Elektrofysiologisk Motor Unit Number Estimation (Mune) Måling Forbindelse muskel aktionspotentiale (CMAP) i mus bagben Muskler

Denne protokol blev godkendt af og overholder de dyr pleje og etik retningslinjerne fra Ohio State University Wexner Medical Center. 1. Animalske Forberedelse og Anæstesi Brug handsker mens håndtering mus. Bedøver mus med inhaleret isofluran og plads i liggende stilling. Fremkalde anæstesi ved hjælp af 3-5% isofluran og 1 l pr minut O 2 flow. Efter induktion af anæstesi, vedligeholde anæstesi på 2-3% og 1 L per minut O 2 strømningshastighed. Juster O 2 flow og isofluran procent for passende anæstesi efter dyrets sygdomstilstand, alder, og respiration sats. Mindre eller svagere dyr kan kræve mindre isofluran for passende bedøvelse (dvs. 1,5- 2,5% isofluran). Bekræft tilstrækkelig anæstesi ved at anvende lys bagben trædepude tryk med en genstand, såsom pincet til at demonstrere manglende tilbagetrækning respons.; Oprethold temperaturen på 37 ° C overfladetemperatur med en termostatisk opvarmning plade som temperaturvariation kan påvirke CMAP størrelse og varighed. Påfør dyrlæge oliebaseret salve til øjnene for at forhindre tørhed. Overvåg niveau af anæstesi observere respiration sats og vurdere om tilbagetrækning reaktioner efter tryk, foden puden via pincet. Fjerne hår fra bagbenet, der skal undersøges ved hjælp af klippere. Efter fjernelse af hår fra bagbenet (r), der skal undersøges, let udvide bagben ved knæet, bortføre ved hofterne og forsyne arbejdsfladen med tape (som vist i figur 1). Efter CMAP og Mune optagelser og seponering af anæstesi, ikke forlader dyr uden opsyn, indtil det har genvundet tilstrækkelig bevidsthed til at opretholde brystleje. Må ikke returnere dyr til selskab med andre dyr, indtil fuldt tilbagebetalt. 2. ROptagelse Opsætning og udstyr Placer elektroderne for CMAP og Mune optagelser som afbilledet i figur 1. Brug to fine ring elektroder til optagelsen elektroder. Placer aktive (E1) ringelektrode på huden overliggende den proximale del af musculus gastrocnemius af bagbenet, ved knæleddet, og referencen (E2) ring elektrode på huden over midten metatarsal del af foden. For at reducere impedans, pels huden bag ringelektroderne med gel i tilstrækkelig grad at mætte tilbageværende hår og maksimere kontakt mellem elektrode og hud. Undgå overdreven anvendelse af elektrode gel, da dette kan forårsage elektrisk bro mellem elektroderne og kunne forhindre nøjagtig registrering. Til stimulering af iskiasnerven ved den proximale bagben, bruge to isolerede 28 g monopolære nåle som katode og anode. Sæt katoden ved området af den proximale bagbenet og indsæt anode mere proximalt i det subkutane væv overliggende korsbenet. Undgå at indsætte de stimulerende elektroder overdrevent tæt på iskiasnerven eller for dybt, at det direkte vil skade iskiasnerven eller anden struktur. Figur 1 illustrerer elektrodeplacering. For jordelektroden, placere en engangs overflade elektrode på den kontralaterale bagben og hale. 3. dataopsamling Ischiadicus CMAP Opnå ischiadicus CMAP svar ved at stimulere iskiasnerven med firkantpulser på 0,1 ms varighed og intensitet spænder 1-10 mA. Erhverve CMAP reaktioner med stigende stimulus intensitet, indtil amplituden af ​​responset ikke længere stiger. Derefter, med henblik på at sikre supramaksimal stimulation, øge stimulation til ~ 120% af stimulus intensitet anvendes til at opnå en maksimal reaktion og opnå en yderligere reaktion. Hvis der ikke er yderligere at øge in CMAP størrelse, optage dette svar, da den maksimale CMAP. Optag baseline-til-top og peak-to-peak CMAP amplituder i