Сетчатки расположен на задней части глаз функции как легкие сенсорные ткани и человека играет решающую роль в восприятии видение. Сетчатки клетки дисфункции или смерть клетки поэтому вызывает проблемы со зрением или причинения постоянной слепоты. Расстройств, связанных с дегенерацией или дисфункции клеток в разных слоях сетчатки известны как дегенеративные заболевания сетчатки, среди которых AMD является наиболее распространенным типом и ведущей причиной необратимой слепоте в пожилых людей в развитых странах ^1,2. Патологический процесс AMD связан с накоплением «друз» между слоем ПЭС и мембраны Бруха-основной, который в свою очередь ухудшает НПП поддержку фоторецепторных физиологии, ведущих к нейронных атрофии сетчатки и зрение потери^{3, 4,5}. До сих пор, нет никакого лечения для продвинутых сухие AMD (не неоваскулярной). Появление терапия стволовой клетки как новой парадигмы в регенеративной медицине приносит надежду замены неблагополучных или мертвые клетки НПП стволовых клеток здоровые клетки. Действительно, обширные доклинические исследования пересадки стволовых клеток (например, эмбриональных стволовых клеток человека)-производных НПП клетки в ПЭС дегенеративных Животные модели были выполненных^6,7, некоторые из которых достигли Клинические испытания^8,9 (NCT01344993, ClinicalTrials.gov). Недавно альтернативный источник стволовых клеток-резидентов в слое человека ПЭС, стволовые клетки человека ПЭС (hRPESCs), была выявлена нашей лаборатории и в настоящее время используется в доклинических исследованиях hRPESC производные НПП клеток (hRPESC ПЭС) трансплантации терапии для AMD ^{10 , 11 , 12 , 13}.

Субретинальное инъекций техника применяется в доклинических исследованиях, упомянутые выше, несколько групп, в том числе нашей группы. Существует два общих подхода для субретинальное инъекций в животных: Транс vitreal и транс склеры. Транс vitreal подход имеет то преимущество, хирурга, возможность непосредственно наблюдать за конец иглы он проникает передней глаз, пересекает всю vitreal полости, прилегающей к объективу и проникает сетчатки на спине для глаз, чтобы добраться до subretinal пространство^14,,1516. Однако это требует подрыва сетчатки в двух местах (передняя и задняя), несет риск повреждения объектива и может привести к обратным клеток в стекловидное тело при отзыве иглы. В противоположность этому транс склера подход, в принципе, избегает участия сетчатки и стекловидного тела, и обратный поток выходит из глаз. В пигментированных грызунов хирург может первоначально наблюдать проникновения склеры, но после прохождения в пигментированных хориоидея, больше не виден конец иглы. Без прямого наблюдения нарушение сетчатки является общим и может привести к сетчатки диссекции и доставки клеток и/или крови в стекловидное тело. Кроме того потому что изогнутые поверхности глаза, это очень трудно понять, какие иглы углах и глубинах являются наиболее эффективными для транс склеры инъекции.

В этой статье визуализировать мы представляем транс склеры субретинальное инъекционный метод сообщил использования послеоперационные оценки с оптическая когерентная томография (OCT), которая позволяет подробный анализ укола. Наша техника транс склеры инъекции использует определенные места, углов и глубины для инъекций иглами производить очень низкой хирургической травмы и высокой надежностью. Здесь мы конкретно продемонстрировать инъекции клеток hRPESC НПП в пространство субретинальное крыс RCS, доклинические модель человеческих драм. С этим методом инъекций мы успешно и последовательно доставлены hRPESC НПП клетки в субретинальное пространство глаза крыс RCS с очень высокий уровень успеха. Инъекции клеток ранее было установлено, приведет к сохранению RCS фоторецепторов по крайней мере 2 месяца после инъекции¹³. Эта процедура выполняется под микроскопом рассечения и легко учиться. Он требует двух человек (хирурга и ассистента) для выполнения инъекции и среднее время впрыска для каждого животного составляет менее чем за 5 минут. Определенных углах и глубинах для инъекций иглы позволяют для лабораторий, где OCT недоступна, для достижения успешного субретинальное инъекций. Он обеспечивает высокую воспроизводимость субретинальное доступа и может использоваться не только для трансплантации клеток, но и для доставки и генной терапии наркотиков.