바다 표면에 microplastics 샘플링, 입자의 microplastic 화학적 식별의 분리 : 프로토콜은 아래의 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 해양 쓰레기에 MSFD 기술 하위 그룹에 의해 출판 microplastics 모니터링을위한 권고와 일치한다.
Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of scientific publications address microplastic pollution of the sea surface. The protocol below describes the methodology for sampling, sample preparation, separation and chemical identification of microplastic particles. A manta net fixed on an »A frame« attached to the side of the vessel was used for sampling. Microplastic particles caught in the cod end of the net were separated from samples by visual identification and use of stereomicroscopes. Particles were analyzed for their size using an image analysis program and for their chemical structure using ATR-FTIR and micro FTIR spectroscopy. The described protocol is in line with recommendations for microplastics monitoring published by the Marine Strategy Framework Directive (MSFD) Technical Subgroup on Marine Litter. This written protocol with video guide will support the work of researchers that deal with microplastics monitoring all over the world.
Microplastic pollution in the sea represents a growing concern to contemporary society, due to the constant increase in plastic production and its subsequent disposal and accumulation in the marine environment1. Even if plastic macro litter would no longer enter the seas, microplastic pollution would continue to grow due to fragmentation of already existing plastic litter in the sea2. The majority of microplastic pollution studies were carried out in marine and fresh water ecosystems and mainly addressed sea surface pollution3.
The term microplastic refers to plastic particles smaller than 5 mm in size4. This term describes a heterogeneous mixture of particles, which can differ in size (from a few microns to several millimeters), color and shape (from very different shapes of fragments to long fibers). Microplastic particles can be of a primary or secondary origin5. Microplastic of primary origin is manufactured as small particles used in the cosmetics industry (pilling crème etc.) or chemical industry as precursor for other plastic products (e.g. plastic pellets used in plastic industry). Microplastic of secondary origin arise via the degradation of larger plastic pieces in the environment due to physical and chemical processes, induced by light, heat, oxygen, water and organisms6. In 2015, four types of microplastic sources were defined: larger plastic litter, cleaning products, medicines and textiles6. The main source (80 %) of larger plastic litter is assumed to be land based7. Microplastic from cosmetic products, medicines and textile enters water ecosystems through sewage and storm waters6. Microplastic particles most frequently found in water ecosystems are fragments from larger plastic litter and textile fibers8.
Microplastics have several negative effects on the environment. Their small size allows them to enter the food web through ingestion by marine organisms9, 10. Ingested particles can cause physical damage or block the digestive system of animals11. Particles can also be carriers of persistent organic pollutants (POPs). Their hydrophobic surface and favorable ratio of large surface area to small volume, enables POPs to adsorb onto the microplastics12. In the environment or digestive systems of animals who ingest them, POPs and other plastic additives can be leached from microplastic particles13.
Previous studies reported the ubiquitous presence of microplastics in the marine environment3, from the water column to the bottom sediments. The threat of microplastic pollution was already identified by the Marine Strategy Framework Directive in the EU and, consequently, mandatory monitoring of microplastics was advised14. Accordingly, the EU Technical Subgroup on Marine Litter (TSG-ML) prepared recommendations for monitoring of microplastics in the European seas15. Thus, the video guidelines for microplastics sampling are of high importance, as they support comparative monitoring and a coherent management process all over the world.
This protocol was developed within the DeFishGear project for the first monitoring of microplastic pollution in the Adriatic Sea. Recommendations from the document “Guidance on Monitoring of Marine Litter in European Seas” by TSG-ML15 were taken into account. This protocol describes the methodology for microplastics sampling on the sea surface, separation of microplastics from the samples, and chemical analysis of microplastic particles to confirm that particles are from plastic material and to identify the type of plastic. Sampling was done by the use of a manta net, which is the most suitable equipment for sampling in calm waters16. Separation of microplastics from the samples was carried out by visual identification using a stereomicroscope. Isolated particles were later chemically identified using Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopy and micro FTIR spectroscopy.
