O ensaio população lado capitaliza sobre a capacidade aumentada de determinadas células dentro de um tecido que efluxo o corante de ligao ao ADN Hoechst 33342, devido aos elevados níveis da cassete de ligao de ATP (ABC) proteínas transportadoras sobre a membrana celular. As células que efluxo o corante Hoechst 33342 pode ser identificado utilizando análise de citometria de fluxo duplo comprimento de onda após o corante é excitada por um laser de UV. Este ensaio foi utilizado pela primeira vez para identificar células estaminais hematopoiéticas murinas (HSCs) ^1, mas foi uma vez utilizado para identificar populações de células estaminais / progenitoras em muitos tecidos e tipos de cancro (revisto em referência 2). No entanto, nem todas as populações de células têm uma população lado, e nem todas as populações laterais são enriquecidas para as células estaminais / progenitoras.

O peixe-zebra é um poderoso vertebrado sistema modelo genético para o estudo do cancro humano ^{3, 4,} com um número de vantagens em relação mo murino tradicionaldels de cancro. Embriões de peixe-zebra são externamente fertilizado e são opticamente transparentes, facilitando transgénese e a observação in vivo de processos patológicos, incluindo a iniciação e progressão do cancro. Até à data, o ensaio população lado para detectar potenciais de células estaminais ou progenitoras só foi aplicada para a medula do rim em peixes-zebra para identificar HSCs, e não a quaisquer modelos de cancro de peixe-zebra ^{5, 6.}

O modelo de peixe-zebra de células T de leucemia linfoblástica aguda (LLA-T) é morfologicamente e geneticamente semelhante ao humano T-ALL ^{7, 8, 11.} T-ALL é uma neoplasia agressiva que, em humanos, é responsável por 10-15% dos pediátrica e 25% dos adultos TODOS os casos ^9. Embora o tratamento de LLA-T tem melhorado, recaída ainda é comum e está associado a um prognóstico pobre. T-ALL tumores são hétérogèneous e conter muitas subpopulações de células de tumor diferentes, incluindo leucemia iniciar células (PBR). PBR são definidas pela sua capacidade de voltar a crescer todo o tumor a partir de uma única célula, e a frequência de PBR dentro de uma população de células de tumor pode ser calculado através do transplante de células doses variadas para receptores por meio de um ensaio de transplante de diluição limitante (LDA). Embora as experiências foram efectuadas de LDA em peixes-zebra para calcular a frequência de PBR ^{8, 10, 11,} esta determinação é feita em retrospectiva e não permite o isolamento potencial do PBR. Por conseguinte, um método para isolar prospectivamente uma população enriquecida em actividade de células estaminais do cancro é inexistente. A identificação e isolamento de células da população lado de peixe-zebra t-alls é o primeiro passo no sentido de resolver esta deficiência.

O protocolo aqui apresentado descreve como gerar de forma eficiente T-ALL tumores em ZEBRafish utilizando transgénese mediada por tol2, a colheita das células T-ALL tumores, e mancham-los com Hoechst 33342 para identificar a população de células lado. Futuro em experiências in vivo com peixe-zebra LLA-T poderia incluir se as células da população lateral são enriquecidos para os PBR ou têm outras propriedades de haste ou progenitoras semelhantes.