在鸡胚的流感病毒传播
Summary
Fertile chicken eggs are widely used to produce large amounts of human influenza A virus as they provide a convenient and cost-effective system to prove high yields of virus.
Abstract
流感与约36000人死亡，每年有超过20万的住院在美国的关联。新的流感病毒株引起的突变，并重新分类连续出现复杂的病毒控制，并有必要的新颖的药物和疫苗的永久发展。流感的实验室为基础的研究中，需要对病毒的传播有可靠和具有成本效益的方法。在这里，一个全面的协议是为A型流感病毒的传播在肥沃的鸡蛋，它始终产生高滴度的病毒股票。简言之，血清的无病原体（SPF）的受精鸡蛋孵育在37℃和55-60％湿度下10 – 11天。在此期间，胚胎发育，可以很容易地用一个鸡蛋烛台监测。病毒接种是通过注射病毒原液的成使用的针的尿囊腔。后在37℃下孵育2天，将蛋冷冻至少4小时，在4℃。上方的空气囊和尿囊膜蛋壳然后小心地打开，并含有病毒的尿囊液收获。流体从碎屑清除通过离心，等分并转移至-80℃长期储存。大量（5-10毫升的病毒含有每蛋流体）和高病毒效价通常与该协议实现作出了鸡蛋的病毒制备我们的有利方法的使用，特别是用于在体外研究需要大量病毒在其中需要同样的病毒股票的高剂量。
Introduction
甲型流感仍然是一个重大威胁人类健康。这是一个潜在的破坏性呼吸系统疾病有大型的全球性负担造成了全球每年1 500,000人死亡。流感病毒是在家庭正粘病毒和携带8负义单链RNA在它们的基因组1,2。病毒基因组的高可变性（ 即抗原“漂移”）防止长期免疫力。此外，流感是抗病毒的药物3日益抗性。
2009年甲型H1N1流感大流行强调所有流感病（流感病毒，抗病毒性，推迟疫苗的生产）相关的具有挑战性的问题。该疫苗配方是每年由世界卫生组织为最有可能致病的流感病毒株（分别为H1N1，H3N2和乙型流感）4确定。因为这种方法是基于预测流感病毒株S，致病菌株偶尔错误地标识和疫苗的有效性急剧下降。此外，新型流感病毒株的出现可以绕开造成流行病2这些预防计划。
一个通用流感疫苗的创作一直难以捉摸5。因此，研究必须继续为了解肺损伤的发病机制。到设施的实验室研究，几种方法已经被开发用于病毒分离和传播6。人流感病毒可以在多种哺乳动物细胞基质进行放大。然而，在大批量生成高滴度病毒最好在胚卵实现。以下协议描述的技术为A型流感病毒的传播和存储，从现有的病毒股票。
Protocol
Representative Results
Discussion
流感导致疾病的一个大的全球负担，工作持续到了解肺损伤7的发病机制。以促进研究在这种致命的疾病，各种方法已经被开发来传播的流感病毒6。这里，我们描述了一种技术，以产生流感病毒在鸡卵。这种方法的优点是，它是高度可重复的，并导致大量的高滴度流感病毒的股票，这往往是必需的体外研究。
大多数实验室将能够快速，轻松地开发该协?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The present study was supported by the NIH grants HL120947 (P.C.), HL103868 (P.C.), and the American Heart Association Grant-in-Aid (P.C.)
Materials
| Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Cellgro | 21-040-CV | |
| serum pathogen-free (SPF) fertilized chicken eggs | VALO BioMedia | n/a | |
| humidified egg incubator | FARM iNNOVATORS | Model 2100 | |
| automatic egg turner | FARM iNNOVATORS | Model 3200 | |
| egg candler | FARM iNNOVATORS | Model 3300 | |
| 1 ml syringe | BD Bioscience | 309659 | |
| 18G needle | BD Bioscience | 305196 | |
| 20G / 22G needle | BD Bioscience | 305176 / 305156 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H3375 | |
| Ethanol, >99.5% | Sigma-Aldrich | 459844 | diluted to 70% using water |
| glue gun "Ad tech Hi Temp Project Pro" | Ad tech, Adhesive Technologies, Inc. | Model 1105 | |
| glue "Ad tech MINI SIZE, Multi Temp" | Ad tech, Adhesive Technologies, Inc. | 220-34ZIP30 | |
| MDCK cells | ATCC | CRL-2935 | |
| Washed Pooled Turkey Red Blood Cells, 10% | Lampire Biological Laboratories | 724908 |
Referências
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