자동 방사 화학 합성 [¹⁸ F] 3F4AP : 결절성 탈수 초성 질환 이미지 진단용 PET 트레이서

주의 : 방사성 물질 사용과 관련된 모든 절차는 해당 지역의 방사선 안전국의 승인을 받아야합니다. 방사성 물질로 작업 할 때 실험실 외투와 개인 방사선 배지를 착용하십시오. 항상 두 단계의 장갑을 사용하고 방사능 처리와 관련된 각 단계 후에 가이거 계수기를 사용하여 손을 확인하십시오. 장갑이 방사능으로 오염되면 폐기하고 바깥 장갑을 교체하십시오. 적절한 차폐를 사용하고 방사선원과의 접촉 시간을 최소화하고 거리를 최대화하십시오. 1. 실험 1 주 전에 : 재료 준비 [ 18 F] 3F4AP sequence 다운로드 : Synthera 사용자는 사용자 데이터베이스 (http://www.iba-radiopharmasolutions.com/products/chemistry)에 로그인하여 3F4AP 용 시퀀스 파일을 다운로드 할 수 있습니다. 다른 신디사이저 사용자는 일련의 단계에 따라 자체 스크립트를 작성해야 할 수 있습니다. 주석 처리 된 시퀀스를 탐색하여 s에 익숙해집니다.합성에 관련된 teps. 합성에 필요한 가스가 충분한 지 확인하십시오. 신시사이저에는 압축 가스, 헬륨 또는 질소가 필요합니다. 또한 75 psi 이상의 압축 공기가 필요합니다. 압력이 제조자가 권장하는 범위 내에 있는지 확인하십시오. HPLC 이동상 준비 : 1 L의 50 mM 인산 나트륨과 10 mM의 트리 에틸 아민을 준비한다. pH 측정기를 사용하여 포화 수산화 나트륨을 저어 주면서 pH를 8.0 ± 0.1로 조정한다. 0.22 μm bottletop 필터를 통해 용액을 여과하고 5 % 부피의 에탄올을 첨가한다. 오븐에서 하룻밤 동안 건조 유리 제품. 2. 실험의 날 : 불소 -18 도착 전 1 mL 주사기를 사용하여 시약병에 적절한 시약을 채 웁니다. 바이알 2와 3은 오븐 건조 된 약병과 아르곤하에 보관 한 무수 용매를 사용하십시오. 크림 퍼 (crimper)를 사용하여 크림 씰로 바이알을 밀봉하십시오. 바이알 1 채우기 (11 mm 직경 / 2 mL 볼륨 vial)을 400μL의 TBA-HCO3 + 800μL의 아세토 니트릴 (MeCN)과 혼합 하였다. 전구 물질 용액 1.0 μg / mL + MeCN 450 μL 50 μL로 바이알 2 (13 mm / 4 mL 바이 얼)를 채 웁니다. 유리 병 3 (11mm / 2mL 유리 병)에 500μL의 MeCN을 채 웁니다. 메탄올 (MeOH) 중 0.2 % 옥살산 4 mL로 바이알 4 (13 mm / 4 mL 바이 얼)를 채 웁니다. 조건 QMA (강한 음이온 교환) 및 알루미나 – N 고상 추출 카트리지. 10 mL 주사기를 사용하여 5 mL의 8.4 % NaHCO 3 를 QMA를 통해 떨어 뜨린 다음 5 mL의 초순수 탈 이온화 I 형 물 (25 ºC에서 18.2 ΜΩ • cm)을 통과시킵니다. 5mL의 초순수를 Alumina-N 카트리지를 통과시킨 후 5mL의 MeOH + 0.2 % 옥살산을 통과시킨다. HPLC를 켜고 30 분 동안 이동상 분당 4 mL로 C-18 컬럼을 조절한다. 수소 촉매 카트리지 홀더에 새로운 촉매 카트리지를로드하고 100 % MeOH 0.5 mL / min의 흐름을 시작하십시오. 