マウスにおける変形性関節症の痛みのMonoiodoacetateモデル

動物を対象とする手順は、キングス・カレッジ・ロンドンでの倫理委員会によって承認され、英国内務省規則に従っているされている（動物科学的手続きは1986 ACT）。 膝でMonoiodoacetateの1関節内注射ハウス8から12時間の明/暗サイクル下での5のグループで10週齢のマウス（午前7:00に点灯）、食物および水を自由摂取とマウスは、実験前の起動に1週間順化してみましょう。 治療に実験を盲目にコードとして5.動物数のグループにマウスをランダム化し、ケージ。ランダム化のためのパラメータとして体重を使用してください。 注射の日に、新鮮に所望の濃度の滅菌生理食塩水（0.9％NaCl）でmonoiodoacetateの溶液を調製。対照マウスの別のグループに注射用の滅菌生理食塩水を使用してください。 MIAの最高勧め線量は10マイクロリットルで1 mgです。 注意：Monoiodoacetate verはありますyの毒性。したがって、粉末を処理し、溶液を調製する際に手袋とマスクを着用することをお勧めします。溶液は無菌0.22μmのフィルターで濾過されるべきです。 O 2混合（流量1.5 L /分）で2％イソフルランを提供する第一の室に置くことにより、麻酔トロリーを使ってマウスを麻酔し、その後も2％イソフルラン-O 2混合物を提供するノーズコーン部分にマウスを転送、そのようなものとして、注入中に麻酔を維持します。麻酔下ながら、乾燥を避けるために、目に獣医軟膏を置きます。注入手順を実行しながら手術用ガウン、手袋、マスクを着用してください。 後足上のピンチ刺激に対する応答の動物の欠如をチェックすることによって、麻酔を確認してください。 動物が麻酔下になると、その背中の上に置きます。トリムやアルコールで膝関節の周囲を拭きます。ポビドンヨードまたはクロルヘキシジンはFと同様に使用することができますまたは消毒。膝蓋腱（膝蓋骨怒鳴る白線）が見えるようになります。 、注射部位を安定化させる膝関節と足関節の前面上の親指の下に人差し指を置くことにより、屈曲した位置に、まだ膝を維持するために。共同好みは必要ありません。 それは膝蓋骨の下にギャップが見つかるまで、注射の正確な部位を見つけるには、（先端が皮膚を貫通しないように）膝に沿って水平方向に注射器に取り付けた26 Gの針を実行します。領域をマークし、その後、注射のために垂直に針と注射器を持ち上げるために穏やかな圧力を適用します。脛骨に対して垂直に、膝蓋腱を通して、マークされた領域に針を挿入します。いいえ抵抗が感じされるべきではありません。 ガイドとして、親指を使用して、エントリのサイトに表面的な注入。注入後、溶液の均一な分布を確実にするために、膝をマッサージ。シャープですぐに針を捨てますsのビン。 加熱されたマットの上に戻ってきれいなホームケージにマウスを置き、それらを回復することができます。彼らは胸骨横臥位を取り戻すそれらによって測定され、適切な意識を、取り戻すまで、動物に一定の警戒をしてください。動物が回収されたら、自分のケージに戻します。 注：これは、染料が使用されているベストプラクティスとトレーニング目的や注射の正しい局在を確認するために行っ即時死後解剖のために提案されています。 機械的過敏症の2測定（アロディニア） 注：静的機械逃避閾値は、後足の足底表面にフォン・フライ毛を適用することによって評価されます。 行動の部屋にマウスを持参し、気ままな動物はワイヤーメッシュグリッド上にアクリルキュービクル（8センチメートルのx 5センチメートル×10センチ）に順応しましょう​​。 フォン・フレイ毛のアプリケーションへの2日前の順序でのためのキュービクルに取り扱い、2時間の馴化によって列車のマウスフォン・フレイ毛の適用中にストレスや歩行を制限します。試験日に、試験前に最大60分間キュービクルに動物を慣らします。