リビジョン人工で新規診断: 超音波処理と多重ポリメラーゼの連鎖反応のインプラント

本研究は倫理委員会 (046/09 牧師 3) によって承認されました。インフォームド コンセントおよびデータのプライバシーに関する声明は、含まれているすべての患者から得られました。 1. 関節穿刺 メモ: 手順は、手術劇場または匹敵する無菌条件で介入ルームで行わなければなりません。看護師による支援や医師の支援は役立ちますが、必須ではありません。 診察用ベッドに仰臥位で患者を置きます。関心の接合部は衣類の無料を確認します。電気バリカンを使用して密なまたは長い体毛を短きます。かみそりで体毛を削除しないでください。パンクする場合は股関節は、前後方向の透視装置を配置します。膝がパンクする場合、膝はわずかに屈曲位置13にかかっていることなど患者さんの膝の下で膝のロールを配置します。 下記の滅菌機器の計測器表を準備: 滅菌綿棒、滅菌カバーの穴あきドレープ、使い捨て滅菌メス、尖った外科ブレード (#11 型)、および滅菌カニューレ (20 ゲージ, 80 mm) を 10 mL の滅菌注射器。アルコールの皮膚消毒、採血管、小児血液培養用フラスコを個別に設定します。 手術ガウン、フード、マスク、ドレスし、滅菌手袋をつけます。 皮膚の消毒剤と穿刺部位 (例えば優れた関節14股関節膝と前外側のポータル エリアに対して) で患者の皮膚を洗います。メモ: 気に使用される消毒剤の必要な露光時間 (通常 90 膝、120 s アルコール消毒用ヒップで s)。 穴あき滅菌カバー ドレープで穿刺部位をカバーしてください。穿刺部位を特定します。注: 膝の正しいサイト上部膝蓋骨ポールと横面に 2 cm 横 2 cm です。ヒップ、上前腸骨棘を見つけるし、上部の恥骨まで行尾側に移動します。サイトである (約 4 cm)、大腿動脈の外側15触診できる常にことを確認します。 穿刺部位で先のとがったメス刃 (3-4 mm 幅と深さ) 皮膚切開小さな刺し傷を作る。局所麻酔薬は静菌効果により、微生物の培養の偽陰性を引き起こす可能性があります適用されません。 注射器の Luer のスリップにカニューレを接続します。刺し切開カニューレを挿入します。膝関節の優れた凹部で背側と内側、膝蓋骨の上部のポール下凹部に向けて 45 ° の角度で目指して、注射器のピストンを引いて関節液、奥行きの約 5 cm 吸引針を挿入します。 股関節に穴をあけるときは、透視ガイドを使用してください。60 ° の角度で内側に向けて穿刺部位に針を挿入します。透視装置、人工首針の先端が指していることを確認します。関節液が達成されるまで、カニューレを吸引しながら深さ約 8 cm (脂肪の患者でより深い) に進みます。人工表面の摩擦を避けるために、吸引しながら、その位置に針を保持します。メモ: 義足と針先との接触は、関節位置を確認します。股関節液 5 mL 以上が吸気のフォームをすることができます通常、膝継手は、10 mL 以上になります。 カニューレを除去した後に、刺し切開する滅菌創傷包帯を適用します。血腫の形成を防ぐためには、わずかな圧縮と脚に包帯を適用します。 サンプル容器に集めた共同吸引を転送します。滅菌作業技能を確認します。 吸気の関節液の小児血液培養用フラスコの接種、アルコール消毒剤と小児血液培養用フラスコの膜を消毒します。注射器に新鮮なカニューレを置くし、血液培養用フラスコに吸気の関節液の 1 に 3 mL を注入します。穏やかな動揺または回転16ミックスします。 ネイティブ共同吸引試料の調製、注射器からカニューレを削除します。添加物なし、採血管を開き、このコレクション チューブに吸引の 1 mL を注入します。交換し、pcr のためのふたを留めます。メモ: は、PCR 解析に遅れることがなく微生物学研究室にサンプルを同梱します。従来の微生物学的好気性と嫌気性の文化は、同じサンプルから17を設定できます。 セル数と分化2EDTA を含む、採血管に共同の吸引の 1 に 4 mL を転送します。遅延なしの生化学研究室にサンプルを出荷します。 2. PCR 診断 (、Lysator、アナライザー、およびコックピット; 材料の表を参照してください) すべての 3 つのデバイスが正しく起動していることを確認します。作業ベンチ (PCR カートリッジ、マスター ミックス チューブ、サンプル チューブとサンプル チューブ キャップ、0 – 200 μ L ピペットと滅菌ピペット チップ) のテストを実行するために必要なすべての物資を設定します。 室温設定することにより、手順を開始する前にマスター ミックス チューブを解凍してください。