타 그물로 바다 표면에 Microplastics 샘플링은 바다 표면에 microplastics의 샘플링을 위해 널리 사용되는 방법이지만 날짜에 더 통일 된 방법이 없었다. 많은 양의 물은 망 만타 통해 여과 될 수있다 따라서 microplastics의 해당 번호를 포착 할 가능성이 높고, 그 결과는 신뢰성있는 것으로 인식된다. 다른 샘플 중 결과의 비교는 정규화에 의해 보장된다. 우리의 경우, 농도는 순 개구의 가로 폭 트롤 거리를 곱하여 샘플 영역에 관련되었다. 또 다른 옵션은 넷 개구부에 고정 된 유량계를 사용하는 것이다. 그 측면 날개 만타 그물 바다 표면에 매우 안정하고, 따라서 파동의 호핑 최소이므로 유량계의 사용이 가능하다. 유량계 여과 물의 부피를 기록함으로써 샘플링 된 물 (16)의 체적 당 결과의 정규화를 가능하게한다.
<p class="jove_content">는 자주 사용 만타 그물 약 300 ㎛의 메쉬 크기를 갖고있는 3 – 4.5 m 길이. 이러한 치수는 네트의 막힘을 방지하고, 가능한 한 큰 물 부피를 샘플링 할 수 있도록 최적화되었다. 트롤 어업 속도는 2 사이가 될 것을 권장합니다 – 3 노트하지만, 파고, 풍속과 바다 전류에 따라 달라집니다. 만타 그물 감독하에 샘플링 동안 전체 시간하는 것이 매우 중요하고 호핑 시작되면, 트롤 어업 속도는 감소되어야한다. 트롤 어업 시간은 약 30 분으로 권장하지만, seston 농도에 따라 결정된다. seston 때로는 타 그물을 막 신 것을 발생할 수 있습니다. 이 경우 저인망 즉시 중단되어야 달리 microplastic 입자가 손실 될 수 있고, 넷은 손상받을 수있다. 타 망은 자주 용기의 측으로부터 고정이다. 만타 그물 후류 영역에서 확실히 동안이, 또한 가장 적합한 옵션입니다. 일부 조사에서는 만타 그물은 선박의 선미에서 고정17, 18,하지만 당신은 그물이 후류 영역에서 있는지 확인해야하는 경우입니다. 용기에 의한 난류의 영역이 상기 용기의 크기와 상기 보트 (19), (20)의 속도의 변화 때문에 트롤이 샘플링에 대해 설정되는 간격은 개별적으로 결정되어야한다.바다 표면 샘플에서 microplastic 입자의 분리는 대부분 시각적 식별 (21)에 의해 바로 이루어집니다. 1mm보다 작은 입자는 실체의 사용을 필요로하면서 큰 1mm 이상의 입자를 육안으로 쉽게 식별 할 수있다. 실체 현미경의 편광을 이용하여, 플라스틱 사람과 비 플라스틱 입자를 혼동의 가능성을 줄이기 위해 권장합니다. 플라스틱 입자의 오인의 가능성은 작은 입자와 높은 가져옵니다. 따라서 입자> 0.5 mm는 실체 현미경을 사용하여 시각적으로 확인 (21) 할 수있다. 0.5 mm보다 작은 입자추가로,보다 정확한 방법은 예를 들어 마이크로 ATR-FTIR 분광기 (21)가 필요합니다.
샘플로부터 microplastics 분리하는 과정에서 부유 필라멘트 샘플 오염의 가능성이 매우 높다. 이 때문에, 작업 테이블에 열려 배양 접시를 제어하는 강력한 잠재적 인 오염 공기 입자의 식별을 위해 사용하는 것이 좋습니다. 즉, 데이터의 품질 강하게 의존 1) 샘플 16 샘플 2) 품질과 입체의 배율 및 유기물 3) 양의 작업을하는 사람의 정밀도. 시각적 식별 후에 강하게 재료 (8)의 화학 식별 가능한 방법 중 하나에 정렬 된 입자를 분석하는 것을 권장한다.