에스수소 조절기를 50psi로 조절하고 카트리지를 15 분 동안 조절하십시오 ( 그림 2 ). 그림 3 과 같이 카트리지 및 수집 바이알을 부착하여 바이알 1 ~ 4를 해당 위치에 설치하여 Integrated Fluid Processor (IFP)를 조립하십시오. 벤트 니들과 함께 수집 바이알을 수소 첨가 장치의 출력 라인에 연결하십시오. 신디사이저의 소프트웨어를 시작하십시오. 로그인과 암호를 입력하십시오. 제조업체 지침에 따라 신디사이저에서 사전 실행 검사를 수행하십시오. "Sequences"를 클릭 한 다음 "Open"을 클릭하여 3F4AP 시퀀스를로드하십시오. 화면의 "로드"버튼을 클릭하여 IFP를로드하십시오. 실행을위한 파일 이름을 입력하고 "시작"을 클릭하여 시퀀스를 시작하십시오. (자동 합성기는 18F 로딩 단계 전에 자동으로 멈 춥니 다.) 신디사이저가 일상적인 자체 검사 단계 (시퀀스의 첫 번째 단계)를 거치는 것을 지켜보십시오. 비명을보세요n 경고 나 경고가 없는지 확인하십시오. 신디사이저가 라인을 비우고 실행 준비를 위해 반응기를 예열 할 때 소리에주의하십시오. 온도 표시기가 상승하여 65ºC에 있어야합니다. 신디사이저가 18 F 전송 준비가되었음을 나타내는 신호 (청각 신호음)가 나올 때까지 기다리십시오. 3. 실험 일 : 18 F 표시 싸이클로트론에서 생성 된 18 F의 원하는 양을 사이클로트론 타겟에서 18 F 바이알에 원격 전송합니다. 방사능의 양을 확인하고 배달 시간과 함께 기록하십시오. 참고 : 18 F – 전송에 직통 전화를 사용하지 않는 경우, 중정 관을 통해 바이알에 활동을 전달하기 위해 바늘이 부착 된 미리 채운 주사기를 사용하십시오. 시작 방사능의 양은 방사선 안전국 (Office of Radiation Safety)에 의해 설정된 한계와 최종 추적자의 원하는 양에 달려있다. 전형적인 양은 50 내지 500 mCi이다. <li> "Resume"을 눌러 신디사이저의 시퀀스를 다시 시작하십시오. 그러면 18 F를 QMA로 전송합니다. 컴퓨터 화면에서 자동 시퀀스를 통해 합성 진행을 모니터링합니다. 바이알에서 18 초 동안 QMA로 90 초 동안 옮기는 것을 지켜보십시오. QMA에 18F를 포획 한 후, TBA-HCO3 용액 (약병 1)으로 용리된다. (시퀀스의 파트 2) TBA 18 F가 감압 (5 kPa) 및 가열 (100 ºC)에서 건조되는 동안 신디사이저의 압력 및 온도 추적을 모니터링 한 다음 추가 건조 및 냉각 단계를 수행합니다. (시퀀스의 파트 3) 무수 MeCN (유리 병 3)과 전구체 용액 (유리 병 2)을 반응기로 옮기고 실온에서 1 분 동안 반응하는 모습을 관찰하십시오. 용액은 무색이거나 매우 희미한 노란색이어야합니다. (시퀀스의 파트 4) 옥살산 이동 관찰용액 (약병 4)을 반응기에 첨가 하였다. 용액이 알루미나 -N 카트리지를 통해 반응기에서 최종 제품 바이알로 전달되는 것을 관찰하십시오. (시퀀스의 파트 5) 순서가 끝나면 보고서를 인쇄하고 IFP를 꺼내고 가스 탱크를 잠그고 소프트웨어를 닫습니다. 첫 번째 절차를 수립하는 동안 카트리지와 바이알을 별도로 선량 교정기에 넣고 알루미나 N 카트리지와 수집 바이알의 방사능을 측정합니다. 활동 및 측정 시간을 기록하십시오. 사용한 카트리지를 납 함유 폐기물 용기에 넣으십시오. 다음 단계로 이송하기 위해 차폐 된 용기에 수집 바이알을 놓습니다. 