Monoklonala antikroppar (mAb) är bioterapeutiska proteiner med ökande intresse på grund av deras förmåga att agera mot flera kroniska och degenerativa sjukdomar ^1. Liksom andra biomolekyler, mAbs är benägna att genomgå flera fysikalisk-kemiska modifieringar på alla stadier av deras livscykel (dvs. från biosyntesen till slutprodukten). Sådana modifieringar innefattar, men är inte begränsade till: deamidering, glykosylering, oxidation, cyklisering, isomerisering, aggregering och proteolytisk klyvning ^2. Därför är analytiska tekniker kapabla att lösa inneboende isoformer behövs för att övervaka mAbs heterogenitet och stabilitet för att fastställa kvalitetsspecifikationer.

Kapillärelektrofores (CE) är en högpresterande separationsteknik genom outinside av en smal kvartsröret (um intervall) fylld med en bakgrund elektrolyt (BGE). Vid applicering av ett elektriskt fält (upp till 30000 V), laddad molekyls migrerar mot elektroden med motsatt laddning (dvs elektrodrivna separation). Användningen av höga spänningar i CE tillåter snabba analyser och ökad effektivitet, som är överlägsna klassisk gelelektrofores. Kapillärzonelektrofores (CZE) är en CE-baserad teknik som rutinmässigt används inom den biofarmaceutiska industrin för bedömning produktkvalitet ^3-9. Till skillnad från andra typer av CE (t.ex. kapillär gelelektrofores, kapillär isoelektrisk fokusering) eller kromatografi baserade metoder kan CZE genomföras utan användning av denatureringsmedel eller fast fas-gränssnitt, vilket möjliggör analys av den inneboende heterogenitet mAbs nära deras naturliga tillstånd ¹⁰ . CZE separation av mAb isoformer sker inuti en kvarts kapillär täckt med en hydrofil polymer (neutral kapillär) och är baserad på deras olika elektroforetisk mobilitet, som styrs av kostnad, vikt, storlek och form (eller hydrodynamiska volym) ^11. mAb delar upptäcks närde är mobiliserade och passerar genom detekteringsfönstret, vilket avkänns av en ultraviolett (UV) absorbans-detektor vid 214 nm ^4.

Ett framgångsrikt genomförande av denna analysteknik kommer att bero på riktig uppmärksamhet på detaljer före och under försöket. Agerar annars kommer att öka kostnaderna och tiden för att genomföra analysen, vilket slutligen leder till konstant misslyckande och frustration.

Här presenterar vi en steg-för-steg-guide för att genomföra en framgångsrik analys av mAb heterogenitet genom CZE genom detaljerad förklaring av beredning av lösningar och prover, framställning av CE-system, instrumentet metoder som inrättats, datainsamling, och bearbetningen. Vid tillämpningen av denna handledning, en rekombinant helt human anti-tumor necrosis factor alfa (anti-TNF) mAb användes som proteinmodell; dock kan detta protokoll enkelt anpassas för analys av andra proteiner överväger korta ändringar. endditionally, flera rekommendationer mildra eventuella problem föreslås. Läsaren uppmanas att strikt följa det föreslagna protokollet, som sannolikheten att lyckas ökar.