(マスター ミックス チューブ、カートリッジ、およびサンプル チューブ) 全ての消耗品は、既にバーコード付き prelabeled します。 サンプル チューブのキャップを取り外します。収集した標本 (共同吸引、セクション 1; を参照または超音波処理液、セクション 4 を参照) の 180 μ L を取るピペットと転送サンプルにはチューブします。プロテインキナーゼ K とワークフロー全体の品質管理のための内部統制遺伝子を含むサンプル チューブ キャップ付きサンプル チューブを閉じます。 「新テスト」に触れることによりオペレーティング ソフトウェアを開き、コックピットを左下隅にあるボタン。タッチ スクリーンを介して患者のデータまたはサンプル ID を入力します。試料を選択するには、最初ドロップダウン リスト、アプリケーション モードとして、「整形」から「ITI カートリッジ」を選択、最後にサンプルの種類として「滑液」または「超音波流体」を選択。開始ボタンを押します。 サンプル チューブの下部のバーコードをスキャンします。Lysator にサンプル チューブを挿入します。注: 溶解プロセスが自動的に起動し、終了する約 30 分を取る。Lysator 画面にタイマーのカウント ダウンが、溶解したらわかります。 サンプル チューブ、lysator からのロックを解除するコックピット画面でサンプルを選択します。Lysator からサンプル チューブを外し、lysator の上面カバーを閉じます。PCR カートリッジのサンプル チューブ スロットにサンプル チューブを転送します。PCR カートリッジのマスター ミックス スロットに吉濱マスター ミックス チューブを挿入します。 コックピットのモニター、マスター ミックスとサンプル チューブと PCR カートリッジをスキャンの指示に従います。 アナライザーの表示されたカートリッジ スロットに PCR のカートリッジを挿入します。終わったらにすると、アナライザーはカートリッジを解放します。注: PCR 条件の製造元によって事前設定され、ユーザーが変更することはできません。詳細については、製造元のアプリケーション ガイドを参照してください。PCR プロセスは自動的に開始し、約 4 時間 10 分を取る。 取り外してカートリッジを廃棄します。コックピットのタッチ スクリーンで左下隅で「現在のテスト」を選択し、テスト結果を表示する適切なサンプル ID を選択します。結果をコンピューターのメモリに保存し印刷またはさらに参考のため (USB ドライブ) 経由でエクスポートします。注: は、病原体の同定と遅滞なく外科医への抵抗性マーカーの検出を含む PCR の結果を報告します。細菌や真菌性の病原体の 114 のデオキシリボ核酸 (DNA) ターゲットを持つパネルは通常インプラント感染症、軟部組織感染症に見られる最も一般的な抗生物質耐性マーカーと一緒に分析されます。 3. 手術: 術中のサンプル コレクション 注: 人工関節置換術を専門家レベルの技術と専門的知識が必要です。外科手術の包括的な概要については、外科医の教科書18を参照してください。手術の完全かつ詳細な説明はこの記事の範囲をはるかに超えるでしょう。ここで、焦点はサンプルの収集、事前解析の詳細です。人工関節置換術、手術中に得られた微生物学的試料の結果を損なわないように、単一ショットの抗生の管理を控えます。このような行為は物議を醸す19、20、この規則を遵守することをお勧めします。可能な限り関節手術アプローチは既存を使用します。追加の外科的アプローチは、軟部組織を危険にさらす、瘢痕形成を増加します。 関節包がよく露出するまで組織を解剖します。切開を行う準備で注射器で注射の詳細な分析 (手順 1.7.1-1.7.3) 上記のように、さらに関節液を収集できます。注: 消毒洗浄液する必要がありますないまで使用インプラントは削除され、組織サンプルがとられています。 関節インプラントを削除します。除去した後すぐに空気と水タイトなふた付け滅菌プラスチック容器にインプラント部品を転送します。注: インプラントの除去のための詳細な手順については、教科書の文学で見つけることが (例えば膝: ・ ウィルツら、章 16.421;ヒップ、例えば: クレスら、章 14.5.122)。特定の楽器製造業者の指示によって示されるように、必要がある可能性があります。インプラント除去技術は、異なるインプラントの種類と固定方法のかなり異なります。ノミ ・ ドリル、スライディング ハンマー普遍的な髄内ネイル除去セットのセットは骨統合インプラント23,24の除去に便利です。 