Monoklonale antistoffer (mAbs) er bioterapeutiske proteiner med økende interesse på grunn av deres evne til å handle mot flere kroniske og degenerative sykdommer ^1. Som andre biomolekyler, mAbs er tilbøyelige til å gjennomgå flere fysiske endringer i alle faser av sin livssyklus (dvs. fra biosyntese til det endelige produktet). Slike modifikasjoner innbefatter, men er ikke begrenset til: deamidering, glykosylering, oksidasjon, cyklisering, isomerisering, aggregering og proteolytisk spaltning ^to. Derfor blir analytiske teknikker som er i stand til å løse iboende isoformer nødvendig for å overvåke mAb'ene heterogenitet og stabilitet for å kunne etablere kvalitetsspesifikasjoner.

Kapillær elektroforese (CE) er en høy ytelse separasjonsteknologi gjennomført outinside av en smal smeltet Silica tube (mikrometer utvalg) fylt med bakgrunn elektrolytt (BGE). Ved påføring av et elektrisk felt (opp til 30 000 V), ladet molekyls migrerer mot elektroden med motsatt ladning (dvs. elektro-drevet separasjon). Bruken av høye spenninger i CE tillater raske analyser og økt effektivitet, som er bedre enn klassisk gel elektroforese. Kapillær sone elektroforese (CZE) er et CE-basert teknikk rutinemessig brukt i biofarmasøytiske industrien for produktet kvalitetsvurdering ^3-9. I motsetning til andre former for CE (f.eks kapillær gelelektroforese, kapillar isoelektrisk fokusering) eller kromatografi-baserte metoder, kan CZE bli utført uten bruk av denatureringsmidler eller fastfase-grensesnitt, slik at analysen av den iboende heterogenitet av mAb nær deres opprinnelige tilstand ¹⁰ . CZE separasjon av mAb isoformer forekommer inne i et smeltet silika kapillær dekket med en hydrofil polymer (nøytral kapillar), og er basert på deres ulike elektroforetisk mobilitet, som er styrt av ladning, masse, størrelse og form (eller hydrodynamisk volum) ^11. mAb delene blir oppdaget nårde er mobilisert og passerer gjennom deteksjonsvinduet, som avføles ved hjelp av en ultrafiolett (UV) absorbans-detektor ved 214 nm ^4.

En vellykket gjennomføring av denne analytisk teknikk vil avhenge av riktig hensyn til detaljer før og under forsøket. Fungerende ellers vil øke kostnadene og tid til å gjennomføre analysen, til slutt fører til konstant svikt og frustrasjon.

Her presenterer vi en steg-for-steg guide til å gjennomføre en vellykket analyse av mAb heterogenitet ved CZE gjennom detaljert forklaring av utarbeidelse av løsninger og prøver, utarbeidelse av CE-systemet, instrument metoder satt opp, datainnsamling, og behandlingen. For formålet med denne opplæringen, en rekombinant humant anti-tumor nekrose faktor alfa (anti-TNFa) mAb blir anvendt som protein modell; Men kan denne protokollen enkelt tilpasses for analyse av andre proteiner vurderer korte modifikasjoner. ENdditionally, flere anbefalinger for å redusere potensielle problemer er foreslått. Leseren oppfordres til å strengt følge den foreslåtte protokollen, som sannsynligheten for å lykkes vil øke.