Siden den første beskrivelsen i 2001 av tre uavhengige grupper ^1-3 i n utero elektroporering er blitt en utbredt standard verktøy for å analysere genekspresjon i gnagere sentralnervesystemet. Sammenlignet med den generasjonen av knockout-mus, som er, til tross for kontinuerlig forbedring teknikker, fortsatt tid og penger tidkrevende, de i utero electroporation appeller på grunn av sin enkelhet. Så, i utero elektroporering muliggjør rask og effektiv gevinst-og tap-av-funksjon studier ^4.

For å transfektere de cerebrale områder, blir oppløsningen inneholdende det negativt ladede plasmidet injiseres i et hjertekammer. I løpet av den elektriske puls, migrerer negativt ladet DNA mot den positive pol, og derfor den transfekterte region kan velges ganske enkelt ved å endre posisjonen til den positive pol. Det har ofte vist seg at tallrike områder av sentralnervesystemet kan være TArgeted ^3,5-8. For eksempel, nyere studier viser spesifikke transfeksjoner av hippocampus, piriform cortex eller striatum ^9-11. Men informasjonen om de aktuelle stillingene er ofte bare knapt standardisert og er ikke alltid lett å overføre til forskjellige musestammer.

Transfeksjon av visse embryonale stadier er langt fra trivielt. Mange påvirkende faktorer må tas i betraktning når du velger oppsett for spesifikk i utero elektroporering. Først, for å optimalt transfektere de respektive embryonale stadier, er kunnskap om de aktuelle spenninger nødvendig. Høye spenninger redusere overlevelse, mens lave spenninger redusere transfeksjonseffektiviteten ^2,3,12. Også størrelsen av elektroden padle spiller en avgjørende rolle, fordi bruken av elektrode årer som er for store resulterer i redusert spesifisitet, eller kan føre til død på grunn av affeksjon av hjerterytmen ^4,12,13. Den påførtespenning og størrelsen og posisjonen av elektroden åren er de viktigste funksjoner for å ta hensyn til, men det finnes også ytterligere faktorer som påvirker utfallet av elektroporering som den anvendte mengde av DNA-løsning.

Vi har utviklet en detaljert protokoll som muliggjør rask og effektiv transfeksjon av forskjellige cerebrale regioner av C57BL / 6 mus ^12. I denne protokollen detaljert informasjon om de spenninger som skal benyttes og størrelsen av elektrode åren for forbedret spesifisitet er gitt. Videre informasjon om ventrikkel for å bli fylt med anbefalinger for mengden av plasmid-løsning og stilling av elektroden blir tilført. Indikasjon på detaljert posisjonsinformasjon i et kart og den videre visualisering av disse stillingene kan du direkte konkret og effektiv i utero electroporation av retrosplenial cortex, motor cortex, somatosensoriske cortex, den piriform cortex, tHan CORNU ammonis 1-3, gyrus dentatus, striatum, den laterale septal nucleus, thalamus og hypothalamus.