Low-density Primary hippocampus Neuron kultur

Hjärnan är organiserad i intrikata nätverk av nervceller. kan studeras bidraget av enskilda nervceller till nätverksaktivitet och hjärnans funktion genom selektiv förändring av deras molekylära sammansättning och perturbance av deras fysiologiska egenskaper. Genetisk och kemisk manipulation av enskilda nervceller är utan tvekan lättare i odlade nervceller än intakt hjärnvävnad, kompliceras av den senare cellulära heterogenitet och komplexitet. Neuroner i odling utvecklas väldefinierad axonal och dendritiska hållare och bildar omfattande synaptiska anslutningar med varandra.

Medan neuron kultur från vuxna djur eller från andra regioner i nervsystemet är möjlig, är embryonala hippocampusodlingar ofta föredragna på grund av deras definierade pyramidal cellpopulation och relativt låg gliala densitet ^{1, 2.} Hippocampusneuroner odlade vid låg densitet i odling är särskilt ameNable att studiet av subcellulära lokalisering, protein trafficking, neuronal polaritet och synaps utveckling. Neuroner i kultur har också i stor utsträckning använts för att studera molekylära processer i synaptisk plasticitet ^{3, 4, 5, 6.} Neuron kultur preparat från möss med globala genetiska deletioner som inte överlever efter födelsen har varit särskilt användbart för att studera cellulära och synaptiska roller vissa gener ^7.

Såsom i hjärnan, odlade hippocampala neuroner är beroende av trofisk stöd från gliaceller. Detta försvårar deras kultur, och har lett till utvecklingen av flera olika metoder genom vilka detta stöd levereras. En vanligen använd metod inbegriper plätering neuroner direkt på ett monoskikt av gliaceller ^8, eller gör det kontaminerande gliaceller från det förvärvade hippocampal vävnad för att proliferera och bilda ett monoskikt under neuron ^9. Även om denna metod har funnit en viss framgång, är den förorening av den resulterande neuronal kultur ofördelaktigt för avbildning experiment. En annan vanligen använd metod för neuron kultur är att lämna ut gliaceller matarskikt helt och hållet, och istället tillhandahålla trofiskt stöd i form av ett definierat tillväxtmedium ^10.

Här beskriver vi "sandwich" eller "Banker" metod för neuron kultur ^{2, 11.} Denna metod innefattar utstrykning av hippocampala neuroner på täckglas, som sedan är upphängda över ett monoskikt av gliaceller åtskilda av paraffin vaxpärlor. Detta underlättar långvarig odling av en homogen population av nervceller utan att förorena glia samtidigt för trofiska stöd från den underliggande gliaceller monolager. När nervceller är tillräckligt ålder eller mognad,neuron täckglas kan fällas ut av gliaceller skålen och används i avbildning eller funktionella analyser.