Existen varias olas sucesivas pero superpuestas de progenitores hematopoyéticos durante el desarrollo cuya progenie mieloide permanece en la edad adulta. En primer lugar, los progenitores "primitivos" unipotentes emergen en el saco de yema de ratón ^{1 , 2} entre E7.5-E8.25 y dan lugar a macrófagos embrionarios sin ningún intermediario monocítico. Si los macrófagos derivados de progenitores primitivos persisten en el cerebro adulto como microglia sigue siendo un sujeto de investigación activa. En segundo lugar, Erythro-Myeloid precursores (EMPs) surgen en el saco vitelino en E8.5, entrar en el torrente sanguíneo y colonizar el embrión. EMP emerjan de la vaina vitelino endotelio hemogénico en un Runx1 dependiente de la transición endotelial a hematopoyética ^{3 , 4} . Mientras EMP puede diferenciarse en macrófagos dentro del saco vitelino, también colonizar el hígado fetal de día embrionario (E) 9 ⁵ y differenEn eritrocitos, megacariocitos, macrófagos, monocitos granulocitos y mastocitos [ ^6] . Los macrófagos que derivan de las PEM exhiben capacidad proliferativa en tejidos adultos y de desarrollo. Si los macrófagos derivados de EMP pasan por alto la etapa de diferenciación de los monocitos sigue siendo controvertido, ya que se sabe muy poco sobre su vía de diferenciación ^{7 , 8} . Finalmente, las células madre hematopoyéticas (HSCs) emergen a E10.5 dentro del embrión propio de la región aorta-gonad-mesonefros y migran al hígado fetal. Los HSC con capacidad de repoblación a largo plazo sólo se detectan después de E11 (en el estadio de 42 somites) ⁹ . Allí, se expanden y se diferencian de E12.5 hasta que la hematopoyesis definitiva comienza a desplazarse a la médula ósea, que se convierte en el sitio predominante de la producción de células sanguíneas durante la vida postnatal ¹⁰ .

El SPLa superposición temporal y temporal en la aparición, así como los marcadores inmuno-fenotípicos compartidos, han obstaculizado hasta ahora nuestra capacidad para distinguir las contribuciones específicas de estas ondas de progenitores hematopoyéticos embrionarios. Mientras tanto EMP y HSC se generan de una manera dependiente de Runx1 y expresan el factor de transcripción Myb y el receptor del factor de crecimiento Csf1r (Receptor del Factor Estimulador de Colonia 1, también conocido como Receptor de Factor Estimulador de Colonias de Macrófagos) entre otros, los EMPs pueden distinguirse de HSCs por su falta de potencial linfoide, tanto in vitro e in vivo , su falta de repoblación a largo plazo potencial y la falta de expresión superficial de la línea Sca-1 ¹¹ . Modelos genéticos de cartografía de destino son necesarios para caracterizar la ontogenia de macrófagos, ya que permiten la orientación de progenitores embrionarios en una célula específica y tiempo específico. Aquí presentamos el protocolo de asignación de destino utilizado en nuestro laboratorio para discriminar entre los dos linajesS de macrófagos que se encuentran en la mayoría de los tejidos adultos: macrófagos infiltrantes derivados de HSC y macrófagos residentes independientes de HSC.

Macrófagos residentes de tejidos se han rastreado a Myb-células precursoras independientes que expresan el receptor de citoquinas Csf1r ¹² y están presentes en el embrión en E8.5-E10.5 utilizando tres complementarias estrategias de cartografía de destino [ ^6] . Con el fin de estudiar la hematopoyesis de saco vitelino sin etiquetar HSC fetal, utilizamos una cepa transgénica, Csf1r ^MeriCreMer , que expresa una proteína de fusión inducible por el tamoxifeno de recombinación Cre mejorada y dos receptores de estrógenos de ratón (Mer-iCre-Mer) bajo el control de El promotor Csf1r. Por tanto, la recombinasa Cre estará activa en células que expresan Csf1r durante un intervalo de tiempo limitado. Cuando se utiliza con una cepa informadora que contiene una proteína fluorescente corriente abajo de un casete lox-STOP-lox (Rosa26 ^LSL-eYFP ), dará lugar a la permanenciaEtiquetado genético de las células presentes en el momento de la inducción, pero también de su progenie. La administración en E8.5 de la forma activa de tamoxifeno, 4-hidroxitamoxifeno (OH-TAM), etiqueta EMPs y macrófagos, sin etiquetar progenitores "primitivos" unipotentes de saco vitelino o HSCs fetales. Por lo tanto, hemos caracterizado el inmunofenotipo de EMPs y su progenie durante el desarrollo embrionario, así como evaluado la contribución de los macrófagos derivados del saco vitelino a las piscinas de macrófagos adultos. Se requiere trabajo adicional para caracterizar si los macrófagos derivados de progenitores primitivos también se etiquetan utilizando este enfoque y si pueden contribuir a piscinas de macrófagos para adultos.