La comprensión de la patología de la médula espinal requiere el uso de varios modelos, tanto en los niveles macroscópico y microscópico. Los modelos animales grandes y pequeños ^{1 , 2 , 3} se usan para investigaciones in vivo de la enfermedad y lesión de la médula espinal. Mientras que el estudio de estos temas in vivo tiene sus méritos, el análisis de la médula espinal se limita a toda la médula espinal homogenado o tejido secciones [ ^4] . Esto crea cierta ambigüedad al tratar de aislar respuestas específicas y objetivos en la médula espinal entre sus neuronas residentes y la glía circundante. La creciente disponibilidad de ratones manipulados genéticamente permite realizar investigaciones más detalladas de la biología a nivel celular y molecular. Por lo tanto, un modelo de ratón neonatal se utiliza aquí, lo que permite el estudio de las propiedades únicas y la biología de las neuronas de la médula espinal in vitro .

El aislamiento y el mantenimiento de las neuronas in vitro no es particularmente sencillo.Existe una abundancia relativa de técnicas para el aislamiento neuronal del tejido cortical de los roedores adultos que parecen resultar en un número sustancial de neuronas aisladas ( es decir, millones) ^{5 , 6 , 7.} En cambio, el rendimiento de las neuronas del tejido de la médula espinal es inferior ^{8 , 9 , 10} , en parte debido a la menor masa de tejido, y en los ratones existe una relativa escasez de técnicas para el aislamiento de neonatos Las neuronas de la médula espinal y los métodos existentes están limitados por rendimientos de neuronas más bajos ( es decir, cientos) ⁹ o por técnicas laboriosas y pesadas en recursos que requieren el aislamiento de ratones embrionarios ¹⁰ .

En este protocolo,Utilice una técnica que permita el aislamiento económico y eficaz de un número sustancial de neuronas de las médulas espinales de los ratones neonatales. Como es común en las técnicas publicadas anteriormente, utilizamos la papaína como una proteasa enzimática, lo que permite la liberación de neuronas del tejido de la médula espinal ^{5 , 6} . Además, se utiliza un gradiente de densidad para la separación refinada de células, que se ha demostrado que es eficaz ^{6 , 10} . Mientras que el medio en el que las células se incuban puede variar, en nuestra experiencia y como se publicó anteriormente ¹¹ , la suplementación con el suplemento de medio de cultivo B27 fresco ha demostrado ser crítico para la longevidad de las neuronas. Las neuronas son típicamente viables hasta 10 días, permitiendo que se realice el tratamiento.