작은 오염 물질의 면역 학적 분석을위한 물 샘플의 자동화 된 고체상 추출을위한 간단한 방법
Summary
A protocol for the extraction and pre-concentration of estradiol from water samples by using an automated and miniaturized system is presented.
Abstract
환경 물 샘플의 고체 상 추출 (SPE)을위한 새로운 방법을 제안한다. 개발 된 프로토 타입은 비용 효율적이고 사용자 친화적이며, 신속한 자동화 및 간단한 SPE을 수행 할 수 있습니다. 예비 농축액 낮은 유기 용매 함량, 면역 측정법에 의한 분석과 호환 가능하다. 방법은 100 mL의 물을 샘플에 천연 호르몬 17β-에스트라 디올의 추출 및 미리 농도를 설명한다. 역상 SPE는 옥타 – 실리카 흡착제로 수행되고 용출 메탄올 50 % V / V를 200 μL로 이루어집니다. 용출액은 메탄올의 양을 낮추는 디 물을 첨가하여 희석한다. 수동 SPE 칼럼을 준비한 후, 전체 절차는 1 시간 이내에 자동으로 수행된다. 프로세스의 끝에서, 에스트라 디올 농도 상업용 효소 결합 면역 흡착제 분석법 (ELISA)을 이용하여 측정된다. 100 배 사전 농도를 달성하고 10 %의 V / V에서 메탄올 내용. 분자의 전체 복구1 NG로 달성된다 / L은 드 이온화 및 합성 해수 샘플을 아군.
Introduction
샘플은 분석 준비 과정에서 중요한 단계이다. 특히, 매트릭스 효과, 간섭의 감소, 및 분석 물의 농축 제거하여 정확한 결과를 획득하고 검출 하한에 도달하는 데 필요한. 내분비 방해 화합물 (EDCs)은 인해 생물에 대한 자신의 행동에 특별한 관심의 경우에도 환경에서 현재 매우 낮은 수준. 천연 호르몬 17β-에스트라 디올은 유럽 물 기본 지침에 의해 규제되는 우선 순위 물질 목록에 추가 할 수있는 유럽 연합 (EU)의 수질 오염 감시 목록에 현재와 경향이있다. 고체 상 추출 (SPE)는 일반적으로 화학 양 1-5 (크로마토 그래피, 질량 분광 분석) 6-9 및 면역 학적 검출 방법으로, 작은 물 오염 물질의 분석에 적용된다. 후자는 면역이 형식의 대형 다양한에서 사용할 수있는 TA에 고유 한, 환경 모니터링 분야에 대한 관심을 얻었다피검 rget 및 검출 하한에 도달한다. 6, 7, 10, 11, 각종 효소 결합 면역 분석법 (ELISA)은 시판되고 멀티 웰 플레이트에 한 번에 여러 개의 시료를 분석 가능하게한다. 절차는 몇 시간이 걸릴 수있는 연속 반응 단계에있다. 반응의 최종 생성물은 검량선에 기초하여 상기 표적 분자의 농도를 결정하기 위해 광학적으로 검출 할 수있다.
고전 SPE 절차는 용출액의 증발에 의해 흡착 프리 컨디셔닝 (pre-conditioning), 샘플 추출, 세척, 용출 및 농도를 포함한다. 이 추출물을 희석에 사용되는 용제는 검출 방법에 따라 선택된다. 면역 학적 방법에 대해서는, 강하게 유기 용매의 영향에있어서의 감도의 양. 12
회수 및 미리 농도 성능 외에도, 방법은 간단하고 효율적인 비용이 필요하다. procedur의 자동화전자는 인간의 관련 오류를 줄일 수 있습니다. 우리의 이전 연구 13에서 우리는 자동화 된 SPE에 대한 우리의 프로토 타입을 소개하고, 우리의 방법은 해수 시료에서 자연 호르몬 17β-에스트라 디올의 분석에 적용 하였다. 본 동영상으로 우리는 SPE 및 면역 반응에 의해 감지와의 특별한 호환성 기존의 오프라인과 온라인에 비해 우리의 방법의 기술적 인 장점을 강조하고 싶습니다. 우리는 17β-에스트라 디올의 검출 물 샘플에 적용된 프로토콜을 설명한다. SPE는 옥타 데실 실리카 (C18) 흡수제 및 용출 단계가 희석 된 메탄올 행한다 행한다.
Protocol
Representative Results
Discussion
면역 분석을 사용하여 분석 하였다 물 샘플의 제조를위한 새로운 방법이 제안되었다. 악기가 자동 사용자 친화적 방식으로 고체상 추출을 수행 할 수있다.
종래의 시스템에 주입 물 샘플의 여과는 매우 중요하다. 용액에 존재하는 임의의 미립자는 여전히 잠재적으로 유체 망의 막힘을 일으키고 SPE 칼럼을 방해한다. 다른 중요한 단계는 SPE 칼럼의 제조이다. 열에있는 입자의 …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was funded by the European Union Seventh Framework Program FP7/2007-2013 under grant agreement no. 265721. The authors thank the RIKILT Institute for Food Safety (NL) for their support in this project.
Materials
| Filter membrane 0.2 μm pore size | Merck Millipore | GNWP04700 | For sample filtration |
| Nylon membrane 11 μm pore size | Merck Millipore | NY1104700 | For SPE column |
| Disposable biopsy punch 5 mm | Medical Budget | 39302439 | |
| Nucleodur C18 ec | Macherey Nagel | 713550.01 | 50 μm particle diameter |
| Synthetic sea water | Sigma Aldrich | SSWS500-500ML | |
| Methanol | VWR | ||
| 17beta-estradiol standard | Enzo Life Science | 300 ng/ml | |
| 17beta-estradiol ELISA kit | Enzo Life Science | ADI-900-008 | 96 wells, range 30 – 3000 ng/L |
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