Summary

Батарея поведенческие тесты оценки общего локомоции, мышечной силы и координации мышей

Published: January 23, 2018
doi:

Summary

Поведенческое тестирование используется в предварительно клинические испытания для оценки фенотипические эффекты болезни или лечения на самочувствие животного. Чтобы глобально оценить функционирование мотора, мы выбрали тесты для общего локомоции, мышечной силы и координации: поле Открыть тест, сетки и испытания на rotarod, соответственно.

Abstract

Поведенческое тестирование используется в предварительно клинические испытания для оценки фенотипические эффекты и результаты, которые конкретного заболевания или лечения на самочувствие и здоровье животного. Есть многочисленные поведенческие тесты, которые могут быть применены. Мы выбрали тест для общего локомоции, открытом поле тест (УДК); для мышечной силы, сетка теста (MT); и тест для координации, тест rotarod (ОР). Тестирование может быть выполнено на еженедельной или ежемесячной основе. Как тест для общего локомоции часто произведений объективно контроля параметров движения в то время как указатель мыши находится в открытом поле аппарат. Поле, как правило, поле 2′ x 2′, и движения регистрируются через лазерного зондирования или захвата видео. Мыши помещается в центре открытого поля и разрешено свободно передвигаться для теста. MT использует задержку для мыши падать Перевернутый экрана как мера мышечной силы. Мыши помещается на экране, который оказывается перевернутым над ясно коробку и приурочена их задержку падать. Выполняются три испытания, с лучшими из трех испытаний, забил на этот день. Балл 60 s является максимальное время покинул мыши инвертированным. Мышей даны в период 5-мин отдыха между сетки тестовые испытания. И наконец ускоренной протокол на RR оценивает двигательной координации и выносливость. Во время судебного разбирательства мыши прогулки на вращающегося стержня как он увеличивает скорость от 4 об/мин/40 мин более 5 мин. Судебный процесс заканчивается, когда мыши коснется датчик намагниченных давления после падения. Каждая мышь проходит три испытания, и забил лучший судебный процесс на этот день. Этот комбинированный поведенческих данных позволяет для глобальной оценки мобильности, координации, силы и движения подопытных животных. По крайней мере два из трех поведенческих тестирования меры должны продемонстрировать улучшение для животных квалифицировать как имеющие общее улучшение двигательной функции.

Introduction

Поведенческого тестирования призвана измерить фенотипическую характеристика, будь то в исследованиях для новой модели мыши заболеваний центральной нервной системы или пробную версию новой лечения. Существует целый ряд поведенческих тестов, чтобы выбрать из. Используя комбинацию поведенческие тесты объясняется часто в полной мере оценить результаты доклинических лечения. Батарея поведенческого тестирования здесь включает в себя открытое поле тест (часто), сетка испытания (MT) и rotarod испытания (ОР).

ЧАСТО используется как мера общей двигательной активности1,2,3,4,5,6,7. Эта оценка позволяет мыши, чтобы свободно передвигаться в открытом поле, и измерений являются движения мыши в течение поведенческих судебного разбирательства. Количественного анализа с использованием часто включают в себя воспитание, расстояние перемещения, время провел движущихся (например, ходьба и бег) и изменения в деятельности с течением времени (например, прыжки и медленнее/ГиперАктив движений), именно поэтому она является полезным и тщательный анализ грызунов поведения.

MT используется для оценки прочности мышей1,2,8,9,10,11. Использование всех четырех конечностей повесить офф сетке сетка позволяет для неинвазивного измерения мышей способность показать устойчивый конечности напряженности возражая влияние гравитации. Эта оценка осуществляется путем размещения мыши на Перевернутый сетки и сроки ее задержка падать. Этот тест оценивает мышечную силу мыши, измерения, как долго он может держать себя на экране Перевернутый до падения.