여러 가지 방법 중 어느 FTIR 스펙트럼과 라만 분광법 가장 FREQUEN은 중합체 식별 존재TLY (22)을 사용했다. FTIR과 라만 분광법은 상호 보완적인 기술이며, 그 정확도는 비슷합니다. 우리의 프로토콜에서 "감쇠 총 반사율"(ATR)와 FTIR 및 마이크로 FTIR 스펙트럼이되게됩니다. 그들은 사용하기 간단하고 빠르고 정확한 결과를 가능하게한다. 플라스틱 폴리머 따라서 IR이 microplastics (21)의 식별을위한 최적의 기술을 분광법 만드는 독특한 밴드 패턴이 매우 특정 적외선 (IR) 스펙트럼을 갖는다. IR 스펙트럼 특성 (22)의 측정을 가능하게하는 샘플과 상호 작용할 때 IR 방사선의 에너지는 특정 분자의 진동을 여기시킨다. FTIR 스펙트럼은 또한 산화 분해 및 23의 24 단계의 강도 등의 입자에 대한 추가적인 정보를 제공 할 수있다. ATR-FTIR 큰 입자의 화학적 식별 (> 0.5 mm)에 적합한 반면, 마이크로 ATR-FTIR 분광기 # 입자의 화학 구조에 대한 정보를 제공 할 수있다60 0.5 mm, 그것이 현미경 적외선 분광기의 기능을 겸비한있다.
물이 강한 IR 방사선 (22), 정제를 흡수 이후 FTIR 마이크로 FTIR 분광기를 사용하기 전에 microplastic 입자 경우들이 IR 스펙트럼에 영향을 미칠 수있는 바이오 필름 및 / 또는 다른 유기 및 무기의 부착물로 피복되는, 이전에 건조한다. 샘플을 정화하는 가장 비 침습적 방법은 교반 및 담수 (25)와 린스입니다. 이 충분하지 않은 경우, 30 %의 과산화수소를 사용하는 것이 바람직합니다. 다른 모든 방법이 부정적인 microplastic 입자에 대한 영향 (예 : 더 입자를 깰 수 초음파 세척, 강한 산성 또는 알칼리성 용액 등 여러 가지 플라스틱 폴리머를 손상시킬 수 있습니다) 따라서 그 사용하지 않는 것이 좋습니다을 가질 수 있습니다. 유망한 플라스틱 친화 정제 단계와 같은 일련의 소화 효소의 사용이다. 정제 다른 기술 효소를 사용하여 (예 : 리파제하는mylase, 테가 키틴은 셀룰라아제는 테-K)는 성공적 플랑크톤 생물학적 매트릭스를 감소시키고 따라서 FTIR 분광학 측정 22 중 매트릭스 아티팩트를 최소화하기위한 유용한 기술로 입증 적용되었다.
시각적 식별 및 선택 입자의 화학 식별하여 microplastics의 분리는 모두 매우 시간이 많이 소요되는 프로세스입니다. 이 작품은 플라스틱 입자를 인식에서뿐만 아니라, 생물학적 문제를 인식에서뿐만 아니라 실체 현미경과 경험을 가지고 정확하고 환자 개인에 의해 수행되어야한다. 심지어 경험이 풍부한 사람은 키틴 또는 규조류 조각 (22)에서 명확하게 모든 잠재적 microplastic 입자를 구별 할 수 없습니다. 따라서, 시각적 인 정렬 에러 레이트 20 % 26 70 % 21 범위 및 입자 크기 감소와 함께 증가한다.
The authors have nothing to disclose.
이 프로토콜의 개발은 DeFishGear 프로젝트 (1 ° STR / 00010)에서, IPA 아드리아 국경 간 협력 프로그램 2007-2013에 의해 설립되었다.