신피질은인지 기능, 감정적 기능, 감각 기능의 주요 부위입니다. 그것은 뇌의 표면에 평행 한 6 개의 수평 층으로 구성되어 있습니다. 개발 도중에 망원 뇌파의 외벽에있는 전구 세포는 돌기 표면을 향해 반경 방향으로 이동하여 층 유형별 신경 신원을 얻는 투사 뉴런을 발생시킵니다. 심실 / 뇌실 영역 (VZ / SVZ)에서 생성 된 후 이러한 뉴런은 일시적으로 다 극성이되어 이동을 느리게합니다. 중간 구역 (IZ)에서 잠시 머무른 후에 그들은 양극 형태로 전환하고, 방사상 glial 비계에 부착하고, 대뇌 피질 판 (CP)으로 반경 방향으로 이동을 계속합니다. 최종 목표 투영 뉴런에 도달하자 뉴런은 방사상 glial 프로세스에서 분리하고 레이어 고유의 신원을 획득합니다. 신경 이식의 여러 단계에 영향을 미치는 유전자의 돌연변이는 가려움증과 같은 심한 피질 기형을 유발할 수 있습니다에필 리 또는 백색질에 테로 토피아 ^{1 , 2} .

utero에서 electroporation은 설치류 배아 ^{3 , 4} 의 개발 두뇌에서 신경 progenitor 세포를 transfect하는 빠르고 강력한 기술입니다. 이 기술을 사용하면 개발중인 뉴런에서 기능을 연구하기 위해 관심 유전자를 녹아웃 및 / 또는 과발현 할 수 있습니다. 이 방법은 형태 학적 세부 사항을 설명하고 방사상 이동 과정의 분자 메커니즘을 특성화하는 데 특히 도움이됩니다. ^{5 , 6 , 7 , 8 , 9} . 방사형으로 이동하는 뉴런은 시간이 지남에 따라 직접적이고 연속적인 관찰이 요구되는 이동성 방향뿐만 아니라 세포 형태, 이동 속도의 동적 변화를 겪습니다. Organotypic 슬라이스 cultuelectroporated 두뇌의 다시 및 저속 공 촛점 이미징은 시간이 지남에 마이 그 레이션 뉴런을 직접 관찰 할 수 있습니다. 이 결합 된 접근 방식을 사용하여 electroporated 두뇌의 고정 조직 섹션에서 조사 할 수없는 마이 그 레이션 뉴런의 독특한 기능을 분석하는 것이 가능합니다.

우리는 최근 electroporated 뇌의 슬라이스 배양에서 마이 그 레이션 뉴런의 저속 공 촛점 이미징을 적용하여 피질 발달 ¹⁰ 동안 전사 인자 B 세포 CLL / 림프종 11a (Bcl11a)의 역할을 연구했습니다. Bcl11a는 젊은 이동 피질 뉴런에서 표현되며 우리는 조건 변이 Bcl11a 대립 유전자 ( Bcl11a ^flox ) ¹¹ 을 사용하여 그 기능을 연구했습니다. Cre recombinase와 녹색 형광 단백질 (GFP)을 Bcl11a ^{flox / flox} 뇌의 피질 전구 세포에 일렉트로 ^포 레이션 ( ^{electroporation)} 하면 모자이크 돌연변이 현상이 ^생겼다 .그렇지 않으면 야생형 배경. 이 방법으로 Bcl11a의 세포 자율 기능을 단일 세포 수준에서 연구하는 것이 가능했습니다. 우리는 Bcl11a 돌연변이 뉴런이 마이 그 레이션 중에 속도 감소, 속도 프로파일의 변화, 무작위 적 방향 변화를 보이는 것을 발견했습니다 ¹⁰ . 약술 된 프로토콜에서 우리는 마우스 뇌의 성공적인 electroporation과 슬라이스 문화 준비 ¹² 워크 플로우뿐만 아니라 피질 슬라이스 문화의 시간 경과 공 촛점 이미징을 설명합니다.