La cochlée en forme de spirale de l'oreille interne, contenue dans l'os temporal, abrite l'organe de Corti, la sensibilité auditive organe final chez les mammifères. La cochlée est tonotopically organisé et souvent divisé en apicale, un milieu et basale tours correspondant à différentes régions de fréquence avec détection de son à haute fréquence dans la base et la détection de basse fréquence dans l'apex ^1. Les cellules ciliées, les cellules mécano de l'organe de Corti, courent tout le long de la cochlée, qui est d'environ 6 mm de long chez la souris ^2,3. Ces cellules convertissent l'énergie mécanique des ondes sonores, qui sont transmis à travers le labyrinthe membraneux rempli de fluide, en des signaux neuronaux qui sont traitées par les structures auditives centrales. La technique décrite ici concerne un procédé pour la préparation de supports entiers de l'organe de Corti après calcification de la cochlée est complète (pour les échantillons allant de 1 semaine d'âge et l'âge adulte). Nous présentons également une méthode pour immunostaining le tout monté tissus cochléaire. Montures entières cochléaires sont cruciales pour la visualisation de toutes les cellules de cheveux et entourant les cellules de soutien dans leurs arrangements spatiaux naturelles et permettent l'analyse en trois dimensions avec l'utilisation de la microscopie confocale.

Drs. Hans Engstrom et Harlow Ades décrits à l'origine un ensemble de monter méthode de dissection cochléaire en 1966. Ils ont décrit une technique pour fixer rapidement et disséquer cochleae calcifiée immergée dans un liquide à partir d'une variété de mammifères, la préservation de courts segments intacts de l'organe de Corti pour analyse microscopique ^4. La dissection, une cochlée de rat calcifiée non fixée a également été illustré dans une vidéo d'instruction ^5. Drs. Barbara Bohne et Gary Harding à l'Université de Washington ont fait plusieurs modifications importantes à cette méthode. Dans leur version de la méthode de montage toute cochléaire, l'os temporal était adoucie, noyée dans le plastique, et cinq demi-tours ou dix quarts de tours étaient dissectionTed ^6,7. Dr Charles Liberman et ses collègues de Eaton Peabody laboratoires, Massachusetts Eye and Ear Infirmary, modifiés cette technique afin que le plastique intégration n'a pas été nécessaire ^8. Une modification supplémentaire de la technique a eu lieu dans le laboratoire du Dr Jian Zuo recherche de l'Hôpital pour enfants St. Jude ^9-12 qui a informé la méthode de dissection présenté ici. On utilise une stratégie différente pour avoir accès à l'organe de Corti et que Bohne Liberman, ce qui permet l'isolement de toutes les apical, au milieu et à tour de rôle de base. Ainsi le tissu disséqué est plus grande et moins susceptibles d'être perdus ou endommagés pendant les processus de dissection ou immunocoloration. De plus, le procédé actuel facilite la mesure de la distance à partir de l'extrémité apicale ou basale crochet pour identifier une région de fréquence.

Bien que de nombreux laboratoires effectuent un marquage de tissu cochléaire, on ne sait pas où cette méthode est originaire. En conséquence, il existe plusieurs recettes pour bloquer Buffers et incubation des anticorps tampons qui peuvent affecter la performance des anticorps primaires individuels. Ici, nous présentons une méthode pour immunocoloration avec des anticorps marqués par fluorescence qui est applicable à des anticorps les plus couramment utilisés dans le domaine auditif.

La forme complexe de la cochlée, la structure délicate de l'organe de Corti, et enrobage osseuse constituent un défi pour l'analyse histologique et biochimique. Une variété de techniques sont actuellement utilisés dans le domaine de l'audition de surmonter ces caractéristiques difficiles et visualiser les cellules à l'intérieur de l'organe de Corti, chaque technique avec ses propres avantages et inconvénients. Le protocole présenté ici permet pour toute la dissection de montage de la cochlée de souris adulte et, avec une légère modification, peut potentiellement être utilisé pour examiner les structures critiques au sein de la cochlée d'une variété d'autres organismes modèles utilisés dans le domaine.