sinalização sensorial e percepção da dor é um processo complexo que resulta de uma interação complexa entre os nervos aferentes, neurônios da coluna vertebral, vias ascendentes e descendentes facilitadoras e inibidoras e várias regiões cerebrais diferentes. Como tal, as alterações em um ou mais desses níveis pode resultar na sinalização sensorial alterada e dor visceral em estados de doença. Para estudar todos estes diferentes aspectos da sinalização sensorial várias técnicas têm sido desenvolvidas que varia a partir de experiências individuais de células (por exemplo, imagem de cálcio em neurónios) para modelos animais completos (por exemplo, respostas comportamentais, tais como a resposta visceromotor). A técnica descrita neste artigo permite que os pesquisadores para avaliar especificamente a atividade do nervo aferentes in vitro a partir de um segmento isolado do intestino delgado ou cólon nos roedores. Em suma, um segmento isolado gastrointestinal (geralmente jejuno ou cólon) está montado numa câmara de registo incorporado finalidade perfundido com um K fisiológicosolução Rebs. O nervo esplâncnico é dissecado livre e ligado a um eléctrodo permitir o registo da actividade neuronal aferente dos nervos aferentes esplâncnicos ou pélvicas. Actividade do nervo pode ser gravada ou basalmente em resposta ao aumento das pressões intraluminais e / ou compostos farmacológicos que podem ser aplicadas quer directamente para a câmara de registo (serosally), ou através do perfusato intraluminal (por via mucosa) para avaliar o seu efeito sobre a descarga aferente ^6/1 . De nota, nervos esplâncnicas também conter fibras eferentes e aferentes viscerofugal para além dos aferentes sensoriais. Uma das principais vantagens do ex vivo, a gravação do nervo esplânenico é o facto de os investigadores podem quantificar a actividade do nervo sem modulação ou de entrada a partir do sistema nervoso central, permitindo uma para estudar o efeito directo dos compostos aplicados localmente sobre a actividade do nervo. Além disso, a monitorização de sinais vitais, como é necessário, utilizando a abordagem in vivo (ver abaixo), é No mais relevante. In vitro gravação splanchnic está finalmente muito menos demorado do que sua contraparte in vivo.

actividade neuronal aferente em resposta a outros estímulos, tais como Stroking mucosa, de sondagem utilizando filamentos de von Frey ou distensão do segmento, pode ser estudado em uma configuração experimental modificado, no qual o tecido intestinal é fixado para baixo e aberto longitudinalmente (o que está em contraste com nossa configuração usando um segmento intacto), como foi descrito em uma edição anterior ^7,8. Além disso, só recentemente, foi descrita uma técnica para estudar a activação do nervo aferente do cólon na própria parede do cólon por meio de imagem de cálcio, de novo usando um fixado para baixo, aberta no sentido longitudinal do segmento ^9.

Uma versão alternativa desta técnica in vivo consiste fora de medir a ativação neuronal próximo a entrada do aferentes para a medula espinhal. Em suma, o animal sedado é colocado em decúbito ventral, exposing o cordão espinal lombossacral ao qual o nervo aferente de projectos de interesse por meio de laminectomia, construindo um bem usando a pele da incisão e o drapejar radículas dorsal sobre um eléctrodo de platina bipolar ^10,11 encheu-parafina. Esta técnica permite, além disso, os investigadores para caracterizar as fibras com base na sua velocidade de condução, e distinguir as fibras C não mielinizadas de Aδ-fibras finamente mielinizadas. Além disso, as radículas dorsais que contêm apenas fibras aferentes sensoriais, em contraste com os nervos aferentes e eferentes esplâncnicas mistos mencionados anteriormente.

Gravação de descarga de nervos aferentes in vitro a partir de segmentos intestinais isolados também pode ser feito usando amostras humanas, como dois grupos de pesquisa publicados de forma independente primeiros-in-man manuscritos gravação atividade do nervo aferentes cólica de ressecção humana espécimes ^12,13. A implementação desta técnica poderia resultar em um mais prontamente translatina dos dados murino para o estado humano, e pode permitir que os investigadores a identificar facilmente as drogas que alvejam o nervo sensorial sensibilizados. A importância clínica de caracterizar a actividade do nervo aferente, bem como a descoberta de novos reagentes terapêuticos que têm como alvo a actividade do nervo aferente exorbitante, foi elaborada discutido por muitos especialistas no domínio ^14-19.

A técnica in vitro acima mencionado complementa o mais comumente conhecido na medição in vivo da actividade do nervo aferente. Durante a medição in vivo da actividade neuronal, a actividade do nervo pode ser medida directamente no animal sedado durante o qual o segmento de interesse é identificada e subsequentemente entubados, e uma parafina líquida bem-cheia é construído usando a parede abdominal e a pele do roedor ^20. O nervo aferente de interesse é então identificado, seccionadas e colocadas sobre um eléctrodo de platina bipolar, permitindo measuremen actividade neuronalt. Esta técnica permite que o pesquisador para modular a atividade do nervo aferentes em viver ainda que os animais sedados; como tal, pode-se estudar a actividade neuronal responder às interferências, tais como distensão luminal ou a administração intravenosa de um composto.

Investigação translacional centra-se nos dias de hoje, principalmente sobre a aplicação dos sobrenadantes de origem humana (ex., A partir de biópsias de cólon, células mononucleares do sangue periférico cultivadas, etc.) em aferentes rato jejunais e / ou do cólon ^21,22. Os pesquisadores podem aplicar diretamente sobrenadantes quer para o banho de órgão ou na solução intraluminal que perfunde o segmento do intestino, de modo que os efeitos diferenciais da serosa versus aplicação da mucosa pode ser estudada na descarga de nervo aferentes. Como tal, foi demonstrado que supernatans de biópsia da mucosa do cólon de pacientes com a síndrome do intestino irritável podem causar hipersensibilidade do cólon no ratinho aferentes, cobaia neurónios submucosas e raiz dorsal de ratoneurônios do gânglio ^21,23,24.

Finalmente, a actividade neuronal gravação não está restrito ao mesentérica e / ou neurónios que enervam pélvicos no tracto gastrointestinal. Outros demonstraram que as gravações de nervo pode ser realizada em aferentes fornecimento de articulação do joelho ^25, ao passo que outros têm caracterizado actividade do nervo aferente da bexiga bem como ^26-28, e demonstraram que os aferentes pélvicos da bexiga bem como do tracto gastrointestinal convergem, resultando possivelmente em neuronal crosstalk ^29.