Oppdagelsen av menneskeskapte pluripotent stamceller (hiPSCs) har revolusjonert innen regenerativ medisin, og gir en mulig metode for generering av pasientspesifikke stamceller ^1-3. hiPSCs har blitt generert fra ulike somatiske celletyper, inkludert fibroblaster ^4,5, hematopoetiske celler ^6,7, nyre epitelceller fra urin ⁸ og keratinocytter ^9,10. Til dags dato, hudfibroblaster og blodkreft cellene representerer de mest brukte celle kilder for å generere pasientspesifikke iPSCs. Uten tvil, dette er på grunn av det faktum at huden biopsier og blodprøvetaking er rutinemessige medisinske prosedyrer og store biobanker av pasientens blod eller hud prøver har blitt etablert i mange land.

I motsetning til blodceller og hud-fibroblast som krever invasive ekstraksjonsmetoder, keratinocytter representerer en lett tilgjengelig celletype for hiPSC generasjon. Keratinocytes er keratin-rik epitelceller som danner den ytre epidermal barriere på huden, og er også funnet i negler og hår ^11. Spesielt kan keratinocytter finnes på den ytre rot skjede (ORS) av hårsekkene, et ytre cellelag som dekket håret sammen med den indre rot skjede (IRS) celler ^(12, figur 1). Som håret kolleksjonen er en enkel prosedyre som ikke krever hjelp fra medisinsk personell, gir det en mulighet for pasienter å samle inn og sende sine egne hårprøver til laboratorier, som i stor grad vil lette innsamling av prøver for hiPSC generasjon. Epidermale keratinocytter har også en høyere effektivitet og omprogrammering raskere reprogrammerings-kinetikk i forhold til fibroblaster, og legger til fordelene ved å bruke keratinocytter som utgangsceller for hiPSC generering ^9,13. Videre kan hiPSCs også genereres ved å bruke andre cellepopulasjoner i hårsekken,inkludert dermal papilla celler lokalisert i bunnen av hårsekken ^14,15.

Tidligere rapporter om IPSC generasjon som bruker hair-deriverte celler utnytter ofte retrovirale eller lentiviral baserte omprogrammering metoder ^9,14,15. Men disse virale metoder innføre uønsket genomisk integrering av utenlandske transgener under omprogrammering. Til sammenligning bruk av episomale vektorer som representerer en mulig, ikke-viral omprogrammering metode for å generere integrasjonsfrie iPSCs ^4. Vi har tidligere utviklet en enkel, kostnadseffektiv og ikke-viral metode for å effektivt omprogrammere keratinocyte inn hiPSCs bruker episomale vektorer ^13. Her har vi gi en detaljert protokoll for generering av keratinocytt-avledet hiPSCs, herunder avledning av keratinocytter fra plukket hår, utvidelse og vedlikehold av keratinocytter og påfølgende omprogrammering for å generere hiPSCs.