Upptäckten av mänskliga inducerade pluripotenta stamceller (hiPSCs) har revolutionerat området för regenerativ medicin, vilket ger en möjlig metod för att generera patientspecifika stamceller ^1-3. hiPSCs har framgångsrikt genereras från olika somatiska celltyper, inklusive fibroblaster ^4,5, hematopoetiska celler ^6,7, njur epitelceller från urin ⁸ och keratinocyter ^9,10. Hittills hudfibroblaster och hematopoetiska celler representerar de mest använda källorna cell för alstring av patientspecifika iPSCs. Förmodligen beror detta på det faktum att huden biopsier och blodinsamling är rutinmässiga medicinska procedurer och stora biobanker patient blod- eller hudprover har fastställts i många länder.

I motsats till blodkroppar och huden fibroblast som kräver invasiva metoder för extraktion, keratinocyter representerar en lättillgänglig celltyp för hiPSC generation. Keratinocytes är keratin-rika epitelceller som bildar den yttre epidermala barriären i huden och är även hittats i naglar och hår ^11. I synnerhet kan keratinocyter hittas på den yttre rotskidan (ORS) av hårsäckar, en extern cellulär skikt som täckte hårstrået tillsammans med inner rotskidan (IRS) celler ^(12, figur 1). Eftersom hår kollektionen är en enkel procedur som inte kräver hjälp av medicinsk personal, ger det en möjlighet för patienter att samla in och skicka sina egna hårprover till laboratorier, som i hög grad skulle underlätta insamlingen av patientprover för hiPSC generation. Epidermala keratinocyter har också en högre omprogrammering effektivitet och snabbare omprogrammering kinetik jämfört med fibroblaster, lägga till fördelarna med att använda keratinocyter som start celler för hiPSC generation ^9,13. Dessutom kan hiPSCs även genereras med hjälp av andra cellpopulationer i hårsäcken,inklusive dermalpapillen cellerna placerade vid basen av hårsäcken ^14,15.

Tidigare rapporter IPSC generation använder hår-härledda celler utnyttjar ofta retrovirala eller lentivirala baserade omprogrammering metoder ^9,14,15. Dessa virala metoder införa oönskad genomisk integrering av utländska transgener under omprogrammering. I jämförelse, användning av episomala vektorer representerar en möjlig, icke-viral omprogrammering metod för att generera integrationsfria iPSCs ^4. Vi har tidigare utvecklat en enkel, kostnadseffektiv och icke-virala metod för att på ett effektivt sätt programmera keratinocyt i hiPSCs använder episomala vektorer ^13. Här ger vi ett detaljerat protokoll för alstring av keratinocythärledda hiPSCs, inklusive härledning av keratinocyter från plockade hår, expansion och underhåll av keratinocyterna och efterföljande omprogrammering för att generera hiPSCs.