RR оценивает координации мыши при использовании ускорения протокол1,2,,78,9,12,13. Rotarod аппарат состоит из цилиндрического пучка, который вращается в воздухе, начиная 4 об/мин. Мышь может узнать этот навык двигательной координации и затем оспаривается медленно, добавочное увеличивается до 40 об/мин. Классически постоянной скорости протокол — это мера мышечной силы, тогда как ускорение протокола для RR оценивает координацию, выносливость и мышечной силы1,2,7, 14.

Преимущества этих трех поведенческие тесты, что они широко принимаются на протяжении грызунов поведенческих тестирования сообщества2,,78,9и когда приняты не только как сумма отдельных тестов, но в совокупности они может использоваться как глобальной оценки фенотипические поведения при расследовании различных результатов экспериментального лечения. ЧАСТО является одним из только тесты для общей двигательной активности2. RR также является одним из немногих способов для оценки координации2, другие, чем использовать программное обеспечение для анализа походки, который не будет обсуждаться здесь. Есть несколько способов, в которых можно оценить мышечную силу мыши; Однако используя MT, или тест повесить провод, преимущественно используется в литературе и воспринимается как надежный метод для тестирования мышечной силы2,8,9,10, 11. многие другие методы для измерения общего локомоции и координация являются чрезвычайно много времени и не может производить надежные данные (например, вручную времени движение мыши или вручную живопись лапы для анализа походки). Автоматизированных систем для УДК и RR увеличить надежность и достоверность получаемых данных и сэкономить время и усилия.

Например учитывая нейродегенеративные модель мыши Sandhoff болезнь, при выполнении этой батареи тестов, УДК будет первым из этих тестов, используемых для оценки моторными отклонениями, которые обычно наблюдаются в этой мыши модели, начиная в возрасте 3 месяцев. Дефицит двигательной координации также должно стать очевидным начала в возрасте 12 недель. Дефицит в мышечной силы должно начинаться около 14 недель, но они в конечном итоге стать гораздо более значительным, 16 недель.

Эти тесты являются полезными при изучении заболеваний, которые вызывают значительные мотор нарушениями, включая нейродегенеративных заболеваний9 таких Sandhoff болезни1,8,13, болезнь Паркинсона7, Болезнь Хантингтона, рассеянный склероз. Тесты также может использоваться для изучения старение и сделать сравнительный гериатрической оценки или измерения здоровья. Нарушения походки и изменения в двигательный аппарат и баланс видны во многих из этих государств болезни. Тем не менее полезность этих испытаний не ограничивается заболеваний с распространенными нервно-мышечные симптомы.

Пожалуйста, обратите внимание, что там были не смешанных переменных, отмечены мотивации или новизна любого из описанных поведенческих тестирования мер. Это необходимо для некоторых болезненных состояний и патологий, что исследователи приобрести предварительные поведенческих данных, прежде чем мыши показывает любой фенотипические признаки; Исследователь должен затем периодически (еженедельно) убедитесь, что учитываются все моторные нарушения. Многие болезни имеют быстрый фенотипические симптомы заболевания, и без загрузок испытания, эти симптомы не будет учитываться для.

Protocol

Здесь описаны все протоколы были исполнены в соответствии с и были утверждены Комитетом, королевы университета животное уход. Частота поведенческого тестирования может быть еженедельно или ежемесячно или сочетание этих двух (т.е., еженедельные когда ожидает самая большая разница…

Representative Results

Исследования животных могут пройти Поведенческие тестирования парадигмы еженедельно или ежемесячно для размещения точки необходимое время, необходимые для анализа. Смотрите Рисунок 1 примеры поведенческих тестирования времени. В репрезентативных данных н…

Discussion

Для всех тестов, очистить и продезинфицировать поверхность для сведения к минимуму инфекционных заболеваний и дистракторов для мышей. Кроме того убедитесь, что мышей учитывая достаточно периодов отдыха между испытания и поведенческих тестирования при использовании OFT, ОР и MT.

<p class="…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Мы хотели бы поблагодарить Новая надежда теоретических фонда за их неизменную поддержку и финансирование наших исследований. Мы также хотели бы поблагодарить МСДИ частичную финансовую поддержку для этой работы.

