Os complexos mecanismos que regulam os factores de transcrição e as vias de sinalização que coordenam o desenvolvimento do sistema hematopoiético e que o mau funcionamento nas doenças hematológicas permanecem pouco compreendidos. Estes factores de transcrição e as vias de sinalização, bem como a sua regulação, são altamente conservados entre mamíferos a Drosophila e hematopoiese ^1-5. Assim, o sistema hematopoiético de Drosophila representa um excelente modelo genético para definir os mecanismos moleculares que controlam a hematopoiese e doenças hematológicas subjacentes.

Semelhante a mamíferos, Drosophila gerar células sanguíneas, chamados hemócitos, em espacial e temporalmente distintas fases da hematopoiese. Tradicionalmente, a hematopoiese de Drosophila foi pensado para ser limitada a fases na mesoderme embrionária e no gânglio linfático larvar. Estudos recentes fornecem evidências de que a hematopoiese também ocorre em Clu sésseis larvalsters e no abdômen adulto ^6-8. Todas as fases hematopoiéticas produzem dois tipos de hemócitos maduros: plasmatócitos e células de cristal. Plasmatócitos são células de macrófagos-like envolvidos na fagocitose, a imunidade inata, e cicatrização de feridas. células de cristal conter pro-fenoloxidases necessários para melanização, uma reacção utilizado nas respostas imunes de insectos e cicatrização de feridas. Hematopoiese larval pode gerar um terceiro tipo de hemócitos madura, um chamado lamellocyte, em resposta a certos desafios imunológicos tais como infecção parasitóides vespa ^9,10. Lamellocytes são células grandes e aderentes que funcionam, em conjunto com plasmatócitos e células de cristal, para encapsular e neutralizar os ovos de vespa estabelecidas em larvas de Drosophila. Na ausência de parasitismo, lamellocytes não são encontradas no tipo selvagem larvas. massas melanotic assemelham melanizadas, ovos de vespa encapsulados; muitas estirpes mutantes de Drosophila desenvolver massas melanóticos na ausência de parasitismo. A presença de Lamellocitos e / ou massas melanóticos pode ser indicativo de anormalidades hematopoiéticas. Na verdade, o fenótipo de massa melanóticos foi usado para identificar genes e vias envolvidas na hematopoiese ^11-14.

O sistema hematopoiético larval é a mais estudada até o momento. É composto de hemócitos circulantes na hemolinfa, aglomerados de hemócitos sésseis modelado sob a cutícula, e hemócitos residente no gânglio linfático. O gânglio linfático é uma série de lóbulos bilaterais ligados ao vaso dorsal. Cada lóbulo principal da glândula linfa é dividido em três zonas principais. A zona mais externa é conhecida como a zona cortical e contém amadurecimento hemócitos. A zona mais interior é chamado a zona medular e é composta de precursores de hemócitos quiescentes. A terceira zona, o centro de sinalização posterior, é um pequeno grupo de células na base do gânglio linfático que actuam como um nicho de células-tronco como. Os primeiros trabalhos estabelecida funções críticas para Notch ^15-18 </sup>, Hedgehog ^19,20, JAK-STAT ¹⁸ e atividade Wingless ²¹ para regular o desenvolvimento da glândula linfática larval. Estudos mais recentes têm demonstrado que a BMP ^{22, FGF-23 de} Ras, e Hipopótamo ^24,25 sinalização também funcionar dentro do gânglio linfático larvar.

Quatro ensaios hematopoiéticas larvais descritas aqui descrever 1) de medição de circulação concentração de hemócitos, definida como o número de células por unidade de volume, 2) isolamento e fixação hemócitos circulantes para imuno-histoquímica, 3) a visualização de células de cristal in vivo, e 4) de dissecação, de fixação e de montagem gânglios linfáticos para imuno-histoquímica. Estes ensaios podem ser usados ​​como leituras hematopoiéticas para avaliar as funções e os regulamentos de vias de sinalização no sistema hematopoiético das larvas. Embora estes métodos tenham sido utilizados anteriormente no campo, documentação visual destes ensaios só recentemente começou ^8,26-30. Várias publicações citadas aqui são de ajudaful recursos que descrevem métodos semelhantes e marcadores hematopoiéticas ^26,31-33. Além disso, Trol e Viking são marcadores úteis da membrana linfático glândula porão.