  13. Stein, E., Bar-Gad, I. beta oscillations in the cortico-basal ganglia loop during parkinsonism. Exp Neurol. 245, 52-59 (2013).
  14. Little, S., Brown, P. What brain signals are suitable for feedback control of deep brain stimulation in Parkinson’s disease?. Ann N Y Acad Sci. 1265, 9-24 (2012).
  15. Priori, A., Foffani, G., Rossi, L., Marceglia, S. Adaptive deep brain stimulation (aDBS) controlled by local field potential oscillations. Exp Neurol. , 77-86 (2013).
  16. Brozoski, T. J., Caspary, D. M., Bauer, C. A. Marking multi-channel silicon-substrate electrode recording sites using radiofrequency lesions. J Neurosci Methods. 150 (2), 185-191 (2006).
  17. Schjetnan, A. G., Luczak, A. Recording large-scale neuronal ensembles with silicon probes in the anesthetized rat. J Vis Exp. (56), (2011).
  18. Mallet, N., et al. Disrupted dopamine transmission and the emergence of exaggerated beta oscillations in subthalamic nucleus and cerebral cortex. J Neurosci. 28 (18), 4795-4806 (2008).
  19. Steriade, M. Corticothalamic resonance, states of vigilance and mentation. Neurociência. 101 (2), 243-276 (2000).
  20. Maesawa, S., et al. Long-term stimulation of the subthalamic nucleus in hemiparkinsonian rats: neuroprotection of dopaminergic neurons. J Neurosurg. 100 (4), 679-687 (2004).
  21. Paxinos, G., Watson, C. . The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1998).
  22. Oliveira, L. M. O., Dimitrov, D., Nicolelis, M. A. L. . Methods for Neural Ensemble Recordings Frontiers in Neuroscience. , (2008).
  23. Torres, E. M., et al. Increased efficacy of the 6-hydroxydopamine lesion of the median forebrain bundle in small rats, by modification of the stereotaxic coordinates. J Neurosci Methods. 200 (1), 29-35 (2011).
  24. Hadar, R., et al. Rats overexpressing the dopamine transporter display behavioral and neurobiological abnormalities with relevance to repetitive disorders. Sci Rep. 6, 39145 (2016).
  25. Parr-Brownlie, L. C., Poloskey, S. L., Bergstrom, D. A., Walters, J. R. Parafascicular thalamic nucleus activity in a rat model of Parkinson’s disease. Exp Neurol. 217 (2), 269-281 (2009).
  26. Steriade, M., Nunez, A., Amzica, F. A novel slow (< 1 Hz) oscillation of neocortical neurons in vivo: depolarizing and hyperpolarizing components. J Neurosci. 13 (8), 3252-3265 (1993).
  27. Maggi, C. A., Meli, A. Suitability of urethane anesthesia for physiopharmacological investigations in various systems. Part 1: General considerations. Experientia. 42 (2), 109-114 (1986).
  28. Goldberg, J. A., Kats, S. S., Jaeger, D. Globus pallidus discharge is coincident with striatal activity during global slow wave activity in the rat. J Neurosci. 23 (31), 10058-10063 (2003).
  29. Karain, B., Xu, D., Bellone, J. A., Hartman, R. E., Shi, W. X. Rat globus pallidus neurons: functional classification and effects of dopamine depletion. Synapse. 69 (1), 41-51 (2015).
  30. Paasonen, J., et al. Comparison of seven different anesthesia protocols for nicotine pharmacologic magnetic resonance imaging in rat. Eur Neuropsychopharmacol. 26 (3), 518-531 (2016).
  31. Mahmud, M., Vassanelli, S. Processing and Analysis of Multichannel Extracellular Neuronal Signals: State-of-the-Art and Challenges. Front Neurosci. 10, 248 (2016).
  32. Hadar, R., et al. Altered neural oscillations and elevated dopamine levels in the reward pathway during alcohol relapse. Behav Brain Res. 316, 131-135 (2017).
  33. Voget, M., et al. Altered local field potential activity and serotonergic neurotransmission are further characteristics of the Flinders sensitive line rat model of depression. Behav Brain Res. 291, 299-305 (2015).
check_url/pt/55940?article_type=t

Play Video

Citar este artigo
Haumesser, J. K., Kühn, J., Güttler, C., Nguyen, D., Beck, M. H., Kühn, A. A., van Riesen, C. Acute In Vivo Electrophysiological Recordings of Local Field Potentials and Multi-unit Activity from the Hyperdirect Pathway in Anesthetized Rats. J. Vis. Exp. (124), e55940, doi:10.3791/55940 (2017).

View Video