Summary

발 - 드래그 : 소설, 마우스 실린더 시험의 민감성 분석

Published: April 29, 2015
doi:

Summary

실린더 시험의 고전 앞다리 비대칭 분석 일상적 뇌 손상 또는 뇌졸중 다음 래트에서 행동 결손을 평가하기 위해 사용된다; 그러나, 쥐에서 일관된 적자를 감지하지 못한다. 이 연구는 발 드래그 동작을 정량화하는 것은 쥐의 뇌 손상에 더 민감 분석 것을 보여줍니다.

Abstract

실린더 테스트는 통상적으로 설치류 앞다리 운동 피질 허혈 손상에 초점을 예측하는 데 사용된다. 실린더에 배치하는 경우, 설치류는 양육과 자세 지원을위한 자신의 앞다리의 발과 실린더의 벽을 만져 탐구. 앞다리의 감각 피질에 허혈 손상 후, 쥐 앞다리 비대칭이라고한다 그들의 영향을받는 발을 적은 접촉의 결과로 자세 지원을 위해 자신의 영향을받지 앞다리의 발에 더 많이 의존하고있다. 반면에, 마우스의 뇌에 초점 허혈성 손상은 앞다리의 비대칭 성에서 비교 일치 적자가 발생되지 않습니다. 앞다리 비대칭 적자가 자주 관찰되는 반면, 마우스는 "발 드래그"라고 새로운 행동 포스트 행정을 보여 않습니다. 발 – 드래그는 4 다리 자세로 후면에서 분리 할 때 직접 벽에서 밀어보다는 실린더 벽을 따라 그 영향을받는 발을 끌어 마우스의 경향이다. 우리는 이전에 있음을 증명하고있다발 드래그 동작은 앞다리의 운동 피질에 작은 대뇌 피질의 허혈성 손상에 매우 민감하다. 여기에 우리가 발 드래그 분석에 대한 자세한 프로토콜을 제공합니다. 우리는 발 드래그가 무엇인지 정의하고 발 드래그 동작을 정량화하는 방법을 보여줍니다. 실린더 테스트 관리하는 간단하고 저렴한 실험이며 사전 훈련 또는 음식 박탈 전략을 필요로하지 않는다. 작은 초점 부상의 인기가 계속 증가하고 생산되는 두 가지 모델 – 실린더 테스트와 발 드래그 분석을 사용하여, 이러한 photothrombosis 및 엔도 텔린 -1 (ET-1) 유도 된 허혈과 같은 대뇌 피질의 허혈성 손상을 예측하는 틈새 시장을 채 웁니다 중간 대뇌 동맥 폐색보다. 마지막으로, 실린더 시험에서 발 – 드래그 동작을 측정하는 단계 이전 앞다리 비대칭 분석 일관성 결손을 검출하지 못한 트랜스 제닉 마우스 균주를 사용하여 넓은 코호트 피질 손상 후 기능 회복의 연구를 허용 할 것이다.

Introduction

신경 재생 전략 목표는 조직 복구 및 복구 기능을 모두 보여주는 것이다. 기능 회복은 일반적으로 특정 뇌 영역에 대한 손상과 관련된 운동 능력이 관련된 경우에, 기능적 결손을 측정 행동 시험으로 평가된다. 외상성 뇌 손상 또는 피질의 감각 앞다리 영역 허혈성 손상, 행동 시험에 의해 증명 될 수있다. 하나의 그러한 테스트는, 실린더 테스트는 앞다리 1 작용 성 활성을 평가하기위한 결손 래트에서 광범위하게 사용된다. 이 테스트는 투명 상단 만 실린더, 카메라와 테이블을 필요로하는 낮은 셋업 비용이 있습니다. 그것은이 설치류의 자연 탐구 행동을 기반으로 관리하기 쉽고, 그래서 사전 교육 및 음식 부족 또는 보상은 필요하지 않습니다. 이러한 많은 장점에도 불구하고, 실린더 시험은 앞다리 s의 초점 부상 다음 쥐에서 앞다리 적자를 평가하기 위해 아래-활용우리가 실린더 시험에서 마우스 동작의 분석 특성 피질, ensorimotor. 앞다리 비대칭 실린더 시험 분석의 고전 척도이다. 실린더에 배치하는 경우, 설치류 자연스럽게 자신의 뒷다리에 양육 및 자세 균형에 대한 자신의 앞다리의 발과 실린더 벽을 터치하여 실린더의 벽을 탐구한다. 각 앞다리와 벽 발 접촉의 수는 쉽게 실린더의 탐사 기간 동안 설치류 촬영에 의해 정량화된다. 영향을받는 앞다리 발은 영향을받지 앞다리 발보다 벽 적은 접촉을하고 반대측 감각 피질에 손상을 나타내는 경우 앞다리 비대칭이 발생합니다. 쥐에서 혈관 수축 화제의 피질 내 주사, 엔도 텔린은 앞다리 감각 피질로 (ET-1), 반대편의 앞다리 행동 결손 결과 국소 허혈성 병소가 발생. 반대측 앞다리 사용의 적자는 쉽게 F의 변화로 감지된다래트 1-3 실린더 테스트에 비대칭 orelimb. 그러나 래트 달리 앞다리 비대칭의 변화와 유사한 가변 ET-1 주사 4-6 다음 마우스에서 덜 일치한다. 여기에서 우리는 실린더 테스트에서 앞다리 행동의 새로운 해석을 보여 – 발 – 드래그 동작의 분석. 우리는 이전에 그 발 드래그 분석은 고전 앞다리의 비대칭 분석보다 쥐의 앞다리의 감각 피질의 손상에 더 민감 측정 따라서 초점 대뇌 피질의 손상 다양한 모델에 적용 할 수있다 보여 주었다.

