自动放射化学合成[¹⁸ F] 3F4AP：一种用于成像脱髓鞘疾病的新型PET示踪剂

小心：涉及使用放射性物质的所有程序必须经当地的辐射安全办公室批准。当使用放射性物质时，穿上实验室外套和个人辐射徽章。随时使用两层手套，并在涉及处理放射性的每个步骤之后检查盖革计数器。如果手套被放射性废物污染并更换外套手套。使用适当的屏蔽，最小化与辐射源接触的时间并最大化距离。 1.实验前一周：材料的制备下载[ 18 F] 3F4AP序列：Synthera用户可以登录用户数据库（http://www.iba-radiopharmasolutions.com/products/chemistry）并下载3F4AP的序列文件。其他合成器的用户可能需要根据步骤顺序编写自己的脚本。浏览通过注释的序列来熟悉s涉及合成的。脚。 确保有足够的气体用于合成。合成器需要压缩气体，氦气或氮气。它还需要> 75 psi的压缩空气。确保压力在制造商推荐的范围内。 制备HPLC流动相：制备1μL50mM磷酸钠和10mM三乙胺。使用pH计，通过在搅拌下滴加饱和氢氧化钠将pH调节至8.0±0.1。通过0.22μm瓶盖过滤器过滤溶液并加入5％体积的乙醇。 干燥的玻璃器皿在烤箱过夜。 2.实验日：氟-18到达之前 使用1 mL注射器，用合适的试剂填充试剂瓶。对于小瓶2和3，使用保持在氩气下的烘箱干燥的小瓶和无水溶剂。用压接机用压接密封条密封小瓶。 填充样品瓶1（直径11毫米/ 2毫升体积）al）与400μLTBA-HCO 3 +800μL乙腈（MeCN）。 向样品瓶2（13mm / 4mL）中加入50μL前体溶液1.0mg / mL +450μLMeCN。 用500μL的MeCN填充样品瓶3（11mm / 2mL小瓶）。 用4mL 0.2％草酸的甲醇（MeOH）填充小瓶4（13mm / 4mL小瓶）。 调节QMA（强阴离子交换）和氧化铝-N固相萃取柱。使用10mL注射器，通过QMA逐渐通过5 mL 8.4％NaHCO 3，然后通过5 mL超纯水去离子型I水（25℃时为18.2MΩ•cm）。通过5mL超纯水通过氧化铝-N柱，然后加入5mL MeOH + 0.2％草酸。 打开HPLC，并用流动相每分钟4 mL处理C-18柱30分钟。 将新的催化剂筒装载到氢化器盒架上，开始流速为0.5mL / min的100％MeOH。小号并将氢调节器调节至50 psi，并将墨盒调节15分钟（ 图2 ）。 通过在其位置上引入小瓶1至4组装集成流体处理器（IFP）， 如图3所示连接墨盒和收集瓶。将带有通气针的收集瓶连接到氢化器的输出管线。 启动合成器的软件。输入登录名和密码。根据制造商的说明对合成器执行预运行检查。 单击“序列”，然后单击“打开”加载3F4AP序列。 通过单击屏幕上的“加载”按钮加载IFP。键入运行的文件名，然后单击“开始”启动序列。 （自动合成器将在18 F加载步骤之前自动暂停。） 作为合成器观看，通过例行自检步骤（序列的第一部分）。看看scree以确保没有警告或警报。当合成器冲洗线路并预热反应容器以准备运行时，注意声音。温度指示器应上升并保持在65℃。等待信号（听觉蜂鸣声），指示合成器准备好进行18 F传输。 实验日： 18 F标签将所需回旋加速器产生的18 F量从回旋加速器靶转移到18 F小瓶。验证放射性的量，并记录它与传送时间。 注意：如果不使用直接管线进行18 F-转运，请使用带有针头的预充式注射器将活动通过隔膜转移到小瓶。起始放射性的量取决于辐射安全办公室设定的限值和所需量的最终示踪剂。典型数值介于50和500 mCi之间。 <li>按“恢复”恢复合成器上的序列。这将启动将18F转入QMA。 在计算机屏幕上的整个自动序列中监视合成的进度。 观察将18 F从小瓶转移到QMA上90秒。捕获18 F -在QMA上，用TBA-HCO 3溶液（小瓶1）洗脱。 （序列的第二部分） 在TBA 18 F在减压（5 kPa）和加热（100ºC）下干燥，然后进行额外的干燥和冷却步骤，监测合成仪上的压力和温度曲线。 （序列的第3部分） 观察无水MeCN（小瓶3）和前体溶液（小瓶2）的转移到反应器中，以及它如何在室温下反应1分钟。溶液应为无色或微黄色。 （序列的第4部分） 观察草酸的转移溶液（小瓶4）。观察，因为溶液是从反应器通过氧化铝-N柱转移到最终产品小瓶的压力。 （序列的第5部分） 在序列结束时，打印报告，弹出IFP，关闭气罐，并关闭软件。 在首次建立该程序时，通过将药筒和小瓶单独引入剂量校准器来测量氧化铝-N盒和收集瓶中的放射性。记录测量的活动和时间。将用过的墨盒放在有铅废物容器中。将收集瓶放入一个屏蔽的容器中，以便运输到下一步。 使用连接有2“针的1 mL注射器，手动将大约100μL中间产物溶液样品转移到标准HPLC样品瓶中进行质量控制。