Musen modeller har blitt brukt til å studere dynamikken i menneskelig sykdommer. Riktig isolasjon av vev bosatt celler fra mus i en sykelig tilstand kan gi en plattform for å forstå den molekylære og mobilnettet bidrag til patogenesen av sykdom¹. En lidelse som er av avgjørende betydning er fedme. Forekomsten av fedme fortsetter å stige over hele verden sammen med insulinresistens og type 2 diabetes mellitus, hjerte-og karsykdommer og fatty leversykdom^2,3. Overdreven næringsstoffet forbruk ytterligere forvrenges av redusert fysisk aktivitet utløser endret signaler fra fettvev, som kan endre andre perifere vev som aorta og lever⁴mobilnettet miljøet. Slike avbrudd i metabolske homeostase resulterer i en kronisk lav karakter systemisk betennelse⁵.

Klassisk aktivering av makrofager bosatt aorta og leveren samt rekruttering til hvit fettvev (WAT) har vist seg å ikke bare starte feilregulering metabolske signaler, men også opprettholde betennelse^6,7. Den fenotypiske og funksjonell mangfold i makrofager er sterkt assosiert med patogenesen av fedme relatert Co-morbidities⁷. Dynamisk plastisitet i macrophage polarisering gjør for disse cellene til å vise en rekke aktivert fenotyper som koordinerer utviklingen og oppløsning av betennelse⁸. Mens klassisk aktivert (M1) makrofager er innblandet i utbredelsen av betennelse, er alternativt aktivert (M2) makrofager forbundet med oppløsning og tissue reparasjon^9,10.

Som kroppen gjennomgår metabolske stress, akkumuleres hvit fettvev unormalt. Utvidet fettvev tiltrekker og beholder inflammatoriske celler som dypt endre normal adipocyte funksjonen for å fremme insulinresistens, hyperglykemi og til slutt type 2 diabetes mellitus, insulinresistens eller hyperglykemi^{11, 12}. Parallelt, hvit fettvev remodels svar på inflammatorisk signaler utgitt av infiltrert klassisk aktivert (M1) fettvev makrofager (ATMs)^13,14. Denne multi-mobilnettet organ utøver en kaskade av signaler at derails normal funksjon av andre kroppens organer som aorta og leveren⁴.

Leveren er en metabolsk kraftpakke som tilpasser seg i respons på stimuli fra nærliggende dysregulated WAT¹⁵. Hepatic makrofager eller Kupffer celler, svar på metabolske forandringer, skiller inflammatoriske cytokiner som transformerer både parenchymal og ikke-parenchymal celle fenotypen og fremme vev remodeling. Hepatic lipid akkumulering, betennelse, overdreven ekstracellulær matrix innskudd, nekrose og eventuell funksjonen tap følger inflammatorisk fornærmelser bidra til bredt spekter av leverskader tilknyttet alkoholfrie fatty leversykdom ^16,17,18.

Parallelt med kompromittert WAT og leverfunksjon akkumuleres store arterier lipider i arterieveggen som kroppen gjennomgår kronisk metabolsk stress¹⁹. Arterial lipid akkumulering utløser utskillelsen av chemokines av aktivert endotelceller og påfølgende rekruttering av monocytter²⁰. Når rekruttert, monocytter sprer, skille, ingest lipoproteiner og bli skum celler. Atherogenesis er initiert og opprettholdes av pro-inflammatoriske aktiviteten rekruttert og vev bosatt lipid-laden makrofager. Succumbing til ekstracellulære og intracellulær stressignaler videreformidlet i denne atherogenic microenvironment, delta disse makrofager deretter i en apoptotisk signalering cascade. Som disse skum cellene dør, bidrar lipid fylt innholdet til nekrotisk kjernen av lesjonen, som så fører til plakk brudd, hjerteinfarkt og hjerneslag.

Kollektivt, orkestrerer heterogeniteten macrophage fenotyper delvis fedme indusert av inflammatoriske endringer observert i dysregulated vev som WAT, lever og aorta^8,21. Karakteristikk av rekruttert og vev bosatt makrofager kan gi innsikt i potensielle molekylære mål som manipulere macrophage fenotypen¹. Effektivt betegner makrofager fra fedme-indusert betent vev, kan en enkeltcelle suspensjon oppnås gjennom enzymatisk fordøyelsen. Slike dissosiasjon protokollene må være effektiv i tilstrekkelig nedverdigende bindevev samtidig minimere immun celledød og gir optimale celle avkastning. Enzym blandingen er avhengig av vev og dens strukturelle utgjør. Robust vev som aorta krever sterkere enzymatisk aktivitet, i forhold til leveren og WAT, å oppnå vev dissosiasjon. Fra enkelt celle suspensjon, kan vev bosatt makrofager utvetydig preget eller isolert for videre nedstrøms analyser som transcriptional profilering.

Her er en vev-spesifikk protokoll beskrevet som collagenase-avhengige vev fordøyelsen og polykromatisk flowcytometri til å effektivt isolere og karakterisere vev-resident makrofager fra tradisjonelt kosthold indusert fedme, aterosklerose, enkel Steatose og steatohepatitis musen modeller. Samtidige farging av cellen overflate markører med antistoffer mot leukocytter-(CD45 og/eller CD11b) og macrophage – (F4/80) bestemt antigener er ofte brukt til å identifisere macrophage bestander²². Fluorescens-aktivert cellen sortering (FACS) er en kraftig strategi brukes sortere populasjonene identifisert på høy renhetsgrad. Sorterte befolkningen kan deretter bli vurdert for fenotypen bestemte genet profiler som bruker nedstrøms molekylær analyse (for eksempel kvantitative sanntid polymerasekjedereaksjons)²³. Selv om standard flowcytometri og flyt cytometri-baserte celle sortering er kraftige verktøy i atskillende makrofager i en svært heterogen celle suspensjon, må tidligere protokollene være optimalisert for å sikre vellykket utgang. I denne studien beskrevet som effektivt isolere og karakterisere levedyktig vev bestemt makrofager; enda viktigere, gir denne studien viktig innsikt i tekniske problemer som ofte oppstår, og proaktiv og feilsøking strategier for å hindre og/eller løses.