mV (figur 2). Gennemsnitlig Single Motor Unit Potential (SMUP) Størrelse og Mune Beregning Bestem den gennemsnitlige enkelt potentiel motorenhed (SMUP) størrelse med en trinvis stimulation teknik 1. For at opnå trinvise reaktioner, levere submaksimal stimulering af 0,1 ms varighed ved en frekvens på 1 Hz og samtidig øge intensiteten i 0,03 mA skridt til at opnå de minimale alt-eller-ingen svar. Hent den første reaktion med stimulus intensitet mellem 0,21 mA og 0,70 mA. Hvis den første reaktion ikke sker med stimulus intensitet mellem 0,21 mA og 0,70 mA, justere stimulerende katode positionen enten tættere på eller længere væk fra positionen af ​​iskiasnerven i den proksimale låret at mindske eller øge den nødvendige stimulus intensitet, hhv. Hvis den første incremental respons er opnået med en stimulus intensitet mellem 0,21 mA og 0,70 mA og opfylder kriterierne noteret nedenfor (3.2.2), butik og optage yderligere stigninger med stigende stimulus intensiteter justering i trin på 0,03 mA for at opnå i alt 9 yderligere stigninger, der opfylder de opstillede kriterier. Under målinger af trinvise reaktioner, sikrer, at hver stigning opfylder følgende kriterier. Sørg for, at den første negative højdepunkt af de trinvise reaktioner er justeret tidsmæssigt inden den negative toppen af den maksimale CMAP respons vist som skraverede del af CMAP illustrationen i figur 2. Sikre, at hver trinvise respons er stabil og uden fraktionering, oprettet ved at observere tre dobbelte svar. Skelne visuelt trinvise reaktioner i realtid (oven på tidligere optagne intervaller). Bemærk: Hver tilvækst skal være visuelt forskelligeog større sammenlignet med den foregående reaktion (figur 3). Analyse i realtid giver mulighed for anerkendelse af større amplitude (inkremental) reaktioner i forhold til tidligere svar, og kan ses bort fra små ændringer kan henføres til baggrundsstøj. En overlejret afbildning af 10 trin er vist i figur 4 (B og D) for yderligere at illustrere dette punkt. Efter visuelt bekræftelse hver stigning, sørge for, at den målte amplitude forskel (bekræftet respons-amplituden af ​​den tidligere respons = amplitude forskel) er mindst 25 μV. Hvis tilvæksten er mindre end 25 μV, kasseres og re-måle responsen. Efter optagelse 10 enkeltprøver svar, at evaluere intervaller for at sikre, at amplituden af hver enkelt trinvis respons ikke er større end 1/3 af summen af alle ti trin (dvs. den samlede amplitude af den endelige reaktion). Hvis denne betingelse ikke er opfyldt, re-måle trinvise svar. Gennemsnittet af 10 trinvise værdier til at give et skøn over den gennemsnitlige enkelt potentiel motorenhed (SMUP) amplitude (Figur 3). Bemærk: Figur 3 beskriver grundlag af gennemsnitsberegning SMUP, men den gennemsnitlige SMUP amplitude kan simpelthen beregnes ved at dividere den samlede amplitude af den endelige trinvise reaktion med det samlede antal af trin (dvs. 10). Eksempel individuelle SMUP beregninger (illustreret i figur 3): SMUP 1 = peak-to-peak amplitude tilvækst 1 SMUP 1 = 0,050 mV SMUP 2 = (spids-til-spids-amplitude tilvækst 2) – (spids-til-spids-amplitude tilvækst 1) SMUP 2 = 0,150 mV-0,050 mV = 0,100 mV Beregn hver efterfølgende trin (op til i alt 10), og foretage en gennemsnit af de ti trin. Beregn Mune ved at dividere den maksimale CMAP amplitude (peak-to-peak) med den gennemsnitlige SMUP amplitude (peak-to-peak). (MUNE = CMAP / gennemsnitlig SMUP). I nogle elektrofysiologiske systemer er intervaller de SMUP målt i μV mens CMAP typisk findes i mV. Når det er nødvendigt, konvertere CMAP og SMUP resultater til tilsvarende enheder før Mune beregning.