부착 된 2 "바늘이 달린 1 mL 주사기를 사용하여 중간 생성물 용액의 시료 약 100 μL을 표준 HPLC 바이알에 공정 중 품질 관리를 위해 수동으로 옮기십시오.이 시료의 10 μL를 HPLC에 주입하여 순도 및 중간체의 정체성diate 화합물. 참고 : HPLC 조건 : XDB 5 μm, 9.4 x 250 mm C18 컬럼. 유량 4 mL / min. 이동상 (50 mM Na2HPO4, 10 mM TEA, 5 % EtOH). 독재 정치 15 분. 4. 실험의 날 : 수소화 주의 : 제품의 수소 첨가 장치 주입은 적절한 차폐 예방책을 사용하여 수행해야합니다. 수소 가스는 올바르게 처리하고 배출해야합니다. 참고 : 수소화 반응기는 신디사이저의 HPLC 컬럼 대신에 연결하여 신디사이저 소프트웨어를 사용하여 제어 할 수 있습니다. 신디사이저 HPLC 시퀀스를 시작하여 0.5 mL / min에서 수소화 기 흐름을 설정하십시오. 수동으로 수소 압력을 50 psi로 설정하십시오. 라벨링 및 퀀칭 단계가 끝나면 신디사이저는 중간 생성물 용액을 수소화 장치 / HPLC 루프로 옮깁니다. 방사능 피크가 HPL에 나타날 때C 소프트웨어가 수집 밸브를 토글하여 제품을 수집합니다. 용량 교정기를 사용하여 조 생성물의 방사능을 측정합니다. 참고 : 조 생성물은 핫셀 내부의 자동화 된 HPLC 시스템에 주입해야합니다. 정제 후, 최종 생성물을 수집하여 USP 및 FDA 규정에 따라 무균 ISO 클래스 5 층류 공기 셀로 분배한다. 5. 실험의 날 : 복용량의 정화 및 준비 조 생성물을 HPLC에 주입하고 자동 분획 수집기를 사용하여 최종 생성물 피크에 해당하는 분획을 수집합니다. 각 튜브에는 0.66 mL의 용액이 들어 있습니다. 참고 : HPLC 조건 : XDB 5 μm, 9.4 x 250 mm C18 컬럼. 유량 4 mL / min. 이동상 (50 mM Na2HPO4, 10 mM TEA, 5 % EtOH). 독재 정치 15 분. 수집 4-15 분. 용량 측정기를 사용하여 각 분획의 방사능을 측정하고 기록하십시오. 가장 많은 양의 분수를 합치십시오.s의 방사능 (전형적으로 튜브 14-18). 10 ML 주사기와 제품 솔루션을 그려 멸균 유리 병에 0.22 μm의 필터를 통해 샘플을 전달하십시오. 바이알 라벨에 방사능의 양, 합성 시간의 끝 및 용액 양을 기록하십시오. 이것은 주사를위한 최종 복용량입니다. 품질 관리 시험을 위해 ~ 0.8 mL의 용액을 곁에 두십시오. 6. 실험의 날 : 품질 관리 (QC) 테스트 복용량 방출 이전 : 납 차폐 유리를 통해 조사량을 검사하십시오. 용액은 깨끗하고 무색이며 미립자 물질이 없어야합니다. 방사 화학적 동일성 : RadioTLC의 경우 : 참조 표준과 나란히 TLC 판에 한 방울의 샘플을 놓습니다. 95 % MeOH : 5 % 아세트산을 사용하여 TLC 챔버에서 TLC 플레이트를 작동시킨다. UV 조명 하에서 참조 표준을 시각화하고 연필로 위치를 표시하십시오. TLC 플레이트를 radioTLC 스캔의 스테이지에 테이프로 고정하십시오.그리고 피크 시간을 기록하십시오. 기준 표준 및 방사성 피크의 R f 값은 5 % 이내로 일치해야합니다. RadioHPLC의 경우 : HPLC에서 참조 표준을 포함하거나 포함하지 않은 선량 10 μL를 실행하십시오. 