将10μL此样品注入HPLC，以评估纯度和中间件的身份二酸酯化合物。 注意：HPLC条件：XDB 5μm，9.4 x 250 mm C18色谱柱。流量4 mL / min。流动相（50mM Na 2 HPO 4，10mM TEA，5％EtOH）。等度15分钟 4.实验日：氢化注意：将产品注入氢化器必须使用适当的屏蔽预防措施进行。氢气必须正确处理和排气。 注意：氢化反应器可以连接代替合成仪上的HPLC色谱柱，并使用合成仪软件进行控制。 通过开始合成器HPLC序列，以0.5mL / min设置氢化器流。手动设置氢气压力至50 psi。 完成标记和淬火步骤后，合成仪将中间产物溶液转移到氢化器/ HPLC循环中。 当HPL上出现放射性峰时C软件切换收集阀以收集产品。使用剂量校准器测量粗产品的放射性。 注意：粗产物应注入热电池内的自动化HPLC系统。纯化后，然后收集最终产品，并按照USP和FDA规定将其分配到无菌ISO 5级层流气流热池中。 5.实验日：剂量的净化和制备将粗产物注入HPLC中，并使用自动级分收集器收集对应于最终产物峰的级分。每个管含有0.66mL溶液。 注意：HPLC条件：XDB 5μm，9.4 x 250 mm C18色谱柱。流量4 mL / min。流动相（50mM Na 2 HPO 4，10mM TEA，5％EtOH）。等度15分钟收集4-15分钟。 使用剂量校准器测量每个部分的放射性并进行记录。组合最高量的分数的放射性（通常为管14-18）。 用10 mL注射器抽取产品溶液，并将样品通过0.22μm过滤器送入无菌瓶中。在小瓶标签上记录放射性的量，合成时间结束和溶液体积。这是注射的最终剂量。放置〜0.8 mL溶液进行质量控制测试。 6.实验日：质量控制（QC）测试 剂量释放前： 通过铅屏蔽玻璃检查剂量。溶液必须清澈，无色，无颗粒物。 放射化学特征： 对于RadioTLC：使用参考标准并列在TLC板上的一滴样品。使用95％MeOH:5％乙酸在TLC室上运行TLC板。在UV照明下可视化参考标准，并用铅笔标记其位置。 将TLC板粘贴到radioTLC扫描的阶段呃记录时间的高峰。参考标准和放射性峰值的R f值必须在5％以内。 对于RadioHPLC：在HPLC上运行10μL具有和不具有参考标准的剂量。参考标准和放射性峰值的保留时间必须匹配。必须在加标样品上看到单一的coelution峰。 放射化学纯度：测量放射HLCLC和radioTLC靶峰的曲线面积。所有放射性峰值组合面积的面积必须> 95％。 对于特定的放射性：使用预先建立的校准曲线，计算特定放射性，作为峰值放射性的量（在步骤5.2中测量）超过由UV HPLC曲线曲线下的面积确定的质量。比放射性必须高于50mCi /μmol。 对于残留溶剂分析：测量剩余溶剂的量ts（MeCN，MeOH），使用气相色谱法。乙腈溶剂的含量必须<0.04％，甲醇的溶剂浓度必须<3,000 ppm。 EtOH的量必须小于10％w / v。 对于无菌过滤器完整性测试（泡点）：将步骤5.3中使用的过滤器连接到配有压力调节器的氮气供给器，并将针浸入水中。在观察压力表时逐渐打开气阀。过滤器应承受高达50 psi的压力，不会出现爆裂，如针缺少气泡流所证明的。增加压力超过50psi直到气流从针头出来。记录这个压力，它是爆破压力，它必须> 50 psi。 对于放射性核素半衰期：在剂量校准器间隔≥10分钟的两个时间点测量产品的放射性。使用下面的等式计算半衰期。半衰期必须在18分钟内达到5分钟以内（10分钟）9±5分钟）： t½计算 = 0.693 t÷ln（A 1 / A 2 ） 其中t是测量之间的间隔，A 1 ，A 2是在每个时间点测量的活度。 对于放射性核素的同一性和纯度：使用γ计数器获得产物样品的γ射线谱。光谱应在511 keV的能量下显示一个单一的光峰。光谱中应该没有其他的光谱峰。 对于内毒素分析：使用LAL显色内毒素定量试验测量内毒素水平。对于最终产品体积为10 mL的1:10稀释产物，内毒素含量必须<1.75 EU / mL。 记录每个QC测试的结果。释放动物研究的剂量，只有所有的测试通过。 剂后释放： 对于无菌试验：将两个流体的巯基乙酸和胰蛋白酶的剂量样品加入大豆肉汤14天后，媒体上看不到增长。 7.实验日期：计算（表1） 对于非衰变校正放射化学产率（ndc RCY）：计算ndc RCY作为最终产物中放射性的量超过起始放射性。 对于放射性标记效率：计算标签收率，作为收集小瓶中放射性与氧化铝​​-N盒（非法定的[ 18 F] F – ））和收集瓶中放射性的比值。 对于氢化产率：计算加氢产率，作为注入HPLC的放射性的所需峰的放射性量。 对于过滤损失：计算滤波损失，因为过滤前过滤器和注射器中的放射性比放射性残留。