インプラント ・骨界面から膜組織を除去するのに滅菌鋭いキュレット、鉗子、rongeur を使用します。微生物学および組織学の標本としてのネジふた付け滅菌プラスチック容器に組織の代表的なサンプルを転送します。注: すべての軟部組織の髄腔をオフにリーマを使用できます。また、滑膜組織を取り、検査のため関節のカプセルのサンプル、滅菌容器に保管します。合計では、少なくとも 4 つの標本を収集する必要があります。 すべてのサンプルおよび器官培養切片部分を微生物学研究室に即座に送信します。注: 抗生物質を与えすることができます。正しい抗生物質の選択が不可欠であると、個別決定25,26をする必要があります。治療の概念はの事前外科医と微生物学者の学際的なパネルによって決定する必要があります。 破片の兆候を示して任意の組織を削除することにより元のインプラント サイトのデブリドマンを完了 (ポリエチレンの摩耗など金属やセメント粒子) 感染症や壊死 (化膿性, 無血管である, フィブリン被覆、膜または「ドロドロ」組織)。デッド ・ オア ・ osteitic 骨を削除します。ネジ、ワイヤー、cerclages、骨セメントの破片や非吸収性縫合糸 (クレスら、章 14.5.322参照) などすべての異物を除去します。 50 mL の注射器を使用して好みの傷の消毒剤を使用して手術部位に水を引きます。リンゲル液パルス洗浄システムの十分な量 (少なくとも 3 L) の水を引きます。スペーサー ジョイント27を安定させる必要があります。 カプセルまたは筋膜 (編みこみ polyglactin 縫合、トリクロサン コーティング、USP 2)、および皮下組織 (編みこみ polyglactin 縫合、トリクロサン コーティング、USP 0) 抗菌コーティング吸収性深部縫合糸を使用して傷を閉じます。非吸収縫合 (monofilic ポリプロピレン、USP 0 または USP 2-0) を使用して皮膚を閉じます。 4. 超音波処理 注: 厳密に無菌動作するように気をつけてください。Explanted 材料のさらなる処理のため層流気流をクラス II バイオのベンチを使用します。 Explanted 義足手術室からを保持しているプラスチック製の容器を開く (3.2 を参照) 空気の層流流れ作業ベンチの下、滅菌 0.9% 塩化ナトリウム溶液 explanted 異物までカバーの少なくとも 80% (約 500 800 mL) を追加。 プラスチックのコンテナーを閉じます。徹底的に振るか超音波風呂へ 30 s. 転写プラスチック容器のため高強度で渦のミキサーを使用してプラスチック容器を攪拌します。超音波風呂の流体のレベルをチェックします。注: 超音波風呂流体レベルとプラスチック容器の内部と同じでなければなりません。プラスチックの容器が殺到することはできませんし、必要な追加または超音波風呂から液体を削除するかどうかを確認します。 40 ± 2 kHz とパワー密度 0.22 ± 0.04 W/cm2の周波数と 5 分のための供試体の超音波照射します。手ふれや渦 30 の標本を徹底的に s。注: 1-5 分間超音波処理時間の細菌生存率28の影響を受けず、バイオ フィルムを溶解に最適です。 層流ベンチ内超音波処理液 50 mL を収集し、滅菌、堅く密封管にそれを転送します。 集中された超音波処理液を作成するには、4,200 x g. 残して残留量 10 mL で 10 分間のチューブを遠心分離、ピペットと残りの上清を破棄します。ピペッティング、ボルテックスでペレットを再懸濁します。 (例えば血液寒天培地、チョコレート寒天培地、サブロー寒天培地、Schaedler の寒天、カナマイシン バンコマイシン寒天またはチオグリコ レート培地) の適切な文化メディア集中超音波処理液各 0.5 ml を接種します。前述のように小児血液培養用フラスコ 2 ml を接種する (手順 1.7.1 参照)。PCR 分析のため添加物なし、採血管に集中超音波処理液 1 mL を移します。 接種した培地を (35 ° C、5% CO2) インキュベーターに転送します。14 日間文化をインキュベートして毎日の成長をチェックします。 14 日後の成長と負の値としてレポート文化を破棄します。成長が検出された場合は、標準的な識別技術と感受性試験を用いた病原体同定を行います。遅滞なく外科医に結果を報告します。注: ここでは、病原体の同定を行ったマトリックス支援レーザー desorbtion/イオン化法を用いた分光法 (MALDI tof) の時間 -。半自動アナライザー29,30,31抗菌薬感受性試験を行った.