참조 표준 및 방사성 피크의 보유 시간은 일치해야합니다. 스파이크 된 샘플에는 단일 공명 피크가 있어야합니다. 방사성 화학 순도의 경우 : radioHPLC 및 radioTLC 표적 봉우리의 곡선 아래 면적을 측정합니다. 목표 피크의 면적은 결합 된 모든 방사성 피크의 면적의> 95 % 여야합니다. 특정 방사능의 경우 : 사전 설정된 검정 곡선을 사용하여 UV HPLC 트레이스 곡선 아래의 면적에서 결정된 질량에 대해 피크의 방사능 양 (단계 5.2에서 측정 됨)으로 특정 방사능을 계산합니다. 특정 방사능은 50mCi / μmol보다 높아야합니다. 잔류 용매 분석을 위해 : 잔류 솔벤의 양을 측정하십시오ts (MeCN, MeOH)를 가스 크로마토 그래피를 사용하여 투여한다. 용제 수준은 아세토 니트릴의 경우 <0.04 %, 메탄올의 경우 <3,000ppm이어야합니다. EtOH의 양은 10 % w / v 미만이어야한다. 멸균 필터 완전성 테스트 (버블 포인트) : 단계 5.3에서 사용 된 필터를 압력 조절기가 장착 된 질소 공급 장치에 연결하고 바늘을 물에 잠기 게하십시오. 압력 게이지를 보면서 점차 가스 밸브를여십시오. 필터는 바늘에서 기포가 없으므로 파열없이 50 psi까지 견딜 수 있어야합니다. 기포가 바늘에서 나올 때까지 50 psi 이상으로 압력을 높이십시오. 이 압력을 기록하십시오. 파열 압력이며 50 psi 이상이어야합니다. 방사성 핵종 반감기의 경우 : 선량 교정기에서 10 분 이상 두 시점에서 제품의 방사능을 측정합니다. 아래 방정식을 사용하여 반감기를 계산합니다. 반감기는 18F의 반감기와 5 분 이내에 일치해야합니다 (109 ± 5 분) : t ½ 계산 값 = 0.693t ÷ ln (A1 / A2) 여기서 t 는 측정 사이의 간격이고, A1, A2는 각 시간 지점에서 측정 된 활동입니다. 방사성 동질성 및 순도 : 감마 카운터를 사용하여 제품 샘플의 γ 선 스펙트럼을 얻습니다. 스펙트럼은 511 keV의 에너지에서 하나의 단일 광 피크를 나타냅니다. 스펙트럼에 다른 사진 피크가 없어야합니다. 내 독소 분석 : LAL 발색성 내 독소 정량 시험을 사용하여 내 독소 수준을 측정합니다. 최종 제품 부피가 10 mL 인 1:10 희석 된 제품의 경우 내 독소 레벨은 <1.75 EU / mL이어야합니다. 각 QC 검사의 결과를 기록하십시오. 모든 검사가 통과 된 경우에만 동물 연구를위한 용량을 방출하십시오. 투여 후 방출 : 무균 시험을 위해 : 유체 티오 글리콜 레이트와 트립 타카 제 모두에 용량 샘플을 첨가하십시오간장 국물. 14 일이 지나면 언론 매체에서 성장을 보지 못할 것입니다. 7. 실험 일 : 계산 (표 1) 비 감쇠 보정 된 방사 화학적 수율 (ndc RCY) : 시작 방사능에 대한 최종 생성물의 방사능 량으로서 ndc RCY를 계산한다. 방사성 표지 효소의 경우 : 알루미나 N 카트리지 (비 함유 [ 18 F] F – ) 및 수집 바이알의 방사능 대비 수집 바이알의 방사능 비율로 표지 수율을 계산합니다. 수소화 수율의 경우 : HPLC에 주입 된 방사능보다 원하는 피크의 방사능 양으로 수소화 수율을 계산하십시오. 필터링 손실의 경우 : 필터링을 계산하기 전에 필터에 남아있는 방사능과 방사능에 비해 주사기가 손실됨을 계산합니다.