Materials

IITC Life Sciences Rotarod with Series 8 computing software  IITC Life Sciences 755
Square Open Field 45 x 45 x 40 cm (grey color). Other floor color available: white, black. Harvard Aparatus (PanLab) 760190
 Open Field Preconfigured Module Harvard Aparatus (PanLab) 760688
Smart V3.0 Software Platform  Harvard Aparatus (PanLab) 760681
Video converter (analog/digital) Harvard Aparatus (PanLab) 760262
Roof fixing sys for camera Harvard Aparatus (PanLab) 760277
Analog Sony Camera & lenseNTSC Harvard Aparatus (PanLab) 760505

Referências

  1. Osmon, K. J., et al. Systemic Gene Transfer of a Hexosaminidase Variant Using an scAAV9.47 Vector Corrects GM2 Gangliosidosis in Sandhoff Mice. Human Gene Therapy. 27 (7), 497-508 (2016).
  2. Brooks, S. P., Dunnett, S. B. Tests to assess motor phenotype in mice: a user’s guide. Nature Reviews, Neuroscience. 10, 519-529 (2009).
  3. Ma, M., Basso, D. M., Walters, P., Stokes, B. T., Moser, P. Behavioural and histological outcomes following graded spinal cord contusion injury in the C57Bl/6 mouse. Exp. Neurol. 169, 239-254 (2001).
  4. Menalled, L. B., et al. Early motor dysfunction and striosomal distribution of huntingtin microaggregates in Huntington’s disease knock-in mice. J.Neurosci. 22, 8266-8276 (2002).
  5. Grusser, C., Grusser-Cornehls, U. Improvement in motor performance of Weaver mutant mice following lesion of the cerebellum. Behav. Brain Res. 97, 189-194 (1998).
  6. De Leonibus, E., et al. Spatial deficits in a mouse model of Parkinson’s disease. Psychopharmacology (Berl). 194, 517-525 (2007).
  7. Morris, M., Koyama, A., Masliah, E., Mucke, L. Tau Reduction Does Not Prevent Motor Deficits in Two Mouse Models of Parkinson’s Disease. PLoS ONE. 6 (12), 1-7 (2011).
  8. Abo-ouf, A., et al. Deletion of tumour necrosis factor-α ameliorates neurodegeneration in Sandhoff disease mice. Human Molecular Genetics. , 1-16 (2013).
  9. Dumont, M. Behavioral Phenotyping of Mouse Models of Neurodegeneration. Neurodegeneration : Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology. 793, 229-237 (2011).
  10. Cabe, P. A., Tilson, H. A., Mitchell, C. L., Dennis, R. A simple recording grip strength device. Pharmacol. Biochem. 8, 101-102 (1978).
  11. Barnēoud, P., Loliver, J., Sanger, D., Moser, P. Quantitative motor assessment in FALS mice: a longitudinal study. Neuroreport. 8, 2861-2865 (1997).
  12. Lui, Y., et al. Mouse model of GM2 activator deficiency manifests cerebellar pathology and motor impairment. Proc. Natl. Acad. Sci. 94, 8133-8143 (1997).
  13. Sango, K., et al. Mouse models of Tay-Sachs and Sandhoff diseases differ in neurologic phenotype and ganglioside metabolism. Nature Genetics. 11 (2), 170-176 (1995).
  14. Jones, B. J., Roberts, D. J. A rotarod suitable for quantitative measurements of motor inco-ordination in naïve mice. Nauyn-Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 259 (2), 211 (1968).
  15. Deacon, R. M. J. Measuring the Strength of Mice. Journal of Visualized Experiments JoVE. (76), (2013).

Play Video

Citar este artigo
Osmon, K. J., Vyas, M., Woodley, E., Thompson, P., Walia, J. S. Battery of Behavioral Tests Assessing General Locomotion, Muscular Strength, and Coordination in Mice. J. Vis. Exp. (131), e55491, doi:10.3791/55491 (2018).

View Video