4 발 – 드래그 – 어떻게 앞발 연락처 시험은 앞다리의 감각 피질에 허혈성 손상 다음과 실린더 벽은 마우스에 새로운 동작을 밝혔다. 마우스를 다음의 중간 선으로 또는 벽 동안 아래로 실린더 벽을 따라 그 영향을받는 (- 콘트라 병변) 발을 드래그 실린더 벽을 탐구하기 위해 뒷다리에 서 때 발 드래그가 발생그것의 영향을받지 앞발은 벽에 자세 지원을 제공합니다. 발은-를 드래그하는 거의 따라서 발 드래그의 모양은 앞다리의 감각 피질 (4) 부상의 긍정적 인 지표가 손상되지 않은 쥐에서 발생하지 않습니다. 우리는 이전에 앞다리의 감각 피질에 ET-1의 허혈성 손상을 다음 마우스에서 발 드래그 동작을 정량화하고 사후 행정 4 이주까지 생쥐에서 지속 발 드래그 동작을 보여 주었다. 여기에 우리가 발 드래그 동작이 사주 후 스트로크까지 지속되는 것으로 나타났다. 발 – 드래그 동작의 분석은 쥐의 앞다리의 감각 피질에 초점 허혈성 손상을 평가하기위한 새롭고 중요한 도구를 제공합니다. 그 저렴한 셋업, 관리의 용이성이 빠르게 마우스의 앞다리 행동 적자를 평가하는 간단하면서도 유용한 도구 만들기 득점.

Protocol

윤리 문 : 모든 실험 동물 관리에 캐나다위원회의 지침에 따라 뉴 펀들 랜드의 동물 관리 윤리위원회의 기념 대학에 의해 승인되었습니다. 1. 마우스 성인 마우스를 사용합니다. 이 연구에서, 성인 남성 FVBN 마우스 (N = 10) 사이 2-4개월 사용 하였다. 12시 12분 시간에 집 마우스는 명암 사이클을 역 및 표준 설치류 식사 및 임의 량의 물을 제공한다. 실린더…

Representative Results

우리는 이전에 그 발 드래그 동작은 앞다리의 감각 피질에 초점 허혈 손상에 따라 표시 및 손상 (4)의 긍정적 인 지표가 증명하고있다. 앞다리의 감각 피질에 ET-1의 인트라 대뇌 피질의 주사는 허혈성 병변 (도 8a, B)를 유도하기 위해 사용되었다. 잠재적 사용 기능 회복을 평가하기 위해 발 드래그 동작이 이상 십사일 후 부상 연장 여부를이 연구는 조사 하였다. 마우스는 이전?…

Discussion

다음은 실린더 시험에서 발 드래그 동작을 정량화 할 때 요점 설정 : I)의 수 정량 기준을 설정하기 위해 뇌 손상 전에 각 발에 대한 총 발 접촉 대 발을-드래그; ⅱ) 허혈 손상 다음 각 발에 대한 총 발 접촉 대 발-, 드래그의 수를 정량화; 및 ⅲ) 발 드래그하고 마우스의 몸통의 측면 회전시 실린더 벽을 따라 발의 측면 움직임을 구별.

