果蝇已被证明是用于新颖保守的基因和背后复杂行为的神经元回路的识别非常有用的。苍蝇提供一个复杂的遗传工具包和一个简化的神经系统，其允许精确遗传和神经元操作^{1，2，3，4}至解剖伤害感受^5，6，7的细胞和分子基础。幼虫可用于这些分析是特别有用的，因为对于温和触摸^{8，9，10，}有害热^11，12，13和有害刺激⁴的机械感觉行为分析^， </sup> ¹¹已经建立，并且透明幼虫角质层允许表皮和下面的感觉神经元的活的或固定成像。最近，有害低温的试验也已开发^7，这是我们在这里详细描述。

使用细的，锥形的尖低温探针，我们表明， 果蝇幼虫表现出了一组冷特定反应性的行为，从正常运动过程中观察到的行为，以下温柔的触摸不同的，或后苛刻机械或高温的刺激^7，8，11 。冷特定行为包括鲁棒的全体收缩（CT），一个45-90º加注的后段（PR）和前的同时加注以及后段成U形（US）的。这些行为的发生率随着温度的降低，但在s每个峰增加轻轻不同寒冷的气温。最近的工作表明CT响应由不同周围感觉神经元比那些对有害热或苛刻机械刺激作出反应⁷介导的。

很像脊椎动物伤害感受器， 果蝇多个树枝状（MD）周围感觉神经元具有arborize在表皮¹复杂树枝状结构。 MD神经元存在于每个幼虫本体段，伸出的它们的轴突到腹神经索^14。 MD的感觉神经元被分成基于树枝状形态四种不同的类别（I-IV）和具有不同的感觉功能^{4，9，10，15，16，17。}而所需要的幼虫侧向车身侧倾响应IV类神经元于高温或苛刻机械刺激^4，类需要III神经元温柔的触摸响应^9,10和不仅由冷启动，而且还需要用于冷诱发的行为反应^7。既III类和IV类神经元利用离散瞬时受体电位（TRP）通道，以促进对有害^7，11，18和非有害刺激物^{9，10，17，19}的行为反应。此外，幼虫伤害感受致敏损伤后，在细胞²⁰和行为水平^12,21。

这里所描述的试验允许quantificatio或者是正常，或潜在的n个改变行为反应冷温度范围从有害低温（≤10℃），无害的冷却（11-17℃），于环境温度下（18-22℃）。在该测定中使用的冷的温度下能够直接激活III类感觉神经元，引发健壮的，可再现的钙的增加和冷诱发的行为反应，其可以是定性和定量分析^7。此测定法可应用到几乎所有的基因型的幼虫以及幼虫暴露于不同的环境条件（改变的营养，受伤，药物试剂），以确定该影响冷痛觉，疼痛致敏性或伤害性可塑性遗传和环境因素。鉴于thermosensation跨越许多物种无处不在，这种检测提供了痛觉研究中的一个有价值的工具，可能会发现新的基因目标，或将改善神经元相互作用我们的脊椎动物伤害性的理解。

定制的冷探针（见低温探针， 材料的表 ）利用控制珀耳帖装置，其冷却通过热传导的铝轴和锥形尖端的闭环温度。热敏电阻被嵌入在铝锥形尖端内报告所述控制单元上的实时温度。散热器和风扇安装于热电模块，以调节珀尔帖效应的热负荷（QC）左右（22-0℃）所需温度范围，可以实现（见热控制单元， 材料的表 ）。冷探针尖端的有害冷的刺激是通过手工施加到背中线，以链段（S）从前面和后面的端部等距离（大致段A4，参见图1A）的幼虫。为了应对寒冷刺激，幼虫通常产生三个冷诱发的行为之一的10秒内切断：一个完整​​的身体收缩（CT），一个45-90º加注前，后段的成U型（US）或后段（PR）（在结果描述）的加注。正常蠕动运动或觅食行为的过程中进行这些行为都没有。这些行为也可从温和的触摸响应和高温或有害机械刺激的厌恶轧制响应不同。