全ての行動実験中にガウン、手袋、マスクを着用してください。 繊維が曲がるまで後肢の足表面に校正フォン・フライ毛（製造会社によって較正され、グラム（g）のように表現されるような力の定義されたレベルを発揮する拡径の柔軟なナイロン繊維）を適用します。テスト中に0.008、0.02、0.04、0.07、0.16、0.4、0.6、および1.0グラムの繊維を使用してください。 3秒間の場所でそれぞれの髪を保持するか、足が引き抜かれるまで、後者は肯定的な反応を定義します。引っ込め応答Xとしてマークし、応答のO不在：0.07グラムの刺激強度で開始し、「アップダウンの方法」21に従って毛を適用します。応答が検出されるまで、1グラム（カットオフ力）まで、力の昇順に適用します。 繰り返すことによって、足を再テストステップ2.2.1、撤退を生産1以下の力を発揮するフィラメントから始まります。 そして、何の撤退が発生しなくなるまで、力を下降することにより、順次残りのフィラメントを適用します。応答が観察されるまで昇順にフィラメントを再適用します。 6応答のシーケンスが得られるまで平板値21を参照して'K'値を得るために、（ 例えば 、OXOXOX）続けます。 グラムの50％足引っ込め閾値として足引っ込め値を表します。式（10 [Xrを+ Kδ]）/ 10,000（対数単位）のシーケンスで使用された最後のvon FreyフィラメントのXrを=値で、k =表形式の値、およびδを使用=繊維間の力の差を意味します。応答が検出されない場合は、1グラム21,22の最大応答を使用します。 上記の手順（2.2.1-2.2.4）に続いて、MIA充血前に、両方の後足の機械的閾値を評価しますベースライン値としてのn。注入後、機械的異痛の発症を確認するために、MIA後数週間のための定期的な日間隔で同側と反対側の足のしきい値を評価します。 注：例では、閾値は0、3、5、7、10、14、21を測定し、28日MIA注射後に報告します。彼らは0.1グラム以下への応答を表示するとき、動物を異痛症と考えられています。 1グラムの範囲 – 通常の応答が0.6に入ります。 3.量の測定は赤字ベアリング注：重量変化は、重量のインキャパシタンステスターを用いて測定される軸受。 装置のプレキシガラス室に歩き、保持ボックスに座って、各マウスを訓練します。 、保持ボックスの前にマウスを置き、最大45°の入り口を持ち上げ、そしてマウスは中を歩くとボックスを閉じることができます。彼らは着座姿勢を採用するまで、動物が自由に移動できるようにします。この訓練は、少なくとも2日かかり、動物がまだありませんlであることを保証します室の両側にeaning。 100グラムのチェック重量（または機器の指示に応じて）で使用する前に、機器を校正。 各後足が適切な記録パッド11上に置かれていることを確認します。各測定の持続時間は、製造業者の説明書に従って、1秒を要します。 各記録セッションの記録パッドから各後肢に負担重量の3つの測定値を収集し、同側と反対側の足が負担重量の差を算出する平均値を使用します。グラムでの対側と同側の足の間の差として値を表します。 ベースライン値としてMIA注射の前に体重負荷の変化を評価します。その後、ゲート変更の発展を確認するために数週間にわたって定期的に評価を繰り返します。例えば、我々は、0、3、5、7、10、14、21日に測定された閾値を報告し、28日MIA注射後。 注：通常の重量B50％の値を出穂は同側および対側後肢の両端に等しい量分布を表します。動物は過敏ディスプレイ、約45％の変化を重量支持考え。どちらのエンドポイントは、他に影響を与えるように、機械的閾値および体重負荷欠損の測定は、同じマウスで行うことができます。薬理学的評価のために、動物の各グループは、使用する化合物の薬物動態プロファイルに沿って投与後設定した時刻にテストする必要があります。