발 드래그은 앞다리의 감각 피질에 손상 후…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

우리는 사진 및 비디오 그래피와 기술적 전문 지식과 지원 씨 존 크로 웰 씨 테리 Upshall 감사합니다. 이 작품은 뇌졸중 복구 촉매 보조금 건강 연구의 캐나다 연구소와 뉴 펀들 랜드의 연구 및 개발 공사와 심장과 캐나다 캐나다 파트너십의 스트로크 재단 JLV에 보조금을 운영에 의해 지원되었다. RBR은 키스 그리피스 기념 심장 및 뇌졸중 재단 대학원 장학금받는 사람이었다.

Materials

Plexi-glass cylinder N/A N/A 17.5cm high, 9.5cm outer diameter, 8.8cm inner diameter, wall thickness 0.35cm (or 3.5 mm)
viewing table N/A N/A 54x56x66.5cm (width x length x height), top of table is a 51x51cm sheet of plexiglass.
mirror N/A N/A 34x58cm mirror
video camera Sony DCR-SR42 Video camera with onboard storage, SD functionality, 40x optical zoom
computer Dell Optiplex 760 Processor: Intel, 3.0 GHz, Memory 4.00GB (RAM) 
computer monitor Samsung S22C350H
Excel (Microsoft Office Professional Plus) Microsoft v14.0.7106.5003
VLC Media Player Video LAN v2.1.2 Media player with playback speed modulation and video support
External Hard Drive Western Digital WDBAAU0020HBK-01 2 TB

Referências

  1. Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury. Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).
  2. Kolb, B., et al. Growth factor-stimulated generation of new cortical tissue and functional recovery after stroke damage to the motor cortex of rats. J Cereb Blood Flow Metab. 27 (5), 983-997 (2007).
  3. Windle, V., et al. An analysis of four different methods of producing focal cerebral ischemia with endothelin-1 in the rat. Exp Neurol. 201 (2), 324-334 (2006).
  4. Roome, R. B., et al. A reproducible Endothelin-1 model of forelimb motor cortex stroke in the mouse. J Neurosci Methods. 233, 34-44 (2014).
  5. Tennant, K. A., Jones, T. A. Sensorimotor behavioral effects of endothelin-1 induced small cortical infarcts in C57BL/6 mice. J Neurosci Methods. 181 (1), 18-26 (2009).
  6. Wang, Y., Jin, K., Greenberg, D. A. Neurogenesis associated with endothelin-induced cortical infarction in the mouse. Brain Res. 1167, 118-122 (2007).
  7. Baskin, Y. K., Dietrich, W. D., Green, E. J. Two effective behavioral tasks for evaluating sensorimotor dysfunction following traumatic brain injury in mice. J Neurosci Methods. 129 (1), 87-93 (2003).
  8. Li, X., et al. Chronic behavioral testing after focal ischemia in the mouse: functional recovery and the effects of gender. Exp Neurol. 187 (1), 94-104 (2004).
  9. Clarke, J., Ploughman, M., Corbett, D. A qualitative and quantitative analysis of skilled forelimb reaching impairment following intracerebral hemorrhage in rats. Brain Res. , 204-212 (2007).
  10. Montoya, C. P., Campbell-Hope, L. J., Pemberton, K. D., Dunnett, S. B. The ‘staircase test’: a measure of independent forelimb reaching and grasping abilities in rats. J Neurosci Methods. 36 (2-3), 219-228 (1991).
  11. Farr, T. D., Whishaw, I. Q. Quantitative and qualitative impairments in skilled reaching in the mouse (Mus musculus) after a focal motor cortex stroke. Stroke. 33 (7), 1869-1875 (2002).
  12. Tennant, K. A., et al. The vermicelli and capellini handling tests: simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice. J Vis Exp. (41), (2010).
  13. Clarkson, A. N., et al. AMPA receptor-induced local brain-derived neurotrophic factor signaling mediates motor recovery after stroke. J Neurosci. 31 (10), 3766-3775 (2011).
  14. Clarkson, A. N., Huang, B. S., Macisaac, S. E., Mody, I., Carmichael, S. T. Reducing excessive GABA-mediated tonic inhibition promotes functional recovery after stroke. Nature. 468 (7321), 305-309 (2010).
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Citar este artigo
Roome, R. B., Vanderluit, J. L. Paw-Dragging: a Novel, Sensitive Analysis of the Mouse Cylinder Test. J. Vis. Exp. (98), e52701, doi:10.3791/52701 (2015).

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